發(fā)布時(shí)間：2020-07-13 01:06

【摘要】：照山白(Rhododendron micranthum),為杜鵑花科、杜鵑花屬植物,別名照白杜鵑、小花杜鵑。分布于中國(guó)東北、華北及西北地區(qū),朝鮮也有分布。照山白以枝葉入藥,是中藥大辭典收載的常用有毒藥用植物。在鎮(zhèn)痛方面有著悠久的藥用歷史,主要用于治療慢型氣管炎、風(fēng)濕痹痛、腰痛、痛經(jīng)、產(chǎn)后關(guān)節(jié)痛、痢疾、骨折等。近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)該科多種植物進(jìn)行了化學(xué)成分和藥理活性研究,其成分具有豐富的結(jié)構(gòu)多樣性,主要包括木藜蘆烷型及其相關(guān)二萜,還含有黃酮,三萜,酚類及揮發(fā)油等多種物質(zhì)。為了進(jìn)一步研究照山白的化學(xué)成分及其生物活性,本課題對(duì)照山白的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化,對(duì)分離得到的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和活性研究。目的:本課題以照山白枝葉為研究對(duì)象,采用反復(fù)硅膠柱色譜、中壓反相柱色譜、凝膠Sephadex LH-20柱色譜和制備HPLC等多種色譜技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化,對(duì)分離得到的單體化合物用現(xiàn)代波譜技術(shù)(UV、IR、MS、1D-NMR、2D-NMR、CD等)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。對(duì)分離得到的二萜類化合物進(jìn)行鎮(zhèn)痛活性篩選,以期獲得結(jié)構(gòu)新穎的鎮(zhèn)痛活性化合物。方法:干燥的照山白枝葉110 kg粉碎后,用95%乙醇回流提取三次,提取物減壓回收得浸膏12 kg,將浸膏用水分散得混懸液,依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取液濃縮后分別得到石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇四個(gè)極性部位。采用大孔樹脂柱色譜、硅膠柱色譜、中壓反相柱色譜、凝膠Sephadex LH-20柱色譜和制備高效液相色譜法對(duì)乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化,利用示差折光檢測(cè)器對(duì)二萜進(jìn)行快速識(shí)別和分離,借助紫外檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行純度分析,采用UV、IR、HRMS、~1H-NMR、~(13)C-NMR、DEPT、~1H-~1H COSY、HMQC、HMBC、NOESY、CD等波譜學(xué)方法對(duì)單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。對(duì)分離得到的二萜類化合物通過醋酸扭體實(shí)驗(yàn)測(cè)定其鎮(zhèn)痛活性。結(jié)果:通過對(duì)照山白乙酸乙酯部位的系統(tǒng)分離,共得到51個(gè)化合物。包括18個(gè)二萜類化合物(1*-3*,4-18),12個(gè)木脂素類化合物(19-30),4個(gè)倍半萜類化合物(31-34),13個(gè)酚類化合物(35-47),以及4個(gè)其他類化合物(48-51)。鑒定結(jié)果如下:6-deoxy-grayanotoxin XVIII 3-O-β-D-glucoside(1*),6-deoxy-1-epi-graynotoxin XVIII 3-O-β-D-glucoside(2*),grayanotoxin XVIII 6-O-β-D-glucoside(3*),grayanotoxin I(4),grayanotoxin III(5),grayanotoxin II(6),grayan otoxin IV(7),grayanotoxin VII(8),grayanotoxin IX(9),grayanotoxin VIII(10),grayanotoxin XVIII(11),pierisformosin A(12),6-deoxy-1-epigrayanotoxin XVII(13),kalmanol(14),grayanoside B(15),pierisformos ide B(16),pierisformoside F(17),pieroside B(18),(7S,8S)-4-hydroxy-9'-O-(α-L-rhamnopyranosyl)-3,3',5,-trimethoxy-8-O-4'-neoligan(19),icariside E1(erythro)(20),icariside E2(threo)(21),(2S,3R)-2,3-dihydro-3-hydroxy methyl-7-methoxy-2-(4'-hydroxy-3'-methoxyphenyl)-5-benzofuranpr-opanol3a-O-α-L-rhamnopy-ranoside(22),(8R,7'S,8'S)-5,5'-dimethoxy-7-oxolaricir esinol 9'-O-β-D-xylopyranoside(23),schizandriside(24),(-)-lyoniresinol3α-O-β-D-xylopyranosi-de(25),(-)-secoisolariciresinol-O-α-L-rhamnopyranosi de(26),ssioriside(27),(-)-secoisolariciresinol-9-O-β-D-xylopyranoside(28),prupaside(29),alutaceuol(30),3β-[(-β-D-glucpyrnosyl)o-xy]eudesma-4(14).11(13)-dien-12-ol(31),zedoarolide