【摘要】：目的構(gòu)建白藜蘆醇修復(fù)炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)的小鼠模型,檢測SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1,SUMO1)及其相關(guān)信號通路在陰性對照組小鼠、IBD模型組和白藜蘆醇修復(fù)的IBD組小鼠結(jié)直腸黏膜組織中的表達(dá),探討白藜蘆醇調(diào)控SUMO1修復(fù)炎癥性腸病的作用及其機(jī)制。方法1.建立白藜蘆醇修復(fù)小鼠IBD模型選擇6周齡(20g左右)的雄性BALB/c小鼠,構(gòu)建葡聚糖硫酸酯鈉(dextran sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的小鼠IBD模型組(模型組)、白藜蘆醇處理組(實(shí)驗組)和陰性對照組。模型組小鼠持續(xù)飲用含3%DSS的雙蒸水,實(shí)驗組小鼠持續(xù)飲用含3%DSS的雙蒸水的同時每天灌胃白藜蘆醇(50mg/kg),而陰性對照組小鼠則飲用雙蒸水。每天在規(guī)定的時間點(diǎn)稱量小鼠的體重并觀察小鼠的糞便性狀。當(dāng)發(fā)現(xiàn)陽性組小鼠體重減輕和糞便帶血(便血)等結(jié)直腸炎癥狀時,則表明炎癥性腸病模型構(gòu)建成功。采用二氧化碳過量吸入法處死三組小鼠,分別取三組小鼠的結(jié)直腸黏膜組織以及脾臟組織,留待進(jìn)一步檢測。2.蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)和免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry,IHC)分別運(yùn)用HE和IHC觀察三組小鼠的結(jié)直腸黏膜以及脾臟組織的結(jié)構(gòu)和檢測增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在三組小鼠的結(jié)直腸黏膜組織中的表達(dá)水平。3.檢測SUMO1、Wnt5a、β-catenin以及相關(guān)炎癥因子在結(jié)直腸黏膜組織和脾臟組織中的表達(dá)應(yīng)用實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(Polymerase Chain Reaction,PCR)、Western-blot以及IHC等方法檢測三組小鼠結(jié)直腸黏膜組織和脾臟組織中SUMO1、Wnt5a、β-catenin以及其相關(guān)炎癥因子的表達(dá)。4.檢測炎癥性腸病及結(jié)直腸癌患者腸道組織中SUMO1及β-catenin等的表達(dá)采用免疫組織化學(xué)法檢測患有炎癥性腸病及結(jié)直腸癌的患者和正常人結(jié)直腸組織中SUMO1及β-catenin等的表達(dá)。結(jié)果1.構(gòu)建白藜蘆醇修復(fù)小鼠炎癥性腸病模型實(shí)驗結(jié)果表明,從建模的第7天開始,模型組小鼠的體重持續(xù)下降,陰性對照組小鼠的體重則穩(wěn)步增加,而實(shí)驗組小鼠的體重則穩(wěn)定維持在一定的水平并略有上升。當(dāng)觀察到模型組小鼠有明顯便血現(xiàn)象,實(shí)驗組小鼠便血現(xiàn)象與模型組相比便血程度較輕且便血時間較晚,顯示白藜蘆醇修復(fù)小鼠炎癥性腸病模型構(gòu)建成功。模型組小鼠的疾病活動指數(shù)(Disease activity index,DAI)指數(shù)從第7天開始持續(xù)大幅度上升,實(shí)驗組小鼠的DAI從第7天開始小幅度上升后就維持在一定的水平不變,而陰性對照組小鼠的DAI持續(xù)為0。二氧化碳過量吸入法處死三組小鼠,取各組小鼠的結(jié)直腸黏膜組織以及脾臟組織,觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗組小鼠結(jié)直腸的長度明顯長于模型組小鼠的結(jié)直腸;HE染色發(fā)現(xiàn)與模型組小鼠相比,實(shí)驗組小鼠的結(jié)直腸黏膜以及脾臟組織結(jié)構(gòu)明顯整齊,浸潤的炎癥細(xì)胞明顯減少;IHC結(jié)果表明PCNA在實(shí)驗組小鼠結(jié)直腸黏膜組織中的表達(dá)水平明顯高于模型組小鼠。2.檢測SUMO1、Wnt5a、β-catenin以及相關(guān)炎癥因子在結(jié)直腸黏膜組織和脾臟組織中的表達(dá)利用已構(gòu)建好的白藜蘆醇修復(fù)小鼠炎癥性腸病模型,通過實(shí)時定量PCR、Western-blot以及免疫組織化學(xué)等方法,檢測SUMO1、Wnt5a、β-catenin與相關(guān)炎癥因子在陰性對照組、模型組以及實(shí)驗組小鼠結(jié)直腸黏膜組織和脾臟組織中的表達(dá)水平。實(shí)時定量PCR實(shí)驗結(jié)果顯示,實(shí)驗組小鼠結(jié)直腸黏膜組織和脾臟組織中的SUMO1、IL-6、IL-8、TNF-a與IL-1β的表達(dá)水平與模型組相比顯著降低,實(shí)驗組小鼠結(jié)直腸黏膜組織中IL-10與SENP1的表達(dá)水平明顯高于模型組;在實(shí)驗組小鼠脾臟組織中IL-10與SENP1的表達(dá)水平明顯高于模型組。Western-blot實(shí)驗結(jié)果表明,實(shí)驗組小鼠結(jié)直腸黏膜組織中的SUMO1、Wnt5a、β-catenin和NF-κB等的表達(dá)水平與模型組相比顯著降低。3.檢測炎癥性腸病及結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸病變組織中SUMO1及β-catenin等的表達(dá)采用IHC檢測炎癥性腸病及結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸黏膜組織和健康對照組結(jié)直腸黏膜組織中SUMO1與β-catenin的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,炎癥性腸病及結(jié)直腸癌患者患者結(jié)直腸黏膜組織中SUMO1與β-catenin的表達(dá)水平明顯高于正常對照組。結(jié)論本研究成功建立了白藜蘆醇修復(fù)小鼠炎癥性腸病的模型,經(jīng)檢測,實(shí)驗組小鼠的結(jié)直腸黏膜組織和脾臟組織中SUMO1的表達(dá)水平明顯低于模型組小鼠,并伴有炎癥因子的表達(dá)水平的降低和Wnt/β-catenin以及NF-κB信號通路活化程度的降低。炎癥性腸病及結(jié)直腸癌患者的腸道病變組織中SUMO1的表達(dá)明顯高于正常對照組,提示SUMO1具有促進(jìn)炎癥性腸病以及結(jié)直腸癌的作用。上述研究結(jié)果顯示SUMO1在白藜蘆醇修復(fù)小鼠炎癥性腸病過程中具有重要作用,由此可見,白藜蘆醇可能是通過下調(diào)SUMO1的表達(dá)來修復(fù)炎癥性腸病。本研究為臨床應(yīng)用白藜蘆醇治療炎癥性腸病提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

