【摘要】：目的:在中醫(yī)健脾益氣理論指導下,利用聽覺腦干誘發(fā)電位(ABR)技術、耳蝸鋪片技術、RT-PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction)技術,觀察復方健耳劑拆方之補氣藥干預慶大霉素耳毒性聾的聽功能、耳蝸毛細胞影響作用,并通過對耳蝸超氧化物歧化酶1(Superoxide Dismutase 1,SOD1)的檢測,探討基于活性氧介導的慶大霉素耳蝸毛細胞損害的病理機制,以及中藥保護作用藥理機制。通過對血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatine,Cr)的檢測、腎組織切片,觀察中藥對腎功能和腎組織的保護作用,探討護腎與護耳的關系,以及中醫(yī)脾為后天之本與腎為先天之本,“腎開竅于耳”等理論的科學根據(jù)。方法:選擇正常健康豚鼠54只,隨機分成正常對照組、慶大霉素(Gentamicin,GM)對照組、中藥+GM對照組各18只。正常對照組,不作任何藥物處理,常規(guī)飼養(yǎng)至11天。GM對照組,按照200mg/kg/d劑量,每天注射2次,連續(xù)9天后停藥,第11天終止飼養(yǎng)。中藥+GM對照組預先連續(xù)服用復方健耳劑拆方11號10天,按照3.994g(kg/d)劑量,然后在繼續(xù)服用中藥同時開始注射GM,GM用量和方法同GM對照組,連續(xù)9天同時停藥,第11天終止飼養(yǎng)。每組取6只動物行ABR測試,了解聽力狀況。6只動物分別取心臟血液用于血清BUN、Cr檢測,了解腎功能;取腎臟用于腎組織切片染色,了解腎組織形態(tài)學;取耳蝸用于耳蝸鋪片,了解耳蝸毛細胞形態(tài)學并計數(shù)毛細胞。另6只動物耳蝸通過RT-PCR測定SOD1,提供基于活性氧途徑分析依據(jù)。所得數(shù)據(jù)最后經(jīng)統(tǒng)計學處理。結果:第9天中藥+GM對照組的ABR閾值與GM對照組比較,差異存在顯著性意義(P0.05),與正常對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。第11天耳蝸鋪片顯示,正常對照組內、外毛細胞排列整齊,無細胞缺損;GM對照組外毛細胞破壞嚴重,呈片狀崩解,殘缺不全,但內毛細胞基本未受影響;中藥+GM組外毛細胞破壞較輕,呈散在崩解缺失,內毛細胞未受影響。GM對照組與其他兩組比較,差異均有顯著性意義(P0.05)。中藥+GM組與正常對照組比較,差異有顯著性意義(P0.05)。第11天腎切片顯示,正常對照組腎組織細胞形態(tài)與結構正常,GM對照組腎組織細胞與結構受損嚴重,而中藥+GM組腎組織細胞與結構受損較輕,基本保護較好。GM對照組BUN、Cr兩項指標均高于其他兩組,經(jīng)統(tǒng)計學比較,差異均有顯著性意義(P0.05),而中藥+GM組與正常對照組比較,差異則無顯著性意義(P0.05)。第11天中藥+GM組耳蝸SOD1表達均高于其他兩組,經(jīng)統(tǒng)計學比較,差異均有顯著性意義(P0.05)。結論:豚鼠GM200mg/天造模成功。GM對耳蝸破壞主要影響外毛細胞,且底回破壞較頂回嚴重。GM對耳蝸外毛細胞和聽力損害以及腎臟和腎功能都有損害。復方健耳劑拆方補氣類中藥具有明顯同時保護豚鼠GM致耳蝸外毛細胞和聽功能損害以及腎臟和腎功能損害的作用。中藥藥效作用與其通過對機體SOD系統(tǒng)激活,清除氧自由基,從而阻止活性氧介導細胞凋亡通路有關。中藥護腎作用,是其拮抗GM耳毒性損害的中藥機制之一。中醫(yī)“腎開竅于耳”理論具有一定科學依據(jù)。
【學位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

1.A1、A2、A3 分別表示正常對照組豚鼠耳蝸的底回、中回、頂回外毛細胞情況（X400）B1、B2、B3 分別表示 GM 組對照豚鼠耳蝸的底回、中回、頂回外毛細胞情況（X400）C1、C2、C3 分別表示中藥+GM 組對照豚鼠耳蝸的底回、中回、頂回外毛細胞情況（X43.2 統(tǒng)計學方法采用 SPSS22.0 軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以 X ±S 表示，3 組間采用單因素方差分析，兩組之間比較用 LSD-t 分析。P<0.05 為差異計學意義。3.3 毛細胞計數(shù)統(tǒng)計結果從 GM 對照組、中藥+GM 對照組、正常對照組中各選 6 耳，制成蝸完整鋪片，計算全耳蝸外毛細胞在固定視野中的計數(shù)。其中正常組毛細胞計數(shù)遠遠高于其他兩組，單因素方差分析組間比較，P=0.

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本文編號：2750062