【摘要】：目的:通過建立重癥急性胰腺炎(S A P)大鼠模型,研究S A P大鼠小腸上皮細胞促炎抗炎細胞因子I L-6、I L-1 0及粘蛋白M U C 2不同時間點的動態(tài)變化,并給予清下活血方制劑進行干預(yù)治療,以探討清下活血方對S A P大鼠腸粘膜屏障損傷的保護作用及相關(guān)機制,為臨床治療重癥急性胰腺炎提供實驗依據(jù)。材料與方法:(1)SD大鼠隨機分成假手術(shù)組(空白組,n=12)、SAP組(模型組,n=24)、清下活血組(治療組,n=2 4),每組分2 4 h、4 8 h、7 2 h三個時間點。(2)空白組僅開腹,翻動胰腺、十二指腸腸曲等臟器后關(guān)腹。S A P組采用5%牛磺膽酸鈉(0.1 m L/1 0 0 g)胰膽管逆行注射制備S A P大鼠模型。治療組在造模2 h后予清下活血方溶液灌胃(1 m L/1 0 0 g),每1 2 h一次,連續(xù)給藥。(3)三組大鼠分別于術(shù)后2 4、4 8、7 2 h三個時間點麻醉后進行取材,腹主動脈采集血液,分別摘取大鼠胰腺及小腸組織進行檢測。檢測各組大鼠血清淀粉酶水平,觀察大鼠胰腺和腸粘膜的病理學變化,分別按照S c h m i d t標準及C h i u氏評分法評價胰腺及腸粘膜損傷程度,熒光定量法(R t-P C R)檢測小腸上皮細胞中I L-6 m R N A、I L-1 0 m R N A的表達,免疫組化法檢測小腸上皮細胞中M U C 2的表達。采用S P S S 1 7.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1.造模時可見胰腺組織明顯腫脹充血,提示造模成功。2.模型組血清淀粉酶水平在2 4、4 8、7 2 h三個時間點均明顯高于空白組(P0.0 1);治療組三個時間點血清淀粉酶的水平高于空白組(P0.0 1),與模型組各時間點比較有所降低,比較有統(tǒng)計學差異(P0.0 5)。3.模型組和治療組的胰腺病理學評分在2 4、4 8、7 2 h均高于空白組(P0.0 1),治療組各時間點胰腺病理學評分低于模型組,比較有統(tǒng)計學差異(P0.0 5)。4.模型組和治療組在2 4、4 8、7 2 h三個時間點小腸組織的病理評分均高于空白組(P㩳0.0 1);治療組三個時間點病理評分低于模型組,比較有統(tǒng)計學差異(P0.0 5)。5.模型組各時間點I L-6 m R N A的水平較空白組明顯增高(P0.0 5),且增高程度與時間成正比,但無統(tǒng)計學意義;與模型組比較,治療組各時間點I L-6 m R N A的水平低于模型組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.0 5)。與空白組比較,模型組各時間點I L-1 0 m R N A的水平顯著增高(P0.0 1),且增高程度與時間成反比(P0.0 5);與模型組比較,治療組各時間點I L-1 0 m R N A的水平顯著增高(P0.0 5或P0.0 1),以4 8、7 2 h兩時間點最為明顯。6.與空白組比較,模型組各時間點的M U C 2染色評分明顯降低(P0.0 1);治療組與模型組比較,各時間點M U C 2染色評分有所增高,具有統(tǒng)計學差異(P0.0 5)。結(jié)論:1.清下活血方可降低S A P大鼠血清淀粉酶水平及胰腺組織形態(tài)學評分,對急性胰腺炎具有治療作用。2.清下活血方可降低S A P大鼠小腸上皮細胞促炎性細胞因子I L-6水平,提高抗炎性細胞因子I L-1 0水平,重建促炎和抗炎細胞因子之間的平衡,減輕腸道組織損傷。3.清下活血方能有效保護S A P大鼠腸上皮細胞,增加M U C 2分泌量,從而修復腸粘膜層,對S A P引起的腸粘膜屏障損傷具有保護作用。
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

R :C TG GA TG GC TA CG TA CA TG G2. 5 . 3. 5 熒光 定 量 融解 曲 線 圖4 ： I L- 6溶 解 曲線 圖 圖5 ：I L- 10 溶 解 曲線 圖 P CR 循環(huán) （ ×4 0 循環(huán) ） 9 5℃ 2 mi n9 5℃ 3 0s 6 0℃ 3 0s

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遼寧 中 醫(yī) 藥大 學 20 17 屆碩 士 學位 論 文 - 15 圖6 ： β - ac ti n溶 解曲 線 圖 2. 5 .3 .7 結(jié) 果分 析 根據(jù) 下列 公 式計 算 各 基 因的 起 始 模 板濃 度 ， 結(jié) 果均 表 示為 目的 基 因 與 β- a c t in 基因 含量 的 相 對比 值 。 △C t =C t Ta r ge t -C t Re f △△ C t= C t Sa m pl e -C t Co n tr o l 目的 基 因的 相對 含 量＝ ２ －△ △G t 2. 5 .4 免 疫組 化 法 檢測 小 腸上 皮 細 胞中 M UC 2 的表 達 2. 5 .4 . 1 免疫 組 化步 驟 1） 組 織 脫水 ， 透 明， 浸 蠟 ， 包埋 、 切 片， 及 對 切 片脫 蠟 、 復水 。 步 驟同 上 。 2） 抗 原 微 波修 復 ： 枸 櫞酸 鹽 緩 沖 液微 波 修 復（ 中 低火 ）1 0 mi n， 室 溫逐 漸冷 卻 至 常 溫， 再 重 復一 次

【參考文獻】

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本文編號：2749992