【摘要】：目的探討晝夜不同時(shí)辰應(yīng)用雷公藤多苷對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠(CIA)肝功能的影響及其相關(guān)機(jī)制,同時(shí)觀察其對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)影像學(xué)的治療作用,為雷公藤多苷對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的時(shí)間治療提供時(shí)間毒理學(xué)證據(jù)。方法Wistar大鼠96只,雌性,體重180±20g。將Wistar大鼠置于時(shí)間生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,固定光照(L)∶黑暗(D)時(shí)間(L:D=12:12,明期為07:00~19:00,暗期為19:00~07:00),室溫23±2℃,相對(duì)濕度為60±10%,自由攝食飲水,適應(yīng)10d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將96只大鼠隨機(jī)分為:正常對(duì)照組16只、模型組80只。分組后建立CIA模型(除正常對(duì)照組外),在初次免疫第21天觀察并評(píng)價(jià)造模結(jié)果,將造模成功大鼠隨機(jī)分為CIA模型組、雷公藤多苷組(TG組)、雷公藤多苷+白芍總苷組(TG+TGP組)。TG組與TG+TGP組再按照大鼠藥物干預(yù)時(shí)間隨機(jī)分為ZT6組與ZT18組兩個(gè)亞組。分組完成后進(jìn)行給藥干預(yù),給藥干預(yù)第1天開始對(duì)TG組(40mg/kg/d)、TG+TGP組(TG40mg/kg/d、TGP200mg/kg/d)CIA大鼠進(jìn)行灌胃,正常對(duì)照組與模型組均以等量生理鹽水灌胃,均為1/日,持續(xù)給藥42天。于處死前1天,用X線機(jī)對(duì)大鼠踝、足關(guān)節(jié)進(jìn)行拍片,并進(jìn)行影像學(xué)觀察和分析。給藥結(jié)束后,分6個(gè)時(shí)間點(diǎn)取血、留取肝臟及病變關(guān)節(jié)。檢測(cè)所采血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、還原型谷胱甘肽(GSH Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、腫瘤壞死因子 α(TNF α)表達(dá)水平;免疫組化法檢測(cè)滑膜細(xì)胞中滑膜細(xì)胞中白介素 6(IL 6)、白介素 18(IL 18)、時(shí)鐘基因CLOCK及BMAL1表達(dá)水平;HE染色法對(duì)大鼠肝臟及關(guān)節(jié)組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。各組正態(tài)分布計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示。組間差異采用多樣本均數(shù)的方差分析進(jìn)行判斷,兩兩均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行判斷。使用SPSS21.0軟件統(tǒng)計(jì)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1 CIA大鼠肝功能及血清SOD、GSH Px、TNF α水平的變化:與正常對(duì)照組相比,模型組血清ALT、AST水平及SOD活力、GSH Px含量均未顯示出明顯差異(P0.05),模型組TNF α含量則顯著高與正常對(duì)照組(P0.05)。時(shí)間治療組持續(xù)給藥42天后,TG組與TG+TGP組血清ALT、AST水平均明顯高于正常對(duì)照組與模型組(P0.05);TG組與TG+TGP組血清SOD活力、GSH Px含量明顯低于正常對(duì)照組與模型組(P0.05)。與模型組相比,TG組與TG+TGP組血清TNF α含量均下降(P0.05),TG+TGP組血清TNF α含量明顯低于TG組(P0.05)。與TG組相比,TG+TGP組血清ALT、AST水平顯著降低(P0.05),血清SOD活力、GSH Px含量顯著升高(P0.05)。與TG ZT6組相比,TG ZT18組血清ALT、AST水平較低,SOD活力、GSH Px含量較高,TNF α含量較低(P0.05);與TG+TGP ZT6組相比,TG+TGP ZT18組血清ALT、AST水平較低,SOD活力、GSH Px含量較高,TNF α含量較低(P0.05)。2 CIA大鼠肝功能及血清SOD、GSH Px、TNF α水平的晝夜節(jié)律:各組大鼠血清學(xué)指標(biāo)均顯示出一定的節(jié)律變化,ALT、AST大致呈現(xiàn)出晝低夜高的趨勢(shì),SOD與GSH Px則顯示出晝高夜低的趨勢(shì)。其中ALT的峰值出現(xiàn)在ZT18時(shí),谷值出現(xiàn)在ZT6時(shí);AST峰值于ZT14時(shí)達(dá)到峰值,谷值則出現(xiàn)于ZT22時(shí);SOD活力的峰值出現(xiàn)于ZT6時(shí),谷值出現(xiàn)在ZT18時(shí),變化趨勢(shì)與ALT波動(dòng)趨勢(shì)大致相反;GSH Px于ZT2時(shí)達(dá)到峰值,谷值出現(xiàn)在ZT14時(shí)。空白組大鼠TNF α含量的晝夜變化浮動(dòng)較小,模型組及TG組、TG+TGP組大鼠TNF α變化波動(dòng)較大,峰值出現(xiàn)在ZT22時(shí),于ZT14時(shí)達(dá)到谷值。3晝夜不同時(shí)間應(yīng)用TG及TGP對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)影像學(xué)的影響:通過X線可觀察到正常組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面清晰,跖趾關(guān)節(jié)骨皮質(zhì)完整,各關(guān)節(jié)間隙未見異常;CIA模型組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面模糊,骨缺損明顯,跖趾關(guān)節(jié)可見大塊骨缺損,趾間關(guān)節(jié)融合嚴(yán)重。與模型組相比,TG時(shí)間治療組關(guān)節(jié)病變程度顯著減輕。