【摘要】：研究背景:腦出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是腦卒中最致命的亞型,是一種高度致殘的疾病。腦出血發(fā)生后,腦內血腫可以引起一系列病理生理反應,這些反應繼而引起腦出血后進一步的氧化應激、凋亡等早期腦損傷。研究表明,早期腦損傷的程度對腦出血預后影響重大。因此研究腦出血后早期腦損傷的干預,對幫助患者腦出血后的神經功能恢復十分有必要。葛根素(Puerarin)是從豆科植物野葛的干燥根中提取的主要生物活性成分之一�，F(xiàn)已有多項研究顯示葛根素在各種急性腦損傷可能存在神經保護作用。有越來越多的證據表明,葛根素可以調控急性中樞神經系統(tǒng)(CNS)中的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信號通路,發(fā)揮其有益作用�，F(xiàn)有的研究表明,PI3K/Akt信號通路的激活與腦出血誘導的腦損傷的改善密切相關。此外,核因子κB(NF-κB)凋亡通路的激活在腦出血后的炎癥反應中起關鍵作用,而葛根素可能參與對此凋亡通路的調控。目前,葛根素在腦出血中炎癥與氧化應激機制的研究仍鮮有報道。為了探索葛根素對腦出血后腦損傷的作用,在我們的本項研究中,我們通過IV型膠原酶誘導的實驗性大鼠腦出血模型來研究葛根素對早期腦損傷的影響,并初步分析其可能的分子機制。目的:探討葛根素治療腦出血后早期腦損傷的作用以及其中可能牽涉的治療早期腦損傷的機制。方法:采用Ⅳ型膠原酶建立腦出血SD大鼠模型,并對大鼠進行隨機分組。在建立模型前后的不同時間點通過腹腔注射的方式給予葛根素預處理和后干預。在第一部分實驗中,為了探索葛根素對腦出血后大鼠的影響,我們對不同組別的大鼠分別進行神經功能缺陷情況評估(使用mNSS評分量表);并通過評估組織學損傷程度(HE染色)、腦水腫(干濕比重法測BWC)、顱內血腫量(核磁共振),并測定血腦屏障的破壞程度(依文思藍染色),以及進一步對腦細胞凋亡程度進行檢測(TUNEL檢測),初步探索葛根素對大鼠腦出血的作用。在第二部分實驗中,進行了免疫組織化學(IHC:NF-kBp65、3-NT、8-OHdG)染色及蛋白質印跡實驗(WB:NF-kB、Bcl-2、bax、Cleaved-casepase-3),隨后分別對相關信號通路的標志蛋白(免疫蛋白印跡法:NF-kBp65、PI3K/Akt)、炎性因子(ELISA:TNF-α,IL-1β,IL-6)以及腦出血后大鼠活性氧族產物(ROS試劑盒:ROS)進行檢測分析。第三部分實驗,采用PI3K信號通路抑制劑LY294002進行回復試驗(Rescue Experiment),并通過行為學評分及蛋白質印跡實驗(WB)進一步證實藥物與通路的相關性。結果:結果表明,葛根素干預能明顯減少腦出血后的早期腦損傷、改善大鼠的神經功能缺損(mNSS評分10.58±1.08v.s.9.17±1.27,p0.05)。這可能是因為葛根素能減輕組織學損傷(HE染色顯著差異)、減少顱內血腫體積(104.25±13.86 mm3 v.s.74.12±11.30 mm3,p0.05)、減輕血腦屏障破壞(EB染色:3.31±0.66μg/g腦組織v.s.2.60±0.46μg/g 腦組織,p0.05)、緩解腦水腫(BWC 測定 83.68±1.31%v.s.80.83±0.48%,p0.01),并且減輕腦細胞凋亡(p0.05)。進一步的探究發(fā)現(xiàn),葛根素可能通過顯著減少NF-κBp65的核轉位及其總磷酸化表達、抑制凋亡途徑的激活(p0.01)、并激活顱內血腫周圍腦組織中PI3K/Akt信號通路蛋白表達的上調(p0.01),降低炎性細胞因子(p0.01)和活性氧族ROS水平(p0.05)起神經保護作用。而PI3K通路抑制劑的使用,揭示了葛根素可能通過該信號通路實現(xiàn)腦神經的保護作用,并提示通路間潛在的交互作用。結論:葛根素可減輕實驗大鼠腦出血后的早期腦損傷,其機制可能與抑制NF-κB通路并激活PI3K/Akt信號通路相關。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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10 王s

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