蛇傷膠囊對(duì)竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細(xì)胞AMPK、NF-κB、ICAM-1和MCP-1表達(dá)的影響

發(fā)布時(shí)間：2020-07-12 19:58

【摘要】：目的觀察竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細(xì)胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達(dá)以及蛇傷膠囊對(duì)其的影響,以期基于AMPK/NF-κB信號(hào)通路探討竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)機(jī)制及蛇傷膠囊針對(duì)此過程的調(diào)控作用,為蛇傷膠囊的臨床應(yīng)用和推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法制備蛇傷膠囊兔含藥血清及復(fù)制竹葉青蛇傷的細(xì)胞模型。設(shè)置空白組(KB)、模型組(MX)和蛇傷膠囊含藥血清低、中、高濃度組(DY、ZY、GY)5組,每組分別10個(gè)樣本。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,KB組加入10%正常兔血清培養(yǎng),MX組在KB組的基礎(chǔ)上加入5ug/ml竹葉青蛇毒液培養(yǎng),DY、ZY和GY組在MX組基礎(chǔ)上培養(yǎng)6小時(shí)后分別加入5%、10%和15%的含中藥兔血清繼續(xù)培養(yǎng)。各組分別培養(yǎng)72小時(shí)后,收集細(xì)胞上清液,以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中的AMPK、ICAM-1和MCP-1含量;收集細(xì)胞,提取總蛋白,以蛋白免疫印跡法(Western Blot)測(cè)定各組血管內(nèi)皮細(xì)胞AMPK、NF-κBP65的蛋白表達(dá)。結(jié)果 1.ELISA檢測(cè)ICAM-1和MCP-1表達(dá)情況:MX組ICAM-1和MCP-1的表達(dá)水平相對(duì)KB組均出現(xiàn)了顯著的升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);給予蛇傷膠囊干預(yù)治療后,與MX組比較,ZY組ICAM-1和MCP-1明顯下調(diào),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.ELISA檢測(cè)AMPK表達(dá)情況:MX組的AMPK表達(dá)水平相對(duì)KB組顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);予蛇傷膠囊干預(yù)治療后,治療組AMPK水平相對(duì)MX組出現(xiàn)不同程度升高,其中以ZY組與GY差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P0.05和P＜0.01)。3.Western Blot檢測(cè)AMPK和NF-κB p65蛋白表達(dá)情況:與KB組相比,MX組AMPK的表達(dá)下調(diào)而NF-κB p65的表達(dá)上調(diào),差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為P0.05和P0.01);給予蛇傷膠囊干預(yù)治療后,與MX組相比,治療組AMPK的表達(dá)呈不同程度升高,其中以GY組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),治療組NF-κBP65的表達(dá)下調(diào),以ZY組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論竹葉青蛇毒能夠誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)產(chǎn)生炎癥反應(yīng);通過對(duì)AMPK、NF-κB以及其下游介質(zhì)ICAM-1和MCP-1的調(diào)控可能是蛇傷膠囊治療竹葉青蛇傷血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

蛋白表達(dá),情況