【摘要】：目的:觀察金釵石斛總生物堿(Dendrobium nobile Lindl alkaloid,DNLA)對(duì)SAMP8小鼠腦衰老的影響,并探討其作用機(jī)制。方法:6月齡SAMP8小鼠隨機(jī)分為4組:SAMP8模型組、DNLA低、高劑量組、陽(yáng)性藥組,同月齡SAMR1小鼠作為空白對(duì)照。藥物均用1%的吐溫80配制,DNLA低、高劑量組分別給予DNLA 20、40 mg/kg,陽(yáng)性藥組給予二甲雙胍80mg/kg,每日一次連續(xù)灌胃6個(gè)月,SAMR1對(duì)照組和SAMP8模型組給予同等體積1%的吐溫80。給藥結(jié)束前,采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),Y迷宮實(shí)驗(yàn),新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn),曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶及運(yùn)動(dòng)功能;測(cè)定小鼠體重,稱取小鼠腦組織濕重,用于測(cè)定腦組織濕重比;衰老特異性β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)腦組織衰老情況;HE和尼氏染色觀察海馬CA1區(qū)和皮質(zhì)神經(jīng)元損傷情況;Western blot測(cè)定小鼠海馬和皮質(zhì)中衰老蛋白Klotho的表達(dá),Aβ生成及降解途徑中Aβ、APP、BACE1、PS1、IDE、NEP蛋白水平,自噬相關(guān)蛋白LC3B、Beclin1、P62的表達(dá)水平。結(jié)果:SAMP8較SAMR1小鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng),原平臺(tái)象限停留時(shí)間縮短,Y迷宮自發(fā)探索交替行為正確率降低,探索新物體的時(shí)間占總時(shí)間的百分比有所下降但無(wú)差異,轉(zhuǎn)棒潛伏期縮短,中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域運(yùn)動(dòng)的總路程明顯縮短;腦組織濕重比降低;β-半乳糖苷酶染色的腦組織衰老細(xì)胞數(shù)量增多;海馬CA1區(qū)和皮質(zhì)神經(jīng)元損傷,細(xì)胞排列紊亂,正常神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量減少;海馬和皮質(zhì)Aβ、APP、BACE1、PS1、P62蛋白表達(dá)升高,LC3B、Beclin1、IDE、NEP、Klotho蛋白表達(dá)降低。與SAMP8模型組相比,DNLA給藥及陽(yáng)性給藥組逃避潛伏期縮短,原平臺(tái)象限停留時(shí)間延長(zhǎng),Y迷宮自發(fā)探索交替行為正確率升高,探索新物體的時(shí)間占總時(shí)間的百分比無(wú)明顯改變,轉(zhuǎn)棒潛伏期延長(zhǎng),中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域運(yùn)動(dòng)的總路程無(wú)顯著改變;腦組織濕重比增加;β-半乳糖苷酶染色的腦組織衰老細(xì)胞數(shù)量減少;海馬CA1區(qū)和皮質(zhì)神經(jīng)元正常,細(xì)胞排列整齊,正常神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量增加;海馬和皮質(zhì)Aβ蛋白水平降低,Klotho衰老蛋白水平升高,生成Aβ代謝途徑中的APP、BACE1、PS1蛋白水平降低,Aβ降解酶IDE、NEP蛋白水平升高,而自噬相關(guān)蛋白P62蛋白水平降低,LC3B、Beclin1蛋白水平升高。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)條件下,金釵石斛總生物堿對(duì)SAMP8小鼠有延緩衰老的作用,其作用機(jī)制可能與上調(diào)Klotho蛋白,減少Aβ聚集、增強(qiáng)自噬活性有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 呂凌麗2 結(jié)果2.1 DNLA 對(duì) SAMP8 小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響2.1.1 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)Morris 水迷宮檢測(cè) SAMP8 小鼠學(xué)習(xí)記憶功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（如圖 1），與SAMR1 相比，定向航行中 SAMP8 小鼠的逃避潛伏期有所延長(zhǎng)(P<0.05)，空間探索中原平臺(tái)象限停留時(shí)間縮短(P<0.05)，DNLA 及二甲雙胍給藥后，SAMP8小鼠逃避潛伏期縮短，原平臺(tái)象限停留時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)。提示 DNLA 能改善SAMP8 小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。

圖 2DNLA 對(duì) SAMP8 小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響.A.Y 迷宮自發(fā)探索行為，B.新物體識(shí)別新物體探索時(shí)間占總時(shí)間的百分比，（ x ±SD，n=6-10），與 SAMR1相比，*P㩳0.05；與 SAMP8相比，#P㩳0.05。Fig. 2 Effect of DNLA on learning and memory deficits in SAMP8 mice. A. The correct rate ofY Maze test spontaneous alternation. B. The New object time percentage of total time in objectrecognition test (ORT). ( ±SD, n=6-10),*P<0.05 vs SAMR1,#P<0.05 vs SAMP82.2 DNLA 對(duì) SAMP8 小鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響2.2.1 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)小鼠運(yùn)動(dòng)平衡能力的自動(dòng)化方法。如圖 3A 所示，SAMP8組與 SAMR1 組相比，潛伏期即從旋轉(zhuǎn)桿上脫落的時(shí)間明顯縮短(P<0.05)，DNLA及二甲雙胍給藥后潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.05)，結(jié)果表明，DNLA可以減輕 SAMP8小鼠的運(yùn)動(dòng)功能障礙。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要評(píng)價(jià)以情感行為為主的運(yùn)動(dòng)能力，小鼠自主活動(dòng)的總路徑能體現(xiàn)小鼠運(yùn)動(dòng)情況。如圖 3B 所示，中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域運(yùn)動(dòng)的總路程 SAMP8 組

圖 3：DNLA 對(duì) SAMP8 小鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響.A.轉(zhuǎn)棒潛伏期，B.曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域總路程，（ x ±SD，n=6-10）與 SAMR1相比，*P㩳0.05；與 SAMP8 相比，#P㩳0.05。Fig. 3 Effect of DNLA on motor disorder in SAMP8 mice. A. The escape latency of the rotatingrod test. B. The total distance in central and peripheral areas of Open Field test. ( ±SD, n=6-10)*P<0.05 vs SAMR1,#P<0.05 vs SAMP8.2.3 DNLA 對(duì) SAMP8 小鼠腦組織濕重比的影響衰老的腦組織萎縮，如圖 4 所示腦組織濕重比結(jié)果顯示，SAMP8 小鼠腦組織濕重比較 SAMR1 小鼠明顯降低(P<0.05)，DNLA40 mg/kg組和二甲雙胍給藥組較 SAMP8 組腦組織濕重比顯著升高(P<0.05)，提示 DNLA能改善 SAMP8小鼠的腦萎縮。

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本文編號(hào)：2748193