【摘要】：目的:探討脾陰虛狀態(tài)下大鼠腸黏膜屏障的變化情況,并觀察滋補脾陰方藥干預(yù)的作用。方法:適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后,將SPF級雄性Wistar大鼠根據(jù)隨機(jī)分組原則,分為正常組6只,模型組14只。采用經(jīng)典復(fù)合因素,即以飲食不節(jié)和勞倦過度結(jié)合耗傷陰液法建立脾陰虛大鼠模型。造模時間共38天,分為3個階段:①脾氣虛階段(第1-14天):飽食1日+禁食2日(3日為一循環(huán))。每日游泳至力竭。②脾陰虛階段(第15-24天):排除不符合脾氣虛標(biāo)準(zhǔn)大鼠1只及死亡大鼠1只。將剩余12只大鼠全部納入脾陰虛階段,每日灌服傷陰藥(1 mL/1000g/只)。③滋補脾陰方藥給藥階段(第25-38天):將模型組分為脾陰虛組(6只)和滋補脾陰方藥組(6只)。滋補脾陰方藥組每日予以滋補脾陰方藥干預(yù),按照1 mL/100 g進(jìn)行胃飼。正常組與脾陰虛組予等體積生理鹽水灌胃。并于實驗第7天、第14天、第21天、第28天以及第35天收集大鼠糞便,通過16S rRNA V3-V4區(qū)測序分析大鼠腸道微生物群落的多樣性及門、屬水平上差異菌群的豐度,評價腸黏膜生物屏障變化。應(yīng)用Western blotting和qPCR技術(shù)檢測腸道緊密連接蛋白表達(dá)以評價腸黏膜機(jī)械屏障變化;ELISA法測定相關(guān)免疫細(xì)胞因子水平以反映腸黏膜免疫屏障的改變。結(jié)果:一、脾陰虛大鼠腸黏膜生物屏障變化及滋補脾陰方藥干預(yù)作用研究1.Alpha多樣性結(jié)果顯示:脾氣虛階段末,脾氣虛組相比于正常組Simpson指數(shù)與Shannon指數(shù)增加;脾陰虛階段末,脾陰虛組大鼠腸道菌群Simpson和Shannon指數(shù)變化不顯;滋補脾陰方藥給藥階段末,即第5周,脾陰虛組相比于正常組Simpson與Shannon指數(shù)均下降,滋補脾陰方藥組Simpson與Shannon指數(shù)較脾陰虛組相比增加,且滋補脾陰方藥組與正常組之間無明顯差異。2.基于門水平上差異菌群分析結(jié)果顯示,各組大鼠腸道菌群中共檢測到8種主要細(xì)菌,厚壁菌門、擬桿菌門和放線菌門是脾陰虛大鼠糞便細(xì)菌的主要組成部分。其中,厚壁菌門是最豐富的菌門。比較第1-5周各組大鼠腸道菌群中優(yōu)勢菌門變化結(jié)果顯示,各階段變化顯著。脾氣虛階段第1周,相比于正常組,脾氣虛組厚壁菌門與F/B比例明顯增加,擬桿菌門與放線菌門減少。至第2周,脾氣虛組與正常組相比,厚壁菌門和F/B 比例降低,放線菌門明顯增加,擬桿菌門有上升趨勢,但擬桿菌門變化無統(tǒng)計學(xué)意義。在脾陰虛階段,脾陰虛組大鼠腸道菌群中厚壁菌門、F/B與放線菌門比例均有上升趨勢,擬桿菌門比例有降低趨勢,但差異3.無統(tǒng)計學(xué)意義。至滋補脾陰方藥干預(yù)階段末(第5周),與正常組相比,脾陰虛組厚壁菌門與F/B水平增加,擬桿菌門和放線菌門下降;相比于脾陰虛組,滋補脾陰方藥組厚壁菌門與F/B明顯下降,擬桿菌門和放線菌門比例均升高。4.基于屬水平上差異菌群分析結(jié)果顯示,第1-5周脾陰虛大鼠腸道菌群中乳桿菌屬(Lactobacillus)整體水平下降,至第4周降至最低水平,且與前3周均具有顯著差異,第5周該菌水平相比于第1-2周下降;梭菌屬(Clostridium)相對豐度在第1-5周呈逐漸上升趨勢;脾陰虛階段,顫螺菌屬(Oscillospira)水平相比于脾氣虛階段降低,第4-5周呈增加趨勢。Metastats分析結(jié)果顯示,第1-5周各組大鼠腸道差異菌群處于不斷變化中,主要包括乳桿菌屬、顫螺菌屬、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、粘放線菌屬(Adlercreutzia)、擬桿菌屬(Bacteroides)、Anaerostipes 屬、羅氏菌屬(Rothia)、Aggregatibacter 屬、普雷沃菌屬(Prevotella)、別樣棒菌屬(Allobaculum)、丁酸弧菌屬(Butyricimonas)、Cornebacterium屬、布勞特氏菌屬、瘤胃球菌屬和ParaPrevotella屬。至第5周滋補脾陰方藥給藥階段末,比較三組腸道差異菌屬顯示:相比于正常組,脾陰虛組乳桿菌屬與Paraprevotella屬水平明顯增加,瘤胃球菌屬與粘放線菌屬明顯下降;與脾陰虛組相比較,滋補脾陰方藥組乳桿菌屬豐度水平顯著下降,瘤胃球菌屬與粘放線菌屬水平增加;滋補脾陰方藥組乳桿菌屬、瘤胃球菌屬、粘放線菌屬與Paraprevotella屬較正常組均無明顯差異。二、脾陰虛大鼠腸黏膜機(jī)械屏障變化及滋補脾陰方藥干預(yù)作用Western blotting結(jié)果顯示,脾陰虛組大鼠空腸Claudin-1、Occludin蛋白水平較正常組顯著降低,ZO-1蛋白表達(dá)有降低趨勢;滋補脾陰方藥組Claudin-1、Occludin蛋白表達(dá)相比于脾陰虛組上調(diào),ZO-1表達(dá)略有增加,但統(tǒng)計學(xué)無顯著差異。滋補脾陰方藥給藥組Claudin-1、Occludin、ZO-1表達(dá)較正常組之間未見顯著性差異。采用qPCR方法檢測大鼠空腸緊密連接蛋白的mRNA表達(dá)顯示,相比于正常組,脾陰虛組大鼠空腸Claudin-1和Occludin mRNA表達(dá)降低,ZO-1 mRNA表達(dá)有降低趨勢;滋補脾陰方藥方藥組Claudin-1、Occludin和ZO-1 mRNA表達(dá)較脾陰虛組均增加。滋補脾陰方藥給藥組Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA表達(dá)與正常組比較,未見明顯差異。三、脾陰虛大鼠腸黏膜免疫屏障變化及滋補脾陰方藥干預(yù)作用通過ELISA法檢測大鼠空腸 sIgA、IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17和 TGF-β的表達(dá)水平,結(jié)果顯示脾陰虛組空腸sIgA、IL-4、IL-10、TGF-β含量較正常組相比減少,IFN-γ和IL-17含量增加;滋補脾陰方藥組與脾陰虛組相比,sIgA、IL-4、IL-10和TGF-β表達(dá)水平均上升,IFN-y與IL-17表達(dá)下降,與正常組相比無明顯差異。結(jié)論:1.脾陰虛造模過程中大鼠腸道菌群多樣性呈動態(tài)變化:脾氣虛階段末,模型組大鼠腸道菌群多樣性增加,脾陰虛階段變化不顯,至滋補脾陰方藥給藥階段,脾陰虛大鼠腸道微生物群落多樣性降低,滋補脾陰方藥干預(yù)可增加脾陰虛大鼠腸道菌群多樣性。2.脾陰虛狀態(tài)下,機(jī)體腸道菌群數(shù)量與結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂。脾陰虛證發(fā)展過程中可以使益生菌乳桿菌屬水平降低,并在一定程度上增加致病菌梭菌屬比例,推測乳桿菌屬和梭菌屬可能是脾陰虛證發(fā)展過程中的特異性菌屬。脾陰虛狀態(tài)下產(chǎn)丁酸相關(guān)細(xì)菌(羅氏菌屬和丁酸弧菌屬)水平的下降可能影響了腸黏膜屏障功能的正常發(fā)揮。3.滋補脾陰方藥能夠通過下調(diào)厚壁菌門、F/B 比例與乳桿菌屬水平,增加擬桿菌門、放線菌門、瘤胃球菌屬與粘放線菌屬豐度,從而改善脾陰虛大鼠失調(diào)的腸道菌群結(jié)構(gòu)。4.脾陰虛大鼠空腸組織Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表達(dá)降低,可能是導(dǎo)致腸黏膜機(jī)械屏障受損的重要因素之一。滋補脾陰方藥能夠通過上調(diào)大鼠空腸組織緊密連接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1 mRNA表達(dá),并增加Claudin-1和Occludin蛋白表達(dá),改善脾陰虛大鼠腸黏膜機(jī)械屏障損傷,對腸道機(jī)械屏障具有明顯的修復(fù)作用。5.脾陰虛大鼠腸道Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞因子比例失衡,腸黏膜免疫屏障功能顯著下降。滋補脾陰方藥可以通過調(diào)節(jié)Th1/Th2、Th1 7/Treg細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子比例,有效改善脾陰虛大鼠腸黏膜免疫功能的異常變化,從而減輕腸黏膜免疫屏障損傷。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

