發(fā)布時(shí)間：2020-07-11 05:01

【摘要】：目的:通過建立重癥急性胰腺炎(S A P)大鼠模型,研究S A P大鼠小腸上皮細(xì)胞促炎抗炎細(xì)胞因子I L-6、I L-1 0及粘蛋白M U C 2不同時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)變化,并給予清下活血方制劑進(jìn)行干預(yù)治療,以探討清下活血方對(duì)S A P大鼠腸粘膜屏障損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制,為臨床治療重癥急性胰腺炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法:(1)SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(空白組,n=12)、SAP組(模型組,n=24)、清下活血組(治療組,n=2 4),每組分2 4 h、4 8 h、7 2 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)。(2)空白組僅開腹,翻動(dòng)胰腺、十二指腸腸曲等臟器后關(guān)腹。S A P組采用5%�；悄懰徕c(0.1 m L/1 0 0 g)胰膽管逆行注射制備S A P大鼠模型。治療組在造模2 h后予清下活血方溶液灌胃(1 m L/1 0 0 g),每1 2 h一次,連續(xù)給藥。(3)三組大鼠分別于術(shù)后2 4、4 8、7 2 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)麻醉后進(jìn)行取材,腹主動(dòng)脈采集血液,分別摘取大鼠胰腺及小腸組織進(jìn)行檢測。檢測各組大鼠血清淀粉酶水平,觀察大鼠胰腺和腸粘膜的病理學(xué)變化,分別按照S c h m i d t標(biāo)準(zhǔn)及C h i u氏評(píng)分法評(píng)價(jià)胰腺及腸粘膜損傷程度,熒光定量法(R t-P C R)檢測小腸上皮細(xì)胞中I L-6 m R N A、I L-1 0 m R N A的表達(dá),免疫組化法檢測小腸上皮細(xì)胞中M U C 2的表達(dá)。采用S P S S 1 7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.造模時(shí)可見胰腺組織明顯腫脹充血,提示造模成功。2.模型組血清淀粉酶水平在2 4、4 8、7 2 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯高于空白組(P0.0 1);治療組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶的水平高于空白組(P0.0 1),與模型組各時(shí)間點(diǎn)比較有所降低,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.0 5)。3.模型組和治療組的胰腺病理學(xué)評(píng)分在2 4、4 8、7 2 h均高于空白組(P0.0 1),治療組各時(shí)間點(diǎn)胰腺病理學(xué)評(píng)分低于模型組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.0 5)。4.模型組和治療組在2 4、4 8、7 2 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)小腸組織的病理評(píng)分均高于空白組(P㩳0.0 1);治療組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)病理評(píng)分低于模型組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.0 5)。5.模型組各時(shí)間點(diǎn)I L-6 m R N A的水平較空白組明顯增高(P0.0 5),且增高程度與時(shí)間成正比,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組比較,治療組各時(shí)間點(diǎn)I L-6 m R N A的水平低于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0 5)。與空白組比較,模型組各時(shí)間點(diǎn)I L-1 0 m R N A的水平顯著增高(P0.0 1),且增高程度與時(shí)間成反比(P0.0 5);與模型組比較,治療組各時(shí)間點(diǎn)I L-1 0 m R N A的水平顯著增高(P0.0 5或P0.0 1),以4 8、7 2 h兩時(shí)間點(diǎn)最為明顯。6.與空白組比較,模型組各時(shí)間點(diǎn)的M U C 2染色評(píng)分明顯降低(P0.0 1);治療組與模型組比較,各時(shí)間點(diǎn)M U C 2染色評(píng)分有所增高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.0 5)。結(jié)論:1.清下活血方可降低S A P大鼠血清淀粉酶水平及胰腺組織形態(tài)學(xué)評(píng)分,對(duì)急性胰腺炎具有治療作用。2.清下活血方可降低S A P大鼠小腸上皮細(xì)胞促炎性細(xì)胞因子I L-6水平,提高抗炎性細(xì)胞因子I L-1 0水平,重建促炎和抗炎細(xì)胞因子之間的平衡,減輕腸道組織損傷。3.清下活血方能有效保護(hù)S A P大鼠腸上皮細(xì)胞,增加M U C 2分泌量,從而修復(fù)腸粘膜層,對(duì)S A P引起的腸粘膜屏障損傷具有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

R :C TG GA TG GC TA CG TA CA TG G2. 5 . 3. 5 熒光 定 量 融解 曲 線 圖4 ： I L- 6溶 解 曲線 圖 圖5 ：I L- 10 溶 解 曲線 圖 P CR 循環(huán) （ ×4 0 循環(huán) ） 9 5℃ 2 mi n9 5℃ 3 0s 6 0℃ 3 0s

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遼寧 中 醫(yī) 藥大 學(xué) 20 17 屆碩 士 學(xué)位 論 文 - 15 圖6 ： β - ac ti n溶 解曲 線 圖 2. 5 .3 .7 結(jié) 果分 析 根據(jù) 下列 公 式計(jì) 算 各 基 因的 起 始 模 板濃 度 ， 結(jié) 果均 表 示為 目的 基 因 與 β- a c t in 基因 含量 的 相 對(duì)比 值 。 △C t =C t Ta r ge t -C t Re f △△ C t= C t Sa m pl e -C t Co n tr o l 目的 基 因的 相對(duì) 含 量＝ ２ －△ △G t 2. 5 .4 免 疫組 化 法 檢測 小 腸上 皮 細(xì) 胞中 M UC 2 的表 達(dá) 2. 5 .4 . 1 免疫 組 化步 驟 1） 組 織 脫水 ， 透 明， 浸 蠟 ， 包埋 、 切 片， 及 對(duì) 切 片脫 蠟 、 復(fù)水 。 步 驟同 上 。 2） 抗 原 微 波修 復(fù) ： 枸 櫞酸 鹽 緩 沖 液微 波 修 復(fù)（ 中 低火 ）1 0 mi n， 室 溫逐 漸冷 卻 至 常 溫， 再 重 復(fù)一 次

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2749992