【摘要】：高血脂癥是造成動脈粥樣硬化的主要危險因素,可進一步導(dǎo)致一系列心腦血管疾病的發(fā)生,嚴重危害人類的健康。他汀類藥物是臨床上使用最為廣泛且最為安全有效的降脂藥物,但仍有一些醫(yī)療需求未得到滿足。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是近年來最具有開發(fā)前景的降脂靶點,其抑制劑有望成為新的革命性降脂藥物。目前PCSK9抑制劑的研發(fā)多集中于生物制劑,小分子抑制劑的研發(fā)還處在起步階段,機遇與挑戰(zhàn)并存。中醫(yī)藥在復(fù)雜性疾病,特別是一些心腦血管慢性疾病的治療上,往往具有其獨特的優(yōu)勢�，F(xiàn)代中醫(yī)學(xué)認為,高血脂癥與中醫(yī)學(xué)中的“瘀癥”密切相關(guān),因此,可從具有“散結(jié)化瘀”功效的傳統(tǒng)中藥中尋找和開發(fā)天然小分子降脂藥物。本文對具有“化痰散結(jié)”功效的澤漆(Euphorbia helioscopia),具有“活血通經(jīng)”功效的南蛇藤(Celastrus orbiculatus)以及具有“散瘀通結(jié)”功效的王瓜根(Trichosanthes cucumeroides)進行了化學(xué)成分的研究,綜合運用Silica gel、Chromatorex C_(18)、Sephadex LH-20、TSK gel Toyopearl HW-40F及半制備高效液相色譜等分離手段對上述植物的提取物進行分離純化,并通過波譜學(xué)技術(shù)、化學(xué)轉(zhuǎn)化、圓二色譜(CD)、X-射線單晶衍射分析、Mosher法等方法鑒定了143個化合物,其中包括21個新化合物。此外,通過結(jié)構(gòu)修飾獲得了21個假白欖烷型大環(huán)二萜的衍生物,進一步擴增了化合物庫。對所鑒定的化合物進行了體外降脂活性的測試,并對其中2個活性顯著的化合物進行了體內(nèi)降脂活性的評價及作用機制的探究。從澤漆(E.helioscopia)全草的95%乙醇提取物中分離鑒定了65個化合物,包括35個假白欖烷型大環(huán)二萜(A1-A6,A15-A43),2個續(xù)隨子烷型大環(huán)二萜(A7,A44),28個三萜及其他類型化合物(A8-A14,A45-A65)。其中化合物A1-A14為新化合物,它們的絕對構(gòu)型通過化學(xué)轉(zhuǎn)化、單晶X-ray、CD、Mosher法等多種方法確定。對于量豐化合物A33,嘗試通過結(jié)構(gòu)修飾以擴增假白欖烷型大環(huán)二萜化合物庫。通過對A33進行弱堿堿水解獲得C-14位單去乙�；闹鳟a(chǎn)物A66,再對A66的14位羥基進行一系列酰化反應(yīng)共獲得21個衍生物(A67-A87)。從南蛇藤(C.orbiculatus)莖藤的95%乙醇提取物中分離鑒定了71個化合物,包括15個對映貝殼杉烷型二萜(B1,B2,B24-B36),17個松香烷型二萜(B3,B8-B23),2個對映海松烷型二萜(B4,B5),1個對映半日花烷型二萜(B6),16個齊墩果烷型三萜(B37-B52),3個烏蘇烷型三萜(B7,B53,B54),12個木栓烷型三萜(B55-B66),3個甾體(B67-B69)和2個黃酮(B70,B71)。其中化合物B1-B7為新化合物,它們的絕對構(gòu)型主要通過單晶X-ray實驗確定。從王瓜(T.cucumeroides)根的95%乙醇提取物中分離鑒定了7個葫蘆烷型三萜或其皂苷類化合物(C1-C7),均為已知化合物。對分離及結(jié)構(gòu)修飾獲得的化合物進行了體外降脂活性的篩選,化合物A22、A31、A36、A44、A56、A68、B43、B46、B58和C4顯示出了較為顯著的降脂活性(脂質(zhì)吞噬率大于1.3)。同時,通過化合物細胞水平的脂質(zhì)吞噬率,初步總結(jié)出假白欖烷型大環(huán)二萜的構(gòu)效關(guān)系:9位羰基被乙�；〈�14,15位間位阻較小時,活性顯著提升;7,8位間存在雙鍵,使得C-5至C-9位羰基間形成長共軛體系時,活性顯著提升。葫蘆烷型三萜的構(gòu)效關(guān)系:23,24位雙鍵被氫化后,活性提升;24位被羥基取代后,活性降低。進一步對降脂活性較為顯著的化合物進行了LDLR和PCSK9蛋白表達的實驗測試,結(jié)果顯示,不同結(jié)構(gòu)類型的化合物均可提升LDLR蛋白的表達,但對PCSK9蛋白的調(diào)控作用存在差異。其中三萜類化合物A56、B43、B46、B58和C4可降低PCSK9蛋白的表達,是潛在的天然來源的小分子PCSK9抑制劑�；衔顰31和C4的動物實驗顯示,它們均可顯著降低金黃地鼠血漿中的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的濃度,此外,C4還可降低甘油三酯的濃度,顯示出了顯著的體內(nèi)降脂效果。機制研究表明,化合物A31是通過激活ERK通路,增加ERK蛋白磷酸化水平,進而提高LDLR mRNA穩(wěn)定性,升高LDLR蛋白水平,最終增加脂質(zhì)吞噬能力,發(fā)揮其降脂作用的。而化合物C4則是通過提升LDLR基因啟動子的活性,降低PCSK9基因啟動子的活性,進而影響各自mRNA的水平和蛋白表達水平,發(fā)揮其降脂作用的。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院上海藥物研究所)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

