蛇傷膠囊對竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細胞AMPK、NF-κB、ICAM-1和MCP-1表達的影響

發(fā)布時間：2020-07-12 19:58

【摘要】：目的觀察竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達以及蛇傷膠囊對其的影響,以期基于AMPK/NF-κB信號通路探討竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)機制及蛇傷膠囊針對此過程的調(diào)控作用,為蛇傷膠囊的臨床應(yīng)用和推廣提供實驗依據(jù)。方法制備蛇傷膠囊兔含藥血清及復制竹葉青蛇傷的細胞模型。設(shè)置空白組(KB)、模型組(MX)和蛇傷膠囊含藥血清低、中、高濃度組(DY、ZY、GY)5組,每組分別10個樣本。在細胞實驗中,KB組加入10%正常兔血清培養(yǎng),MX組在KB組的基礎(chǔ)上加入5ug/ml竹葉青蛇毒液培養(yǎng),DY、ZY和GY組在MX組基礎(chǔ)上培養(yǎng)6小時后分別加入5%、10%和15%的含中藥兔血清繼續(xù)培養(yǎng)。各組分別培養(yǎng)72小時后,收集細胞上清液,以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)液中的AMPK、ICAM-1和MCP-1含量;收集細胞,提取總蛋白,以蛋白免疫印跡法(Western Blot)測定各組血管內(nèi)皮細胞AMPK、NF-κBP65的蛋白表達。結(jié)果 1.ELISA檢測ICAM-1和MCP-1表達情況:MX組ICAM-1和MCP-1的表達水平相對KB組均出現(xiàn)了顯著的升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);給予蛇傷膠囊干預治療后,與MX組比較,ZY組ICAM-1和MCP-1明顯下調(diào),差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。2.ELISA檢測AMPK表達情況:MX組的AMPK表達水平相對KB組顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);予蛇傷膠囊干預治療后,治療組AMPK水平相對MX組出現(xiàn)不同程度升高,其中以ZY組與GY差異有統(tǒng)計學意義(分別為P0.05和P＜0.01)。3.Western Blot檢測AMPK和NF-κB p65蛋白表達情況:與KB組相比,MX組AMPK的表達下調(diào)而NF-κB p65的表達上調(diào),差異均具統(tǒng)計學意義(分別為P0.05和P0.01);給予蛇傷膠囊干預治療后,與MX組相比,治療組AMPK的表達呈不同程度升高,其中以GY組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),治療組NF-κBP65的表達下調(diào),以ZY組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論竹葉青蛇毒能夠誘導人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)產(chǎn)生炎癥反應(yīng);通過對AMPK、NF-κB以及其下游介質(zhì)ICAM-1和MCP-1的調(diào)控可能是蛇傷膠囊治療竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)的機制之一。
【學位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285
【圖文】：

蛋白表達,情況