構(gòu)建白藜蘆醇修復(fù)IBD小鼠模型

圖1.1 構(gòu)建白藜蘆醇修復(fù)IBD小鼠模型stablishment of a model of resveratrol in repairing inflamdisease in mice1在白藜蘆醇修復(fù)IBD模型小鼠結(jié)直腸黏膜與脾臟組織

其相關(guān)信號通路分子在炎癥性腸病及結(jié)直腸組織中的表達(dá)pression of SUMO1 and its related signaling p of patients with inflammatory bowel disease a修復(fù) DSS 誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病的作用及癥性腸病提供新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗依據(jù)。炎癥相關(guān)性疾病以及一些腫瘤的病程，但是尚未見報道，因此，本課題深入研究 SUM用及其機(jī)制，具有較高的科學(xué)研究價值和

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 蔣峻梅;吳芬芝;饒和平;;炎癥性腸炎中蛋白C系統(tǒng)的抗炎和抗凝的分析[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2013年04期

2 陳瓊玲;劉紅芝;劉麗;何軒輝;王強(qiáng);;高壓-微波法提取花生根中白藜蘆醇[J];食品科學(xué);2013年20期

3 錢時權(quán);石亞中;伍亞華;李善菊;孫蘭萍;許暉;;纖維素酶-超聲波輔助有機(jī)溶劑提取山葡萄渣中白藜蘆醇的研究[J];食品工業(yè)科技;2012年03期

4 宋寧;張影;;腸三葉因子與炎癥性腸病[J];中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育;2009年12期

5 楊偉強(qiáng);李鵬;王鳳舞;;堿法提取花生紅衣中白藜蘆醇的研究[J];食品工業(yè)科技;2009年04期

6 史麗;劉燕;許現(xiàn)輝;;白藜蘆醇的生物活性研究進(jìn)展[J];食品與藥品;2006年11期

7 陳鎮(zhèn)泉,林嬌健,陳君琛,陳鋒華;科學(xué)新發(fā)現(xiàn)與葡萄新品種[J];葡萄栽培與釀酒;1997年03期

本文編號：2749209