【摘要】：目的:通過高脂飲食(high-fat diet,HFD)誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型和3T3-L1小鼠前脂肪細胞模型,研究牛蒡子苷元(Arctigenin)對降低體重、下調(diào)血脂的作用,以及對脂肪細胞增殖分化、脂肪合成分解代謝的影響;并進一步探討牛蒡子苷元調(diào)控脂肪代謝的作用機制。方法:(1)復(fù)制HFD誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型,隨機分為模型對照組、牛蒡子苷元低劑量組、牛蒡子苷元高劑量組和陽性藥物(阿托伐他汀)組,另以普通飼料喂養(yǎng)的大鼠為正常對照組,每組8只。各組藥物干預(yù)后,記錄體重和臟器重量變化,測定血脂水平,切片觀察肝臟細胞和脂肪細胞病理改變。(2)采用不同濃度牛蒡子苷元(12.5-100 μmol/L)作用對數(shù)生長期的3T3-L1前脂肪細胞48 h,CCK8法檢測細胞增殖情況。誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細胞成脂分化,在分化期間加入牛蒡子苷元(25-100μmol/L)處理細胞8天,通過油紅O染色檢測脂肪細胞分化程度和脂質(zhì)合成,實時熒光定量PCR法檢測分化調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子及其靶基因的表達。(3)3T3-L1前脂肪細胞被誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞后,加入不同濃度牛蒡子苷元作用48 h,測定細胞總脂質(zhì)、甘油三酯和甘油含量,實時熒光定量PCR法和Western印跡法檢測腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信號通路蛋白表達水平及活化情況。結(jié)果:(1)動物實驗中,與模型對照組相比,牛蒡子苷元高劑量治療組體重減輕,肝指數(shù)及附睪脂肪重量降低,血清總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)顯著下調(diào),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-L)明顯升高,肝臟脂肪變性明顯減輕。(2)牛蒡子苷元在12.5-100 μmol/L濃度范圍對3T3-L1前脂肪細胞的增殖活性無顯著性影響,但顯著抑制細胞成脂分化。在25、50、100 μmol/L濃度下,3T3-L1前脂肪細胞的成脂分化率分別為對照組的78.31%、44.85%、17.58%。(3)牛蒡子苷元在25-100 μmol/L濃度范圍內(nèi)顯著抑制成熟脂肪細胞總脂質(zhì)和TG合成,抑制甘油釋放。(4)在脂肪細胞分化過程中,牛蒡子苷元劑量依賴性明顯下調(diào)脂肪細胞分化調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα、PPARγ、SREBP-1c 以及其相應(yīng)的靶基因 LPL、AP2、FAS、ACC、Adiponectin、LXR mRNA水平。(5)牛蒡子苷元顯著上調(diào)3T3-L1成熟脂肪細胞AMPK磷酸化水平,提示AMPK信號通路被激活。信號通路下游與脂質(zhì)生成相關(guān)的基因和蛋白(包括ACC、FAS、LPL、PPARγ和C/EBPα)以及與脂肪水解相關(guān)的基因(HSL)的表達水平下調(diào)。同時,AMPK的激活也導(dǎo)致ACC磷酸化水平提高,其下游與脂肪酸氧化相關(guān)的基因(CPT-1)mRNA水平上調(diào)。結(jié)論:牛蒡子苷元具有明顯的抑制脂質(zhì)生成、抑制脂肪分解、減重降脂的作用。牛蒡子苷元通過激活A(yù)MPK信號通路,抑制脂質(zhì)生成和分解基因表達,上調(diào)脂肪酸氧化相關(guān)基因表達,起到調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2750465