邐南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑注．？與正常組比較，〃＞＜０．００］0逡逑２．模型評價逡逑造模結(jié)束后，對大鼠進(jìn)行生物學(xué)特征評價：正常組大鼠活動靈敏，眼神靈逡逑活，毛發(fā)有光澤，二便正常；脾陰虛組大鼠體質(zhì)量降低，背毛枯槁無光，易出逡逑現(xiàn)咬斗行為，糞便千燥，攝食量時增時減，飲水量增多，肛溫呈升高趨勢。綜逡逑上，實驗結(jié)果基本符合脾陰虛動物模型評估標(biāo)準(zhǔn)［５］。逡逑３．脾陰虛造模過程中大鼠腸道菌群動態(tài)變化情況逡逑３．１腸道菌群１６Ｓ邋ｒＲＮＡ基因測序深度評估逡逑第１－５周所有實驗樣品共產(chǎn)生４３９４２８１條有效的１６Ｓ邋ｒＲＮＡ基因序列。所逡逑測序列長度大約分布在４２４邋ｂｐ－４５３邋ｂｐ，其中數(shù)目最多的為４２５邋ｂｐ，與所測的１６Ｓ逡逑ｒＲＮＡ的Ｖ３－Ｖ４區(qū)條帶長度大致相符（見圖２－１－１）。逡逑Ｌｅｎｇｔｈ邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ逡逑

