【摘要】：研究背景:頭花蓼(polygomuncapitutam,PC)是苗族傳統(tǒng)的藥用植物,對(duì)多種疾病具有預(yù)防保護(hù)作用和生物學(xué)調(diào)節(jié)作用。黃酮類化合物是頭花蓼中主要的植物活性成分。黃酮類化合物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有多酚結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)賦予它抗氧化活性、抑制炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)血脂水平的功能。多種植物中的黃酮類化合物可以對(duì)癌癥、心血管疾病、胃腸道疾病、神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)綜合征如抑郁癥、癲癇、阿爾茨海默病和神經(jīng)退行性疾病等起到保護(hù)作用。此外,植物中的黃酮成分也能顯著調(diào)節(jié)人和動(dòng)物的血脂水平。高血脂是肝臟疾病和動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的危險(xiǎn)因素,我們通過大鼠高脂模型和AS模型,研究頭花蓼中黃酮類化合物對(duì)大鼠血脂紊亂、肝損傷和動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用。第一部分頭花蓼中黃酮類化合物對(duì)高脂模型大鼠血脂紊亂和肝損傷的保護(hù)目的:通過構(gòu)造大鼠高脂模型,研究頭花蓼中黃酮類化合物對(duì)高脂模型大鼠血脂紊亂和肝損傷的保護(hù)作用。方法:采取超聲法提取頭花蓼中的黃酮類化合物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為7月齡SPF級(jí)雄性Wistar大鼠60只,分為空白對(duì)照組、模型組、頭花蓼低劑量組、頭花蓼中劑量組、頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組,每組10只。除對(duì)空白對(duì)照組大鼠喂養(yǎng)普通飼料外,其余各組喂養(yǎng)高脂飼料干預(yù)30天。高脂模型構(gòu)造后,頭花蓼低劑量組、頭花蓼中劑量組和頭花蓼高劑量組分別灌胃的頭花蓼提取物1.4mg/kg-bw、2.8mg/kg-bw 和 5.6mg/kg-bw,陽性對(duì)照組給予 125mg/kg.d 的阿托伐他汀,對(duì)照組和模型組每天灌胃40ml/kg的生理鹽水。干預(yù)28天后,禁食禁水12h后處死大鼠。采用ELISA試劑盒檢測(cè)各組大鼠血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性。在全自動(dòng)生化儀上檢測(cè)血清中總膽固醇(total cholesterol,TC)、總甘油三脂(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋(low density lipoprotein,LDL)的含量。分別采用羥胺法、比色法、TBA法和可見光法檢測(cè)肝勻漿中的超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和過氧化氫酶(catalase,CAT)含量。采用ELISA試劑盒檢測(cè)各組大鼠肝勻漿中白介素-1β(interleukin lβ,IL-1β)、白介素-18(interleukin 6,IL-18)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素-6(interleukin 6,IL-6)的含量。HE 染色制作肝臟病理切片,光學(xué)顯微鏡觀察肝損傷。取出完整的肝臟后,肝臟重量(g)/體重(100g)計(jì)算肝臟指數(shù)。結(jié)果:1.血脂水平:模型組的TC、TG和LDL水平顯著高于正常對(duì)照組,HDL顯著低于正常對(duì)照組。頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的TC和LDL水平顯著低于模型組,頭花蓼低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組的TG水平顯著低于模型組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的HDL水平顯著高于模型組。2.肝功能酶:模型組的ALT和AST水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼低、中、高劑量組的血清ALT和AST水平顯著低于模型組。3.肝組織切片:模型組的肝組織切片中看到脂肪空泡和輕微肝損傷,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組無脂肪空泡、肝損傷和肝纖維化。4.肝臟指數(shù):模型組的肝臟指數(shù)顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組的肝臟指數(shù)顯著低于模型組。5.氧化應(yīng)激指標(biāo):模型組的SOD、CAT和GSH-Px活性顯著低于正常對(duì)照組,MDA活性顯著高于正常對(duì)照組。頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的SOD活性顯著高于模型組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的CAT和GSH-Px活性顯著高于模型組,MDA活性低于模型組。6.炎性指標(biāo):模型組的IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組的IL-1β水平顯著低于模型組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的IL-6和TNF-α水平顯著低于模型組,頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的IL-18水平顯著低于模型組。結(jié)論:高脂模型干預(yù)后,大鼠的血脂水平升高、肝功能酶升高、肝臟病理出現(xiàn)損傷、肝臟中炎癥因子和氧化應(yīng)激水平升高,提示高血脂可以導(dǎo)致肝臟損傷以及肝臟炎癥和氧化應(yīng)激。頭花蓼中黃酮類化合物提取物可以改善大鼠的血脂水平、炎癥因子和氧化應(yīng)激,并對(duì)大鼠的肝臟有保護(hù)作用。第二部分頭花蓼中黃酮類化合物對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的作用及其機(jī)制研究目的:動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠中研究頭花蓼中黃酮類化合物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用,以及頭花蓼中黃酮類化合物與NF-κB/PI3K/AKT信號(hào)通路的關(guān)系,探究其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常對(duì)照組、AS模型組、頭花蓼低劑量組、頭花蓼中劑量組、頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組6組,每組10只雄性大鼠。