【摘要】：茵梔黃復(fù)方包含復(fù)雜的天然中藥成分,這些成分多數(shù)具有消炎、抗氧化、抗菌以及抗癌等藥理作用,但作用機理尚不明確;同時,許多中藥成分如黃酮類化合物,它們在體內(nèi)極低的生物利用度是導(dǎo)致其無法被有效應(yīng)用的主要原因,其中尤以酚羥基的葡萄糖醛酸化Ⅱ相代謝引起的首過效應(yīng)最為常見。因此深入研究不同類型的多酚類中藥成分的代謝機理,或?qū)ζ浣Y(jié)構(gòu)類似物的構(gòu)效關(guān)系進行探索性研究,將為尋找安全有效、低廉的抗腫瘤中藥提供幫助。本文主要研究內(nèi)容包括:1)以茵梔黃注射液中6種主要的黃酮結(jié)構(gòu)類似成分大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、綠原酸、梔子苷、阿魏酸為底物,通過體外葡萄糖醛酸化代謝實驗,考察了在不同類型羥基上發(fā)生葡萄糖醛酸化的代謝特點,發(fā)現(xiàn)大黃素及其相關(guān)衍生物的主要葡萄糖醛酸結(jié)合位點發(fā)生在3號位。2)以茵桅黃注射液中4組主要的黃酮苷類化合物及其苷元為底物,即槲皮素-金絲桃苷-蘆丁、木犀草素-木犀草苷、黃岑素-黃岑苷、漢黃岑素-漢黃岑苷,建立了一種通過HPLC-UV與LC-MS/MS圖譜共同確證代謝產(chǎn)物的分析方法,并討論黃酮類物質(zhì)的葡萄糖醛酸結(jié)合的空間立體選擇性。實驗發(fā)現(xiàn),B環(huán)上沒有羥基的黃酮苷類化合物漢黃芩苷及黃芩苷均不容易發(fā)生葡萄糖醛酸化代謝作用,但是容易酶解成相應(yīng)苷元物質(zhì)。B環(huán)上有羥基的黃酮苷類化合物可以結(jié)合一個或兩個葡萄糖醛酸苷如金絲桃苷、蘆丁和木犀草苷,同時這類物質(zhì)也容易發(fā)生部分酶解,生成其相應(yīng)苷元。3)通過CCK-8實驗,檢測茵桅黃有效成分及其葡萄糖醛酸代謝物對宮頸癌細胞的毒性效應(yīng)。15種茵梔黃單體中,槲皮素、木犀草素、黃岑素、漢黃岑素、大黃素和大黃素甲醚對體外培養(yǎng)的HeLa細胞增殖有抑制作用。其中大黃素對細胞增殖的抑制率呈量效關(guān)系,最大抑制率達62.9%;大黃素甲醚濃度大于10 μM后,隨著作用時間的增加,對細胞抑制幾乎達到100%,發(fā)生葡萄糖醛酸化代謝后對細胞的作用幾乎消失。酚酸類物質(zhì)阿魏酸代謝后對細胞抑制作用明顯。綜合中藥單體及其代謝后對細胞的毒性效應(yīng),預(yù)測大黃素和阿魏酸在成為治療宮頸癌細胞的候選化合物中的潛力最大。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285
【圖文】：

結(jié)構(gòu)中的碳原子，結(jié)合一個或多個葡萄糖醛酸苷分子，發(fā)生３＾（２親核取代反應(yīng)，逡逑形成比原底物極性更大的葡萄糖醛酸苷化合物。本實驗中選定茵梔黃注射液中六逡逑種有效成分如圖２－１，探究其體外葡萄糖醛酸代謝產(chǎn)物及其反應(yīng)表型。逡逑１０逡逑

ＵＤＰＧＡ邋（ｍＭ）邐Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋（ｍｉｎ）逡逑圖２－２體外孵育條件考察：Ａ為ＨＬＭ濃度考察；Ｂ為孵育體系ｐＨ考察；逡逑Ｃ為輔酶ＵＤＰＧＡ濃度考察；Ｄ為大黃素孵育時間考察逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ邋ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ邋ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ｖｉｔｒｏ：邋Ａ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ＨＬＭ；邋Ｂ邋ｉｓ邋ｔｈｅ逡逑ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ｐＨ；邋Ｃ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ＵＤＰＧＡ；邋Ｄ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋ｓｔｕｄｙ邋ｏｆ邋ｅｍｏｄｉｎ逡逑以大黃素代謝為例，實驗孵育條件的優(yōu)化結(jié)果如圖２－２。Ａ圖中隨著ＨＬＭ逡逑濃度的增加，反應(yīng)速率及產(chǎn)物的量均有所增加，然而在后續(xù)實驗中０．５邋ｍｇ／ｍＬ的逡逑ＨＬＭ也能滿足實驗需求，考慮其反應(yīng)成本，最終孵育體系中采用ＨＬＭ濃度為逡逑０．５邋ｍｇ／ｍＬ。Ｂ圖中酸性及堿性條件下，酶的活性均受到一定的影響，因此選用逡逑與人體環(huán)境相同的ｐＨ＝７．４０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩沖液。Ｃ圖中當ＵＤＰＧＡ的濃度較小時，逡逑反應(yīng)速率很低，產(chǎn)物生成少，隨著濃度的增加，產(chǎn)物增多，當增加到５邋ｍＭ時，逡逑相對反應(yīng)率增加緩慢，考慮實驗成本，選用ＵＤＰＧＡ終濃度為２邋ｍＭ做反應(yīng)。通逡逑過對不同底物的反應(yīng)時間與濃度做考察

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本文編號：2730299