發(fā)布時(shí)間：2020-06-26 10:20

【摘要】：我國(guó)荷葉資源豐富,除個(gè)別省份外,全國(guó)各地均有分布。由于黃酮類化合物容易被氧化,且在水中的溶解度很小,使得荷葉利用率不高,造成了大量的資源浪費(fèi)。本論文采用新型雙水相萃取耦合技術(shù)分離純化荷葉黃酮,并對(duì)制備的荷葉黃酮進(jìn)行微膠囊化,以期擴(kuò)大荷葉黃酮的應(yīng)用范圍。首先采用新型雙水相萃取耦合技術(shù)分離純化黃酮類化合物,單因素試驗(yàn)考察了乙醇濃度、磷酸鹽濃度、pH值、相體積比和萃取次數(shù)等對(duì)黃酮萃取率的影響,同時(shí)以DPPH自由基清除率和皮膚刺激性試驗(yàn),初步評(píng)價(jià)荷葉黃酮提取物的抗氧化性和安全性。得到雙水相萃取荷葉黃酮的最佳工藝為:43%乙醇(V/V),0.35 g/mL磷酸氫二鉀,原體系pH,黃酮收率3.6%,純度為80.5%。DPPH自由基清除率和皮膚刺激性試驗(yàn)表明荷葉黃酮的抗氧化能力較強(qiáng),且對(duì)大鼠皮膚安全無(wú)刺激性。然后采用薄膜分散法制備荷葉黃酮脂質(zhì)體,以包封率為主要指標(biāo),通過(guò)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化荷葉黃酮脂質(zhì)體的制備工藝,同時(shí)建立大孔樹脂富集結(jié)合UV法對(duì)黃酮含量和脂質(zhì)體包封率進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果脂質(zhì)體最佳制備工藝為:無(wú)水乙醇為有機(jī)相,磷酸緩沖液(pH為6.8)為水相,且有機(jī)相與水相的體積比為2:1,藥脂比1:5,大豆卵磷脂與膽固醇之比6:1,包埋溫度50 ~oC。制備的荷葉黃酮脂質(zhì)體呈淡黃色,平均粒徑為553.49 nm,最大包封率為36.56%,同時(shí),穩(wěn)定性試驗(yàn)和DPPH自由基清除率試驗(yàn)結(jié)果表明,脂質(zhì)體包埋技術(shù)能夠顯著提高荷葉黃酮的穩(wěn)定性,且不改變其生物活性。研究表明采用新型耦合雙水相萃取選擇性分離純化黃酮類化合物的工藝,克服了黃酮類成分在提取過(guò)程中易氧化變質(zhì)的問(wèn)題,同時(shí)較現(xiàn)有工藝具有工藝簡(jiǎn)單、低能耗、成本低、無(wú)污染、產(chǎn)品收率和純度高等優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)化工藝的薄膜分散法適于制備性質(zhì)穩(wěn)定的黃酮脂質(zhì)體,同時(shí)建立的大孔樹脂富集結(jié)合UV測(cè)定黃酮脂質(zhì)體的包封率,可以作為考察荷葉黃酮脂質(zhì)體制備工藝的指標(biāo)檢測(cè)方法。
【學(xué)位授予單位】：齊魯工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;O629
【圖文】：

圖 2.3 荷葉中總黃酮與鋁鹽配合物的紫外吸收光譜圖掃描得荷葉黃酮與鋁鹽配合物在 200-650 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)的紫外吸收光譜見圖 2.3。根據(jù)樣品溶液在 510 nm 處的吸光度和測(cè)得的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得葉中總黃酮的含量為 47.39 mg/g，結(jié)果見表 2.5。表 2.5 荷葉中總黃酮的含量樣品 吸光度 A 總黃酮含量 (mg/g) 平均值 (mg/g)1 0.257 47.452 0.252 46.55347.393 0.261 48.172.3.3 HPLC 測(cè)定荷葉黃酮中金絲桃苷和槲皮素HPLC 同時(shí)測(cè)定通過(guò)雙水相萃取(等效原料 6 mg/mL)獲得的不同批次的荷黃酮中金絲桃苷和槲皮素的含量，結(jié)果如下。采用外標(biāo)法檢測(cè)并計(jì)算黃酮中金絲桃苷和槲皮素的含量，計(jì)算精制黃酮的

圖 2.4 雙水相萃取法獲得的荷葉黃酮中金絲桃苷和槲皮素的色譜圖注 2: (1) 金絲桃苷和槲皮素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；(2) 荷葉黃酮 (批號(hào) 160528):(3) 荷葉黃酮 (批號(hào) 160523): (4) 荷葉黃酮 (批號(hào) 160521):(5) 荷葉黃酮 (批號(hào) 160517); (6) 槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)溶液2.3.4 雙水相萃取的選擇性取出上相，預(yù)處理后采用磷鉬酸和碘-碘化鉀作為沉淀劑鑒定樣品中是否含生物堿，采用硫酸-蒽酮法檢測(cè)是否含多糖，采用 Bradford 法檢測(cè)是否含蛋白質(zhì)。結(jié)果均為消極反應(yīng)，即上相中不含有生物堿，多糖和蛋白質(zhì)。事實(shí)上，荷葉成分主要由生物堿，葉綠素，黃酮，多糖，蛋白質(zhì)等組成，其中葉綠素很難采用堿性水解液提取，其主要存在于草藥殘?jiān)�。多糖和蛋白質(zhì)因?yàn)槭撬苄源蠓肿樱菀追峙涞诫p水相萃取體系的下相。而黃酮類化合物容易溶解于 50-70%的乙醇溶液使其傾向于分配到雙水相萃取體系的上相。因此，該方法對(duì)黃酮類化合物的分離具有理想的提取選擇性。2.3.5 雙水相法分離純化荷葉黃酮

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2730178