正常組喂養(yǎng)正常飼料,對(duì)其余5組造模。喂養(yǎng)開始前一次性腹腔注射維生素D 360萬IU/kg,然后喂養(yǎng)高脂飼料8周。采用ELISA試劑盒檢測(cè)各組大鼠血漿中前列環(huán)素(Prostacyclin2,PGI2)、血栓素 A2(Thromboxane2,TXA2)及內(nèi)皮素-1(Endothelinl,ET-1)的含量。血液流變分析儀檢測(cè)血黏度(高、中、低切變率)、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積(hematocrit,HCT)。Medlab生物信息放大采集系統(tǒng)檢測(cè)胸主動(dòng)脈舒張功能。大鼠胸主動(dòng)脈HE染色,400倍光學(xué)顯微鏡下觀察,拍片。采用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)HE染色結(jié)果分析,檢測(cè)主動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度。Westem blot方法檢測(cè)PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路中PI3K蛋白(p85和p110)、AKT蛋白、NF-KB(p65)蛋白在大鼠胸主動(dòng)脈中的表達(dá)水平。RT-PCR檢測(cè)p85、AKT和p65 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果:1.血脂水平:模型組的TC、TG和LDL水平顯著高于正常對(duì)照組。頭花蓼低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組的TC和TG水平顯著低于AS模型組,頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的LDL水平顯著低于模型組。2.血液炎性指標(biāo):AS模型組的IL-6和TNF-α水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的IL-6和TNF-α水平顯著低于AS模型組。3.血液流變學(xué)指標(biāo)比較:AS模型組的全血黏度、血漿黏度和HCT均顯著高于正常對(duì)照組。頭花蓼中劑量組中,低切邊率的全血黏度和HCT顯著低于AS模型組。頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的全血黏度、血漿黏度和HCT顯著低于AS模型組。4.血管內(nèi)皮活性因子:AS模型組的TXA2和ET-1水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的TXA2和ET-1水平顯著低于AS模型組。5.胸主動(dòng)脈舒張功能:隨著Ach濃度的增加,各組的血管內(nèi)皮舒張度差異逐漸增大。Ach濃度為10-5mol/L和10-4mol/L時(shí),各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AS模型組的血管內(nèi)皮舒張度顯著低于正常對(duì)照組,頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的血管內(nèi)皮舒張度顯著高于AS模型組。6.主動(dòng)脈HE染色結(jié)果:AS模型組主動(dòng)脈管腔狹窄,內(nèi)膜增厚,出現(xiàn)顯著動(dòng)脈粥樣硬化病變。頭花蓼低和中劑量組的主動(dòng)脈粥樣硬化程度減輕。頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組主動(dòng)脈無顯著損傷,動(dòng)脈粥樣硬化病變不明顯。7.主動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度:AS模型組的內(nèi)中膜厚度水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的內(nèi)中膜厚度水平顯著低于模型組。8.信號(hào)通路相關(guān)蛋白:AS模型組的p110蛋白、p65蛋白和Akt蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼高劑量組的p110蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著低于AS模型組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的p65蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著低于AS模型組,頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的Akt蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著低于AS模型組。9.信號(hào)通路相關(guān)mRNA:AS模型組的p85 mRNA、p65 mRNA和Akt mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組,頭花蓼高劑量組和陽性對(duì)照組的p85 mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著低于AS模型組,頭花蓼中、高劑量組和陽性對(duì)照組的p65 mRNA和Akt mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著低于AS模型組。結(jié)論:頭花蓼中黃酮類化合物能降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的血脂水平,炎性因子水平,血液粘度和紅細(xì)胞壓積;能降低血管活性因子水平,改善大鼠主動(dòng)脈的舒張功能;能降低主動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度,改善大鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變程度;能降低主動(dòng)脈中 PI3K-p110、PI3K-p85、Akt 和 NF-κB-p65 水平,提示對(duì) PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路有調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖１黃酮測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑

圖２邋ＡＬＴ的標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑

圖３邋ＡＳＴ的標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑３．

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2746646