【摘要】：目的:觀察荊防散正丁醇部位對(duì)氣管滴注LPS所致小鼠急性肺損傷(ALI)模型及LPS刺激誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的保護(hù)作用,探討其抗炎效應(yīng)的NF-κB信號(hào)通路機(jī)制,并初步探究該部位抗炎主要物質(zhì)基礎(chǔ),以補(bǔ)充、完善該部位的抗炎作用研究,為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。方法:(1)荊防散正丁醇部位主要化學(xué)成分測定:采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)荊防散正丁醇部位的升麻素苷、橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基維斯阿米醇苷成分含量進(jìn)行測定;(2)荊防散正丁醇部位抗炎作用研究:○1以醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高急性炎癥模型為載體,驗(yàn)證荊防散正丁醇部位抗炎效應(yīng);○2以氣管滴注LPS所致小鼠ALI模型為載體,觀察藥物對(duì)ALI小鼠肺濕干重比值(W/D)、肺指數(shù)、肺組織MPO活性、肺泡灌洗液(BALF)中總蛋白含量及肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響。(3)荊防散正丁醇部位抗炎作用機(jī)制研究:○1整體動(dòng)物水平:ELISA法測定ALI小鼠BALF中炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α及趨化因子MIP-1α、MIP-1γ含量;Real-Time PCR法測定藥物對(duì)ALI小鼠肺組織NF-κB p65、NF-κB p50、IκBα及VEGFa m RNA表達(dá)水平的影響;Western-Blot法測定藥物對(duì)ALI小鼠肺組織NF-κB p50蛋白表達(dá)水平的影響�！�2細(xì)胞水平:ELISA法測定經(jīng)LPS刺激后的RAW264.7細(xì)胞上清IL-6、TNF-α含量,Griess法測定細(xì)胞上清NO含量;Real-Time PCR法測定藥物對(duì)RAW264.7細(xì)胞模型NF-κB p65、NF-κB p50和IκBαm RNA表達(dá)水平的影響。(4)荊防散正丁醇部位抗炎作用有效成分研究:以LPS刺激誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥模型為載體,測定升麻素苷、橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)細(xì)胞上清IL-6、TNF-α、NO含量的影響;Real-Time PCR法測定橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)模型細(xì)胞NF-κB p65、NF-κB p50和IκBαm RNA表達(dá)水平的影響。結(jié)果:(1)本實(shí)驗(yàn)所用荊防散正丁醇部位含升麻素苷496.08μg/g生藥、橙皮苷302.02μg/g生藥、5-O-甲基維斯阿米醇苷271.13μg/g生藥、迷迭香酸67.70μg/g生藥。(2)荊防散正丁醇部位能不同程度降低LPS氣管滴注所致ALI小鼠BALF中總蛋白含量、肺W/D、肺指數(shù)、肺組織MPO活性,改善ALI小鼠肺組織炎癥病變程度。(3)荊防散正丁醇部位能不同程度地降低ALI小鼠肺組織BALF中細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α及趨化因子MIP-1α、MIP-1γ水平;明顯下調(diào)肺組織NF-κB p65、NF-κB p50 m RNA和NF-κB p50蛋白的表達(dá)水平。荊防散正丁醇部位能降低經(jīng)LPS刺激后RAW264.7細(xì)胞上清IL-6、TNF-α、NO含量,下調(diào)細(xì)胞NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαm RNA表達(dá)水平。(4)對(duì)LPS刺激誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥模型,橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基維斯阿米醇苷能減少細(xì)胞上清IL-6含量,5-O-甲基維斯阿米醇苷能降低NO含量。5-O-甲基維斯阿米醇苷、橙皮苷均明顯下調(diào)細(xì)胞NF-κB p50 m RNA表達(dá)水平,迷迭香酸明顯下調(diào)細(xì)胞NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαm RNA表達(dá)水平。結(jié)論:荊防散正丁醇部位體內(nèi)、體外分別對(duì)LPS所致ALI小鼠模型或RAW264.7細(xì)胞炎癥模型具有良好抗炎作用,作用發(fā)揮與下調(diào)NF-κB p65、NF-κB p50、IκBα基因和NF-κB p50蛋白表達(dá),從而減少炎性介質(zhì)IL-6、IL-1β、TNF-α、MIP-1α、MIP-1γ和NO的釋放有關(guān)。橙皮苷、迷迭香酸、5-O-甲基維斯阿米醇苷可能是荊防散正丁醇部位發(fā)揮抗炎效應(yīng)的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2014 級(jí)碩士學(xué)位論文2 方法與結(jié)果2.1 荊防散正丁醇部位的制備取荊芥、防風(fēng)各 250g，加 2L 水浸泡 30min，煎煮 1h，將藥液過濾，然后將藥渣加 1.5L 水，煎煮 2 次，每次 30min，過濾，合并 3 次濾液，減壓濃縮至約300ml 的濃縮液，用石油醚萃取至萃取液近無色，再將水層用乙酸乙酯萃取至萃取液近無色，最后將水層用正丁醇萃取至萃取液近無色，將正丁醇層液減壓濃縮至浸膏，即得荊防散正丁醇部位，出膏率為 3.12%。荊防散正丁醇部位制備流程示意圖見圖 1。

四種對(duì)照品含量測定圖譜

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2730386