十味調(diào)脂方對非酒精性脂肪性肝病大鼠MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA表達的影響

發(fā)布時間：2020-07-13 06:04

【摘要】：目的:本實驗應(yīng)用高脂飼料誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪性肝病(Nonalco hol-ic fatty liver disease,NAFLD)模型,隨機分組后分別予中藥“十味調(diào)脂方”進行實驗,西藥辛伐他汀做對照。治療后取標本觀察肝臟組織學(xué)變化;測定血清中甘油三酯(triglycerides,TG)、總膽固醇(total cholest erol,TC)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(asPartate aminotransferase,AST)水平的變化;測定肝組織TG、TC的含量;運用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠肝組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2mRNA(MMP-2mRNA)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2mRNA(TIMP-2mRNA)的表達情況,從而探討十味調(diào)脂方對NAFLD大鼠體內(nèi)TG、TC的影響及對MMP-2mRNA與TIMP-2mRNA表達的影響,探討十味調(diào)脂方對N AFLD大鼠的作用效果及可能機制,以期為中醫(yī)藥防治NAFLD提供實驗依據(jù)。方法:健康、清潔級Wistar雄性大鼠40只,體重250-280g,予普食適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,觀察大鼠一般情況,體質(zhì)健康者用于實驗。將40只大鼠隨機分為4組,正常組(N)、模型組(M)、十味調(diào)脂組(Z)、辛伐他汀組(X),每組各10只。其中除正常組予普通飼料外,其余3組均予高脂飼料,8周后,分別從各高脂飼料喂養(yǎng)組的大鼠中隨機選取1只大鼠處死,取其肝組織進行病理學(xué)檢查,以檢測高脂飼料誘導(dǎo)的NAFLD模型是否成功。確定造模成功后第二天開始予各治療組灌胃給藥,正常組與模型組予生理鹽水灌胃作對照。治療4周后處死各組大鼠,留取肝臟組織和血清標本。用HE染色觀察大鼠肝臟組織的病理形態(tài)變化;采用2,4-二硝基苯肼法(比色法)測定血清TG、TC、ALT、AST的含量,應(yīng)用色譜-可見分光光度法檢測肝組織中TG和TC的含量。運用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠肝臟中MMP-2、TIMP-2mRNA的表達水平。結(jié)果:1大鼠肝臟病理學(xué)結(jié)果:正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,中央靜脈周圍肝細胞呈輻射形式排列,形態(tài)一致整齊,肝細胞結(jié)構(gòu)正常,大小均勻,細胞核正常,位于中央,胞質(zhì)豐富;未見明顯炎癥細胞浸潤及脂肪變性、壞死。模型組大鼠肝小葉病變嚴重,偶可見炎性細胞浸潤,肝小葉形態(tài)受損,構(gòu)造不清楚,細胞索排列無規(guī)律,肝細胞水腫,胞漿內(nèi)脂肪空泡擠壓核圓,肝組織呈彌漫性脂肪變。余各治療組大鼠肝細胞脂肪性變均有不同程度好轉(zhuǎn)的趨勢。2各組大鼠血清和肝組織各指標含量比較與正常組相比較,模型組大鼠血清tg、tc、alt、ast和肝組織tg、tc含量顯著升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);與模型組相比較,西藥組和中藥組大鼠血清tg、tc、alt、ast及肝組織tg、tc含量明顯下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);與中藥組相比,西藥組大鼠血清tg、tc含量顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);相比于西藥組大鼠中藥組大鼠肝組織中tg、tc含量顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);兩組血清alt、ast差異無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。3各組大鼠肝臟mmp-2mrna、timp-2mrna表達水平各組大鼠mmp-2mrna表達無統(tǒng)計學(xué)差異。與正常組相比模型組timp-2mrna呈高表達狀態(tài),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);mmp-2/timp-2比值降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);模型組與中藥組相比timp-2mrna表達降低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);中藥組mmp-2/timp-2比值較模型組比值顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。與模型組比較,西藥組大鼠timp-2mrna表達明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);而mmp-2/timp-2比值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。與中藥組相比較,西藥組timp-2mrna水平升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);mmp-2/timp-2比值中藥組較西藥組顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1nafld模型大鼠血清中tg、tc、alt、ast以及肝組織中tg、tc含量較正常組明顯升高,可能是引起大鼠肝細胞脂肪性改變、炎性細胞浸潤、肝細胞纖維化改變等病理變化的重要因素。2nafld模型大鼠肝臟中mmp-2/timp-2比值的變化,是脂質(zhì)沉積肝細胞引起肝細胞炎性改變、纖維化等嚴重并發(fā)癥的重要發(fā)病機制之一。3十味調(diào)脂方可能是通過降低NAFLD模型大鼠體內(nèi)血脂的含量,上調(diào)MMP-2/TIMP-2比值,從而緩解肝臟脂質(zhì)變性加速膠原的降解,減輕細胞外基質(zhì)(ECM)的沉積,達到緩解肝臟纖維化的病變過程,為中醫(yī)藥防治NAFLD提供實驗依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：