【摘要】：目的:隨著全球人口老齡化的發(fā)展,腦卒中,已成為世界范圍內(nèi)的主要健康問題。中樞神經(jīng)系統(tǒng)中常駐的免疫細(xì)胞之一為小膠質(zhì)細(xì)胞。正常情況下,小膠質(zhì)細(xì)胞能持續(xù)監(jiān)測大腦的微環(huán)境,會(huì)對(duì)細(xì)胞外信號(hào)進(jìn)行反應(yīng),并通過吞噬作用清除細(xì)胞碎片和有毒子細(xì)胞,從而保持正常的細(xì)胞內(nèi)平衡。在缺血性腦卒中的情況下,小膠質(zhì)細(xì)胞從靜息狀態(tài)迅速轉(zhuǎn)化為活躍的“阿米巴樣”狀態(tài),當(dāng)它被激活時(shí),小膠質(zhì)細(xì)胞通常會(huì)極化為經(jīng)典激活促炎M1型(classically actived microglia)和選擇性激活抗炎M2型(alternatively actived microglia)。鑒于小膠質(zhì)細(xì)胞激活在腦缺血后腦組織損傷中起到雙向作用,促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型具有神經(jīng)保護(hù)作用的極化,研發(fā)治療腦缺血的藥物具有重要意義。丹參酮ⅡA是丹參中重要的有效活性成分,具有天然抗氧化、擴(kuò)張血管、清除自由基、抗炎和對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)等藥理作用,但是由于丹參酮ⅡA的溶解性較差,故對(duì)丹參酮ⅡA結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造得到衍生物YZD-27。本課題組對(duì)丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27腦缺血保護(hù)作用進(jìn)行研究。并從丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活和極化的調(diào)控作用角度探討其作用機(jī)制,為腦缺血的預(yù)防和治療提供新的探索思路。方法:采用大腦中動(dòng)脈栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)線栓法制備腦缺血模型。大鼠隨機(jī)分為9組:假手術(shù)組,模型組(MCAO),丹參酮ⅡA及YZD-27低劑量給藥組(1mg/kg),丹參酮ⅡA及YZD-27中劑量給藥組(3mg/kg)、丹參酮ⅡA及YZD-27高劑量給藥組(9mg/kg),丁苯酞給藥組(10mg/kg),各給藥組于缺血后5min及再灌注時(shí)兩次尾靜脈注射給藥。腦缺血2h再灌注24h后,對(duì)各組的大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,TTC染色測定腦梗塞面積,應(yīng)用ELISA檢測大鼠腦組織中的炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平,并檢測大鼠腦組織中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量變化,運(yùn)用HE染色、尼氏染色觀察腦組織病理變化、TUNEL法檢測腦組織細(xì)胞凋亡,使用免疫熒光方法觀察大鼠腦缺血后NeuN表達(dá)以及小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況和激活后的小膠質(zhì)細(xì)胞M1標(biāo)志物CD16/32及M2標(biāo)志物CD206的表達(dá)情況。建立BV2小膠質(zhì)細(xì)胞體外氧糖剝奪(oxygen and glucose deprivation,OGD)模型,采用CCK-8法檢測細(xì)胞的生存率,Real-time PCR方法檢測BV2小膠質(zhì)細(xì)胞極化分型標(biāo)志物的mRNA表達(dá)變化,利用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測NF-κB通路中關(guān)鍵蛋白iκB、p-iκB和p-p65蛋白水平表達(dá)變化。結(jié)果:1.丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27能顯著降低大鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,改善大鼠神經(jīng)缺損癥狀,縮小腦梗塞面積,抑制促炎因子IL-1β(P0.05)、IL-6(P0.01)、TNF-α(P0.01)的分泌,明顯升高大鼠缺血腦組織SOD活性(P0.001),下調(diào)MDA含量(P0.05);HE和尼氏染色顯示,丹參酮ⅡA及YZD-27處理組可以減輕神經(jīng)元細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)損傷;TUNEL染色顯示,丹參酮ⅡA及YZD-27處理組可以減少大鼠腦缺血后腦組織細(xì)胞的凋亡;免疫熒光顯示,丹參酮ⅡA及YZD-27處理組可以增加大鼠腦缺血后神經(jīng)元數(shù)目。2.丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27提高了OGD誘導(dǎo)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的生存率(P0.05),使得OGD誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞M1型標(biāo)志物(CD11b、CD32、iNOS)的mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.05)及OGD誘導(dǎo)的M2型標(biāo)志物(Arg-1、CD206、IL-10)的mRNA表達(dá)均顯著升高(P0.05);抑制了大鼠缺血腦組織中小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和M1型標(biāo)志物CD16/32的表達(dá)(P0.01),促進(jìn)了M2型標(biāo)志物CD206的表達(dá)(P0.001)。3.丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27使得iκB蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05),p-iκB和p-p65蛋白的表達(dá)均顯著下調(diào)(P0.001);加入NF-κB抑制劑BAY-11-7082后,丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27均能使p-p65蛋白顯著下調(diào)(P0.001)。結(jié)論:1.丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27具有腦缺血保護(hù)作用。2.丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27在體內(nèi)外腦缺血模型中抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活,降低激活后小膠質(zhì)細(xì)胞M1型標(biāo)志物,升高M(jìn)2型標(biāo)志物,促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞M1型向M2型的極化,可能與神經(jīng)保護(hù)作用有一定的關(guān)系。3.丹參酮ⅡA及其衍生物YZD-27通過調(diào)節(jié)iκB、p-iκB、p65、p-p65來調(diào)控BV2小膠質(zhì)細(xì)胞極化作用,這與NF-κB信號(hào)通路有一定的關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

采用線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型（middle cerebral artery occlusion，，缺血 2h 再灌注 24h 后進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，TTC 染色測定腦梗塞面積，ISA 檢測大鼠腦組織中的炎癥因子 IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，并檢測大中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量變化，運(yùn)用 HE 染染色和 TUNEL 法以及免疫熒光法觀察腦組織的病理變化。材料和方法驗(yàn)材料試藥物酮 IIA 分子量 294.34，YZD-27 分子量 418.29，由海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天學(xué)教研室張衛(wèi)東教授提供，結(jié)構(gòu)式見下圖：

YZD-27結(jié)構(gòu)

第一部分 丹參酮 IIA 及其衍生物 YZD-27 對(duì)腦缺血的保護(hù)作用研究果酮 IIA 及其衍生物 YZD-27 對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)的影組無神經(jīng)功能損失，大鼠腦缺血 2h 再灌注 24h 后，神經(jīng)行型組大鼠頭偏向患側(cè)，患側(cè)眼裂變窄，肢體無力，提尾時(shí)行為學(xué)評(píng)分為 2.21±0.41，與假手術(shù)組相比明顯升高（P＜，丹參酮 IIA 組（P＜0.05）、YZD-27 組（P＜0.05、P＜0）（P＜0.01）均能明顯降低大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，結(jié)果見

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2754195