發(fā)布時間：2020-07-11 14:52

【摘要】：【目的】觀察二氫楊梅素(Dihydromyricetin,DMY)對人骨肉瘤裸鼠移植瘤生長和瓦博格效應(yīng)效應(yīng)的影響,并初步探討其可能的機(jī)制�！痉椒ā吭诼闶蟾共肯路狡は陆臃N人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63細(xì)胞,建立人骨肉瘤移植瘤的裸鼠模型。將已經(jīng)成功移植人骨肉瘤的裸鼠隨機(jī)分為移植瘤模型組、DMY(50、100和200 mg/kg/d)處理組,每組6只裸鼠,分別給予生理鹽水、50、100和200 mg/kg/d DMY灌胃處理,連續(xù)30天。觀察裸鼠的一般情況和移植瘤的生長情況。裸鼠處死后,將移植瘤取出,稱量移植瘤的重量,測量移植瘤的體積,并計(jì)算腫瘤生長抑制率。移植瘤組織勻漿中的葡萄糖含量和乳酸含量及乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性水平的檢測采用比色法。人骨肉瘤移植瘤體中Ki67的表達(dá)水平采用免疫組化和Western blot檢測。采用Western blot檢測人骨肉瘤裸鼠移植瘤中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、己糖激酶2(Hexokinase 2,HK2)、乳酸脫氫酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)、總Akt和p-Akt的表達(dá)�！窘Y(jié)果】1.所有接種人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63細(xì)胞的裸鼠,在接種的腹部下方均出現(xiàn)了圓形的隆起,在接種后10天左右在腹部可摸到腫瘤結(jié)節(jié),結(jié)節(jié)大小約72.15±5.42 mm~3,移植瘤結(jié)節(jié)的大小隨著時間的延長而不斷地增加。移植瘤結(jié)節(jié)的邊緣不整齊,形狀多為不規(guī)則形,結(jié)節(jié)的質(zhì)地較硬,但活動度尚可。人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63細(xì)胞裸鼠移植瘤模型的成功率為100%。移植瘤模型組裸鼠出現(xiàn)了輕微的進(jìn)食減少、出現(xiàn)精神萎靡、對刺激的反應(yīng)有寫遲鈍和體重減輕等情況,但沒有觀察到明顯的惡病質(zhì)等情況。所有的裸鼠沒有發(fā)現(xiàn)其他的明顯異常的行為。DMY(100和200 mg/kg/d)組裸鼠腹部的移植瘤結(jié)節(jié)與移植瘤模型組比較明顯減小,裸鼠食欲狀態(tài)、反應(yīng)能力和精神狀態(tài)與移植瘤模型組比較均有明顯改善。所有移植瘤組織經(jīng)病理切片H-E染色證實(shí)均為骨肉瘤。2.DMY(100和200 mg/kg/d)組移植瘤的重量和體積與移植瘤模型組比較顯著降低(P0.05)。與移植瘤模型組比較,DMY(50 mg/kg/d)組移植瘤的重量和體積均沒有顯著性差異(P0.05)。DMY(50、100和200 mg/kg/d)的腫瘤抑制率逐漸增加,腫瘤抑制率分別為2.59%、33.26%和59.61%。3.與移植瘤模型組比較,DMY(100和200 mg/kg/d)組人骨肉瘤裸鼠移植瘤中表達(dá)Ki67的陽性細(xì)胞百分率和Ki67的蛋白表達(dá)水平均顯著性降低(均P0.05)。而與移植瘤模型組比較,DMY(50 mg/kg/d)組骨肉瘤裸鼠移植瘤中表達(dá)Ki67的陽性細(xì)胞百分率和Ki67的蛋白表達(dá)水平均沒有顯著性差異(均P0.05)。4.與移植瘤模型組比較,DMY(100和200 mg/kg/d)組人骨肉瘤裸鼠移植瘤中葡萄糖水平顯著增加(P0.05),乳酸水平和LDH活性顯著性降低(均P0.05)。而DMY(50 mg/kg/d)組骨肉瘤裸鼠移植瘤中葡萄糖水平、乳酸水平和LDH活性與移植瘤模型組比較均沒有顯著性差異(均P0.05)。5.Western blot結(jié)果顯示,DMY(100和200 mg/kg/d)組人骨肉瘤裸鼠移植瘤中HIF-1α、HK2、LDHA和p-Akt蛋白的表達(dá)水平與移植瘤模型組比較均顯著性下調(diào)(均P0.05);DMY(50、100和200 mg/kg/d)組人骨肉瘤裸鼠移植瘤中總Akt蛋白的表達(dá)水平與移植瘤模型組比較沒有顯著性差異(均P0.05)。DMY(50 mg/kg/d)組人骨肉瘤裸鼠移植瘤中HIF-1α、HK2、LDHA和p-Akt的蛋白表達(dá)水平與移植瘤模型組比較均沒有顯著性差異(均P0.05)�！窘Y(jié)論】二氫楊梅素抑制了人骨肉瘤MG-63細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長及Warburg效應(yīng),其機(jī)制可能涉及到PI3K/Akt信號通路。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 骨肉瘤移植瘤裸鼠的外觀和病理改變。(A)：大體標(biāo)本；(B)：H-E 染色（×20）3.2 DMY 對骨肉瘤裸鼠移植瘤重量的影響末次 DMY 處理結(jié)束后 3 天，通過脫頸椎的辦法處死裸鼠，切開皮膚小心出移植瘤組織，稱量移植瘤的重量，結(jié)果如圖 2 所示：與移植瘤模型組比較MY（100 和 200 mg/kg/d）組移植瘤的重量顯著性降低（P<0.05）。而 DMY（g/kg/d）組移植瘤的重量與移植瘤模型組比較雖有降低的趨勢，但沒有差P>0.05）。

圖 2 DMY 對骨肉瘤裸鼠移植瘤重量的影響。數(shù)據(jù)均以 x ± S 表示，n=6。*P㩳0.05，與模型組比較。.3 DMY 對骨肉瘤裸鼠移植瘤體積的影響在末次 DMY 處理結(jié)束后 3 天，通過脫頸椎的辦法處死裸鼠，切開皮膚小取出移植瘤組織，稱量其長短徑，計(jì)算其體積，結(jié)果如圖 3 所示：與移植瘤組比較，DMY（100 和 200 mg/kg/d）組移植瘤的體積顯著性降低（均 P<0.05 DMY（50 mg/kg/d）組移植瘤的體積與移植瘤模型組比較雖有降低的趨勢有差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

圖 2 DMY 對骨肉瘤裸鼠移植瘤重量的影響。均以 x ± S 表示，n=6。*P㩳0.05，與模型組比肉瘤裸鼠移植瘤體積的影響處理結(jié)束后 3 天，通過脫頸椎的辦法處死裸，稱量其長短徑，計(jì)算其體積，結(jié)果如圖 100 和 200 mg/kg/d）組移植瘤的體積顯著性kg/d）組移植瘤的體積與移植瘤模型組比較學(xué)意義（P>0.05）。

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