圖 1 本課題研究基本思路基于以上研究思路，本課題選擇了具有化痰散結(jié)功效的大戟科大戟屬植物澤漆，具有活血通經(jīng)功效的衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物南蛇藤以及具有散瘀通結(jié)功效的葫蘆科栝樓屬植物王瓜根進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，以期發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的降脂活性成分，并進一步開發(fā)藥用植物的藥用價值。

大戟科（Euphorbiaceae）大戟屬（Euphorbia）廣泛分布于世界各地，和南美洲生長最多，全球大約有 2000 余種，是被子植物中特大屬之一約有 80 種大戟屬植物，主要分布在西北的干旱地區(qū)以及西南的橫斷山屬植物也被公認為是被子植物中最難分類的屬之一，不僅僅因為其種類于其生長環(huán)境復(fù)雜，同時變異性大。該屬植物往往具有重要的藥用價值中藥柏大戟、狼毒大戟等，它們在臨床上的應(yīng)用已有數(shù)千年，民間常用腫、牛皮鮮、癌癥、結(jié)核、疥瘡等[22]。澤漆，又名貓兒眼睛草、燈臺草等，為大戟科大戟屬植物澤漆（Euphioscopia L.）的全草，我國大部分地區(qū)均產(chǎn)，生長在山溝、路旁、荒野及濕生或二年生草本，全草長約 30 cm。新鮮的澤漆通常含白色乳汁，因此草；澤漆藥材呈黃綠色，質(zhì)脆且莖表面有縱紋。味辛、苦，性微寒，有、大腸、小腸經(jīng)。據(jù)《中華本草》記載，澤漆具有行水消腫、化痰散結(jié)蟲的功效，主要用于治療水氣腫滿、痰多咳喘、肺結(jié)核、菌痢、癬瘡等[

圖 1.9 化合物 A1 的 X-射線單晶衍射結(jié)構(gòu)化合物 A1 在 CDCl3中的1H NMR（400 MHz）和13C NMR（100 MA1 in Hz)CNo.H(J in Hz)45 m 43.5 t 18 1.10 s 98 dd (15.3, 8.2) 19 1.28 s m 38.0 d 20 0.91 d (7.1) dd (7.0, 2.6) 84.1 d 3-OBz-1 dd (8.6, 7.0) 44.3 d 2 dq (8.6, 1.7) 122.7 d 3, 7 7.99 br d (7.4)135.7 s 4, 6 7.42 t (7.4) dd (11.5, 4.2) 73.2 d 5 7.55 t (7.4) 16 dd (15.9, 11.5) 42.8 t 14-OAc-1 65 dd (15.9, 4.2) 2 2.15 s

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本文編號：2750728