發(fā)布時(shí)間：2020-07-10 05:07

【摘要】：目的:通過應(yīng)用大黃附子湯對重癥急性胰腺炎大鼠進(jìn)行干預(yù),觀察其腸道菌群的變化,測定腸黏膜機(jī)械屏障緊密連接蛋白Claudin-1、occludin、ZO-1的表達(dá)情況,探討大黃附子湯對重癥急性胰腺炎大鼠腸道菌群及腸黏膜機(jī)械屏障的作用及意義。方法:SPF級雄性大鼠24只,體重230-270g,隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(SH,n=6),大黃附子湯-假手術(shù)組(SH-DHFZT,n=6),重癥急性胰腺炎組(SAP,n=6),大黃附子湯治療組(DHFZT,n=6),采用異氟烷氣體麻醉方式麻醉;假手術(shù)組、大黃附子湯-假手術(shù)組大鼠開腹后,翻動(dòng)胰腺數(shù)次后關(guān)腹;SAP組、治療組經(jīng)胰膽管緩慢逆行注入4%�；悄懰徕c(1ml/kg)誘導(dǎo)SAP模型,造模成功后假手術(shù)組、SAP組用2ml生理鹽水(約38℃)于術(shù)后12、24、36小時(shí)保留灌腸;大黃附子湯-假手術(shù)組與治療組用2ml大黃附子湯(約38℃)于術(shù)后12、24、36小時(shí)保留灌腸干預(yù)治療。各組大鼠在48h處死后開腹,經(jīng)腹主動(dòng)脈抽血,使用生化分析儀檢測血漿內(nèi)毒素、血淀粉酶、血鈣,ELISA法炎癥因子IL-1β、腸黏膜二胺氧化酶(DAO)水平。光學(xué)顯微鏡下觀察肺、胰腺、回腸組織HE染色形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用Smith評分法對實(shí)驗(yàn)各組肺組織進(jìn)行病理評分,評價(jià)肺損傷程度,以明確SAP模型是否建立成功。應(yīng)用改良Schmidt評分標(biāo)準(zhǔn)對胰腺組織進(jìn)行病理評分,Chiu腸黏膜損傷評分標(biāo)準(zhǔn)對回腸組織進(jìn)行評分。應(yīng)用免疫組化及免疫熒光法檢測腸黏膜ZO-1、occludin、claudin-1表達(dá)與分布,Westernblot對ZO-1、occludin以及claudin-1進(jìn)行半定量分析,采用16S rRNA基因測序法分析回腸段腸黏膜菌群。結(jié)果:1.大黃附子湯-假手術(shù)組血清內(nèi)毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平較假手術(shù)組無明顯差異;SAP組血清內(nèi)毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平均較假手術(shù)組明顯升高,血鈣含量較假手術(shù)組降低;治療組血清內(nèi)毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平則較SAP組減少,血鈣含量較SAP組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.假手術(shù)組、大黃附子湯-假手術(shù)組胰腺、肺及回腸組織結(jié)構(gòu)均無明顯損傷,大黃附子湯-假手術(shù)組腸黏膜ZO-1、occludin、claudin-1表達(dá)與假手術(shù)組相比無明顯變化;SAP組大鼠48h后胰腺、肺及回腸組織結(jié)構(gòu)均發(fā)生不同程度破壞,ZO-1、occludin、claudin-1表達(dá)減弱。經(jīng)大黃附子湯治療后,胰腺、肺及回腸組織結(jié)構(gòu)破壞有修復(fù),腸上皮緊密連接蛋白ZO-1、occludin、claudin-1表達(dá)水平較SAP組明顯增加。3.大黃附子湯-假手術(shù)組菌群樣本因受到污染未能測出可用結(jié)果,其余各組回腸組織菌群分析結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,SAP組菌群豐富度和多樣性在整體水平上無顯著變化。而大黃附子湯治療組顯著增加了菌群豐度(P0.05,除門水平外)和菌群多樣性(P0.05);假手術(shù)組、SAP組和大黃附子湯組治療三組菌群結(jié)構(gòu)存在顯著差異。根據(jù)菌群組成分析結(jié)果,厚壁菌門(Firmicutes),擬桿菌門(Bacteroidetes)和變形菌門(Proteobacteria)是相關(guān)菌群中的三個(gè)相對優(yōu)勢菌門,其中以厚壁菌門(Firmicutes)為最優(yōu)勢。在門水平上,SAP組優(yōu)勢菌門無顯著變化,大黃附子湯組治療組變形菌門(Proteobacteria)顯著增加。在屬水平,假手術(shù)組中乳桿菌屬(Lactobacillus)為優(yōu)勢菌屬,在發(fā)生SAP后其相對豐度發(fā)生明顯下降,優(yōu)勢地位為相對豐富度明顯增加消化鏈球菌(unclassified_f__Peptostreptococcaceae)所取代。治療組乳桿菌屬(Lactobacillus)較SAP組明顯增加而重新成為優(yōu)勢菌屬。結(jié)論:重癥急性胰腺炎發(fā)生后,腸道菌群發(fā)生了改變,與此同時(shí)腸道結(jié)構(gòu)被破壞,腸黏膜機(jī)械屏障的緊密連接表達(dá)水平降低,腸上皮通透性增加,內(nèi)毒素等物質(zhì)入血,血中炎癥因子水平升高出現(xiàn)“類瀑布”式效應(yīng),加重病情。應(yīng)用大黃附子湯治療后,血清內(nèi)毒素水平及IL-1β被降低,有效的抑制胰酶分泌及炎癥因子的瀑布式激活。同時(shí),大黃附子湯促進(jìn)乳桿菌屬等“益生菌”的增多,可能與促進(jìn)腸上皮緊密連接蛋白表達(dá)有關(guān),進(jìn)而改善腸黏膜機(jī)械屏障,達(dá)到緩解病情的效果。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

大鼠血清內(nèi)毒素含量變化

大鼠血鈣含量變化

圖 4 大鼠胰腺 HE 染色（200 ）組織病理學(xué)觀察觀察：假手術(shù)組、大黃附子湯-假手術(shù)組大鼠肺組織呈淡紅色，肉；SAP 組大鼠肺組織呈紅褐色，水腫較嚴(yán)重，大量淤血，肺葉表面

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2 涂s

本文編號：2748483