TG ZT6組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面模糊,可見踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)缺損面,跖趾關(guān)節(jié)可見骨缺損,趾間關(guān)節(jié)輕度融合;TG ZT18組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面較清晰,跖趾關(guān)節(jié)骨破壞較輕,關(guān)節(jié)間隙輕度改變。與TG組相比,TG與TGP聯(lián)合給藥組關(guān)節(jié)病變程度較輕。TG+TGP ZT6組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面較清晰,但仍可見少量骨缺損,關(guān)節(jié)間隙稍窄;TG+TGP ZT18組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面較清晰,跖趾關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)間隙未見明顯異常改變。4晝夜不同時(shí)間應(yīng)用TG及TGP對(duì)CIA大鼠肝臟病理學(xué)的影響:正常對(duì)照組肝細(xì)胞大小一致、結(jié)構(gòu)完整,均勻而規(guī)則的排列,無肝細(xì)胞變性和壞死,肝小葉結(jié)構(gòu)完整。與正常對(duì)照組相比,模型組大鼠肝臟病理未見明顯異常。TG ZT6組大鼠肝細(xì)胞水腫變性嚴(yán)重,部分細(xì)胞核溶解分散,肝小葉結(jié)構(gòu)破壞,有多處點(diǎn)灶狀壞死,肝竇變寬且有炎性細(xì)胞;TG ZT18組大鼠肝細(xì)胞水腫、脂肪變,輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn),肝小葉輕度破壞,部分可見片狀壞死區(qū),可觀察到間質(zhì)纖維組織增生。TG+TGP ZT6組大鼠肝細(xì)胞輕度水腫,偶有脂肪變,肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常,偶有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),輕度間質(zhì)纖維化;TG+TGP ZT18組大鼠肝細(xì)胞未見明顯水腫變性,與正常組大鼠對(duì)比,肝竇稍寬,偶可見炎性細(xì)胞。5晝夜不同時(shí)間應(yīng)用TG及TGP對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)病理學(xué)的影響:通過HE染色觀察發(fā)現(xiàn),正常對(duì)照組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜面平滑,未見乳突狀突起及增生,無多核細(xì)胞浸潤(rùn);CIA模型組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生嚴(yán)重,可見數(shù)層滑膜細(xì)胞堆積,滑膜邊緣可見乳突狀凸起及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組相比,TG時(shí)間治療組關(guān)節(jié)病變程度顯著減輕。TG ZT6組大鼠踝關(guān)節(jié)也可見乳突狀凸起及滑膜細(xì)胞增生、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);TG ZT18組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜增生較輕,仍可見乳突狀凸起及少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與TG組相比,TG與TGP聯(lián)合給藥組關(guān)節(jié)病變程度較輕。TG+TGP ZT6組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生較輕,少量乳突狀凸起,炎性細(xì)胞浸潤(rùn);TG+TGP ZT18組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜較光滑,未見明顯增生及乳突狀凸起,少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。6晝夜不同時(shí)間應(yīng)用TG及TGP對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)IL 6、IL 18及鐘基因CLOCK、BMAL1表達(dá)的影響:模型組、TG時(shí)間治療組及TG與TGP聯(lián)合給藥組中IL 6、IL 18及鐘基因CLOCK、BMAL1的表達(dá)均高于空白組;與模型組相比,TG時(shí)間治療組、TG與TGP聯(lián)合給藥時(shí)間治療組中IL 6、IL 18及鐘基因CLOCK、BMAL1的表達(dá)均明顯降低;TG時(shí)間治療組、TG與TGP聯(lián)合給藥時(shí)間治療組中ZT18組IL 6、IL 18及鐘基因CLOCK、BMAL1的表達(dá)明顯低于ZT6組。結(jié)論1 CIA大鼠肝功能、肝臟病理學(xué)與正常大鼠相比無明顯異常變化;TG可導(dǎo)致CIA大鼠肝功能及肝臟病理學(xué)不同程度的損傷。2正常對(duì)照組與CIA模型組大鼠血清ALT、AST、SOD、GSH Px顯示出一定的晝夜節(jié)律;TG對(duì)CIA大鼠肝功能指標(biāo)的影響也具有晝夜變化,ZT18給藥組(夜間給藥)較ZT6給藥組(白天給藥)肝功能損傷為輕;TGP顯示出對(duì)TG所致CIA大鼠肝損傷的保護(hù)作用。3 TG組及TG、TGP聯(lián)合給藥組對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)損傷、血清TNF α水平均具有顯著抑制作用,并顯示出一定的晝夜變化,夜間給藥的效果更佳。4 TG致CIA大鼠肝損傷及其對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)保護(hù)作用的晝夜差異,可能與其影響生物鐘基因CLOCK、BMAL1的表達(dá)等有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

各實(shí)驗(yàn)組ALT水平Fig.1TheALTlevelofeachexperimentalgroup

各實(shí)驗(yàn)組AST水平Fig.2TheASTlevelofeachexperimentalgroup

各實(shí)驗(yàn)組SOD活力Fig.3TheSODactivityofeachexperimentalgroup

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2746649