B(32),10,11-dihydro-10,11-dihyd roxynerolidol(33),schensianol A(34),esculetin(35),sco-polin(36),2-[4-(3-Hydroxyproxypropyl)-2-methoxphenoxy]propane-1,3-di-ol(37),threo-3-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-ethoxypropane-1,2-diol-(38),3-(4-hyd roxy-3,5-dimethoxyphenyl)propane-1,2-diol(39),pisoninol(40),2-phenyl ethyl-β-D-glucopyranoside(41),4-O-β-D-glucopyranosyl-2-O-methylphloroa cetophenone(42),4-ally-2,6-dimethoxyphenyl 1-O-β-D-apiofuranosyl-(1''-6')-O-β-D-glucopyranoside(43),eugeny l-O-β-D-apiofuranosyl-(1''-6')-O-β-D-g lucopyranoside(44),4-allyl-2,6-dimethoxyphenolglucoside(45),benzyl2-h ydroxy-4-O-β-D-glucopyranosyl-benzoate(46),amarusine A(47),9ξ-O-β-D-glucopyranosyloxy-5-megastigmen-4-one(48),(-)-3-oxo-α-ionyl-O-β-D-glu copyranoside(49),(Z)-3-Hexenylβ-D-glucopyranoside(50),oct-1-en-3-ylβ-glucopyranoside(51)。對(duì)化合物1、2、4-18進(jìn)行了小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn),在10 mg/kg劑量下化合物1,12有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛活性(*P0.05),化合物6-11、13、14則出現(xiàn)明顯的毒副作用。降低劑量為1.0 mg/kg后,化合物6、7、8、10、11、13的鎮(zhèn)痛抑制率分別能達(dá)到54.3%、42.9%、27.1%、12.1%、30.0%、38.6%,化合物9,14仍有明顯的毒副作用。再降低劑量為0.1 mg/kg后,化合物9,14的鎮(zhèn)痛抑制率分別能達(dá)到44.3%,42.9%。在0.1 mg/kg劑量下,化合物5的鎮(zhèn)痛抑制率為70%,化合物4表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛活性,鎮(zhèn)痛抑制率為96.4%(**P0.01),而相同劑量下嗎啡的鎮(zhèn)痛抑制率為63.3%。結(jié)論:本研究通過合理利用各種分離手段,對(duì)照山白乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了系統(tǒng)分離,共鑒定了51個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。包括18個(gè)二萜類化合物,12個(gè)木脂素類化合物,4個(gè)倍半萜類化合物,13個(gè)酚類化合物,4個(gè)其他類化合物。其中新化合物3個(gè)(1*-3*)。從該屬首次分離得到的化合物有27個(gè),分別為:12,16,17,19-24,26,28,29,31-34,37-40,43-49;從該植物中首次分離得到的化合物有5個(gè),分別為:15,18,25,27,30。從照山白中分離得到的3個(gè)新二萜類化合物均為二萜葡萄糖苷,沒有發(fā)現(xiàn)新的二萜苷元。其中化合物3是首次發(fā)現(xiàn)的葡萄糖連在6位羥基上的木藜蘆烷型二萜苷。對(duì)分離得到的二萜類化合物進(jìn)行醋酸扭體實(shí)驗(yàn),根據(jù)鎮(zhèn)痛活性的結(jié)果,初步總結(jié)了木藜蘆烷型二萜鎮(zhèn)痛活性的構(gòu)效關(guān)系,即(1)二萜苷的活性比苷元弱,毒性也較低;(2)3β-OH,5β-OH,10β-CH3為必須基團(tuán);(3)10,20位雙鍵取代活性降低;(4)1α-OH比1β-OH活性好;(5)14位OAc取代較OH取代活性好;(6)15,16位成雙鍵,對(duì)活性沒有影響。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;R285
【圖文】：

化合物1的核磁共振氫譜

化合物1的核磁共振碳譜

化合物1的異核單量子相關(guān)譜

【參考文獻(xiàn)】

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1 李干鵬;羅陽(yáng);李尚秀;楊淬;田倩;左馬怡;;小葉杜鵑花的化學(xué)成分研究[J];中草藥;2014年12期

2 Mudasir Ahmad Tantry;Reehana Khan;Seema Akbar;Abdul Sami Shawl;Mohammed Khalid Siddiqui;;Further constituents from Rhododendron lepidotum L[J];Chinese Chemical Letters;2010年03期

3 周三云;李蓉濤;;杜鵑花屬植物化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J];云南中醫(yī)中藥雜志;2008年05期

本文編號(hào)：2752736