邐邋第二章實驗研究邐逡逑離的ＰＣｏＡ主坐標(biāo)分析結(jié)果顯示（見圖２－１－４），正常組、脾陰虛組以及滋補脾逡逑陰方藥組第１－５周腸道菌群差異顯著：正常組各樣本在ＰＣ１水平上（２０．８５％）逡逑呈連續(xù)性，無法明顯區(qū)分。脾陰虛組第１－５周腸道菌群組內(nèi)差異較小。脾陰虛逡逑組和滋補脾陰方藥組在ＰＣ１水平上貢獻(xiàn)度最大（分別為２１．０７％、２１．１１％）。脾逡逑陰虛組在ＰＣ１水平上可將脾氣虛階段與脾陰虛階段明顯區(qū)分，說明在脾陰虛發(fā)逡逑展過程逡逑中，腸道菌群變化顯著，且在脾氣虛階段與脾陰虛階段具有明顯差異。逡逑（ａ）邐（ｂ）逡逑

注：ｃ代表正常組，ｓ代表脾陰虛組，ｚ代表滋補脾陰方藥組。逡逑圖２－１－５第１－５周三組基于ＵｎｉＦｒａｃ距離ＮＭＤＳ非度量多維尺度未加權(quán)分析情逡逑況逡逑３．４分類學(xué)組成分析逡逑３．４．１腸道菌群在門水平上的變化逡逑２５逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 戰(zhàn)麗彬;鐘軍華;路小光;隋華;韋巍;;滋補脾陰方藥含藥血清對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報;2007年04期

2 周雯;戰(zhàn)麗彬;;基于整合藥理學(xué)平臺探究滋補脾陰方藥防治輕度認(rèn)知功能障礙的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2018年04期

3 戰(zhàn)麗彬;牛新萍;隋華;宮曉洋;;滋補脾陰方藥含藥血清對β淀粉樣蛋白損傷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及機(jī)制研究(英文)[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報;2009年03期

4 侯圣林;戰(zhàn)麗彬;孫曉霞;;滋補脾陰方藥對脾陰虛大鼠空腸組織黏蛋白表達(dá)的影響[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2019年08期

5 尹德輝,王彩霞,李德新,崔家鵬,林庶茹,夏淑杰;脾陰虛證衰老大鼠心肌、腦組織mtDNA缺失及滋補脾陰方藥作用機(jī)制的實驗研究[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2004年11期

6 孫曉霞;戰(zhàn)麗彬;侯圣林;江玉翠;楊關(guān)林;;滋補脾陰方藥對脾陰虛大鼠空腸葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1、葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白5表達(dá)的影響[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2018年05期

7 ;中國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)中藥治療糖尿病相關(guān)認(rèn)知疾病靶分子[J];中國現(xiàn)代中藥;2012年05期

8 鄔錫佩;;滋補脾陰方藥分析[J];上海中醫(yī)藥雜志;2011年06期

9 胡守玉;梁麗娜;戰(zhàn)麗彬;鄭路平;余丹;張福良;;滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病大鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2014年01期

10 曲明陽,戰(zhàn)麗彬;滋補脾陰方藥對衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及腦內(nèi)機(jī)制[J];中藥藥理與臨床;2002年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 戰(zhàn)麗彬;大熊康修;野村靖幸;;滋補脾陰方藥對快速老化模型小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的改善作用[A];第三次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2002年

2 戰(zhàn)麗彬;劉莉;宮曉洋;嵇征鴻;;脾陰虛癡呆證病結(jié)合模型建立及滋補脾陰方藥干預(yù)的實驗研究[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（上）[C];2009年

3 南豐;戰(zhàn)麗彬;呂德成;張衛(wèi)國;李鵬;黃雷;劉智全;;滋補脾陰方藥含藥血清對神經(jīng)前體細(xì)胞過氧化損傷程度的影響[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

4 梁麗娜;戰(zhàn)麗彬;胡守玉;閆云;施翔;鄭路平;隋華;;滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病腦病大鼠不同腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的研究[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會委員會議暨第七次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

5 趙淑元;戰(zhàn)麗彬;施翔;梁麗娜;隋華;鄭路平;;滋補脾陰方藥對糖尿病腦病大鼠腦組織PDHE1蛋白表達(dá)的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會委員會議暨第七次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

6 劉莉;戰(zhàn)麗彬;路小光;宮曉洋;梁麗娜;;滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠海馬蛋白質(zhì)組影響的研究[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

7 宮曉洋;戰(zhàn)麗彬;劉莉;隋華;;滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠腦內(nèi)NMDA受體mRNA表達(dá)的影響[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

8 林海燕;戰(zhàn)麗彬;宮曉洋;劉莉;隋華;;滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠不同腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的研究[A];2008年全國抗衰老與老年癡呆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

9 戰(zhàn)麗彬;鐘軍華;路小光;隋華;;滋補脾陰方藥對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

10 牛新萍;戰(zhàn)麗彬;隋華;宮曉洋;林海燕;;滋補脾陰方藥保護(hù)原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元抗Aβ神經(jīng)毒性的機(jī)制研究[A];2008年全國抗衰老與老年癡呆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 王鴻飛;滋補脾陰方藥對大鼠脊髓損傷的修復(fù)作用及機(jī)理的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

2 南豐;滋補脾陰方藥保護(hù)譜系限制性神經(jīng)前體細(xì)胞移植治療脊髓損傷的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

3 施翔;糖尿病相關(guān)認(rèn)知下降大鼠海馬蛋白質(zhì)組學(xué)分析及滋補脾陰方藥的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

4 梁麗娜;脾陰虛糖尿病認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制及滋補脾陰方藥的調(diào)控作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫曉霞;脾陰虛大鼠腸黏膜屏障變化與滋補脾陰方藥干預(yù)作用研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 富靈杰;牛腦提取液與滋補脾陰方藥治療大鼠脊髓損傷的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2004年

3 尹德輝;脾陰虛證衰老大鼠心肌、腦組織mtDNA缺失及滋補脾陰方藥調(diào)節(jié)機(jī)制的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)學(xué)院;2004年

4 王大鵬;滋補脾陰方藥抗興奮毒性作用及機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

5 劉大凱;滋補脾陰方藥對背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元缺氧損傷保護(hù)作用的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

6 嵇征鴻;滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠樹突棘的保護(hù)作用及其形態(tài)學(xué)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

7 李鵬;滋補脾陰方藥保護(hù)譜系限制性神經(jīng)前體細(xì)胞抗過氧化損傷的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

8 牛新萍;原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元中滋補脾陰方藥抗Aβ神經(jīng)毒性的保護(hù)機(jī)制[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 朱麗穎;滋補脾陰方藥抗老年性癡呆作用有效部位篩選[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

10 姜婉貞;滋補脾陰方藥對谷氨酸損傷神經(jīng)元中樹突棘的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

本文編號：2753763