發(fā)布時(shí)間：2020-06-26 04:03

【摘要】：姜黃與蟾酥是傳統(tǒng)中藥材,具有廣泛的藥用價(jià)值,目前兩者均收載于2015版《中國藥典》。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)認(rèn)為姜黃具有破血行氣,通經(jīng)止痛的功效,臨床常用于治療胸脅刺痛,胸痹心痛,痛經(jīng)經(jīng)閉,ve瘕,風(fēng)濕肩臂疼痛,跌打腫痛等。2015版《中國藥典》一部對姜黃采用性狀、薄層色譜鑒別、檢查(水分、總灰分)、姜黃素的含量測定、揮發(fā)油的含量測定等進(jìn)行質(zhì)量控制�，F(xiàn)有的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)仍未全面反應(yīng)姜黃的質(zhì)量狀況,因此,本論文建立了更加全面的姜黃質(zhì)量評價(jià)方法,包括化學(xué)成分指紋圖譜評價(jià)姜黃的整體質(zhì)量、測定姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素三種化學(xué)成分的含量,揮發(fā)油含量測定、重金屬含量測定、水分、灰分測定等。對不同等級的姜黃進(jìn)行質(zhì)量評價(jià),建立姜黃質(zhì)量等級標(biāo)準(zhǔn)。蟾酥來源于中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。多于春、秋二季捕捉蟾蜍,洗凈、擠取耳后腺和皮膚腺的白漿、加工、干燥�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,蟾酥具有抗腫瘤、強(qiáng)心、陣痛、麻痹、抗炎等功效。2015版《中國藥典》中規(guī)定蟾酥的質(zhì)量控制指標(biāo)包括性狀、鑒別、檢查(水分、總灰分、酸不溶性灰分)、含量測定(華蟾毒精與酯蟾毒配基的總含量不少于6.0%)。蟾酥中除了華蟾毒精和酯蟾毒配基外,蟾毒靈、沙蟾毒精等也具有較好的抗腫瘤、強(qiáng)心等作用。鑒于蟾酥中蟾蜍甾烯類成分的高活性、高毒性、安全窗窄,且用藥不當(dāng)易中毒等問題,亟需建立全面的質(zhì)量評價(jià)體系,有效的評價(jià)其質(zhì)量,為臨床安全有效用藥提供研究基礎(chǔ)。本論文中建立了蟾酥顯微鑒別方法,優(yōu)化薄層檢識條件,增加蟾毒靈的含量測定,新增蟾酥指紋圖譜研究,新增蟾酥重金屬含量測定,并依據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立了蟾酥質(zhì)量提高標(biāo)準(zhǔn)。1姜黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究1.1薄層檢識建立姜黃薄層檢識方法,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(96:4:0.7)為展開劑,該方法可以有效地將姜黃藥材與來源于同屬植物的藥材郁金、莪術(shù)、片姜黃區(qū)分開。通過標(biāo)準(zhǔn)品和對照藥材比對,收集的92批姜黃藥材和39批姜黃飲片均為正品。1.2姜黃素類成分含量測定收集全國各產(chǎn)地的92批姜黃藥材和39批姜黃飲片,以甲醇超聲提取45 min,以Zorbax SB-C18色譜柱(250m×4.6mm,5μm)為色譜柱,乙腈-0.1%甲酸溶液為流動相,流速1.0 mL/min,柱溫30。C,430nm下進(jìn)行含量測定分析。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地姜黃樣品中姜黃素類化合物的含量差異顯著。其中廣西和云南等產(chǎn)地姜黃藥材中姜黃素的平均含量為0.54%,3種姜黃素類總含量平均值為1.31%;飲片中姜黃素的平均含量為0.44%,3種姜黃素類總含量平均值為0.67%。四川和貴州優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)的姜黃藥材中姜黃素的平均含量為1.5%,3種姜黃素類總含量平均值為2.66%;飲片中姜黃素的平均含量為1.49%,3種姜黃素類總含量平均值為2.53%�！吨袊幍洹分幸�(guī)定姜黃藥材中姜黃素含量不少于1.0%,飲片中姜黃素的含量不少于0.9%。為了進(jìn)一步提高姜黃的品質(zhì),建立姜黃等級標(biāo)準(zhǔn)。姜黃藥材:一等品:姜黃素含量≥1.5%,3種姜黃素類總含量≥2.5%;二等品:姜黃素含量≥1.5%,2.0%≤3種姜黃素類總含量2.5%;三等品:1.0%≤姜黃素含量1.5,3種姜黃素類總含量≥2.0%。姜黃飲片:一等品:姜黃素含量≥1.4%,3種姜黃素類總含量≥2.2%;二等品:0.9%≤姜黃素含,1.5%≤3種姜黃素類總含量2.2%。1.3姜黃指紋圖譜研究采用HPLC-DAD法建立姜黃指紋圖譜分析方法,對不同產(chǎn)地藥材進(jìn)行指紋圖譜分析,據(jù)此建立指紋圖譜。姜黃指紋圖譜中共有7個(gè)共有峰,對其中4個(gè)色譜峰進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品比對,進(jìn)鑒定色譜峰分別為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素和芳姜黃酮。姜黃藥材的相似性系數(shù)在0.7-1之間,表明不同批次姜黃藥材質(zhì)量差異較大;姜黃飲片的相似性系數(shù)均在0.9以上,表明姜黃飲片質(zhì)量較為穩(wěn)定。1.4姜黃重金屬含量測定本論文采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定姜黃藥材與飲片中Cu、As、Cd、Pb等重金屬的含量。以《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》中中藥材重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)為參考依據(jù),樣品中鎘元素的超標(biāo)率為57.89%,其中四川和廣西樣品污染嚴(yán)重。其他元素的含量均符合限量標(biāo)準(zhǔn)。1.5其他檢測項(xiàng)依據(jù)《中國藥典》規(guī)定的方法檢測姜黃藥材與飲片的水分、總灰分和揮發(fā)油,檢測結(jié)果顯示樣品中水分和總灰分均符合藥典的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);姜黃藥材的揮發(fā)油含量合格率僅60%,而姜黃飲片的合格率為96%。2蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究2.1顯微鑒別建立顯微方法鑒別蟾酥中的摻假物質(zhì)。采用60%硫酸乙醇裝片,37批樣品在鏡片下觀察均有少量不溶物(蟾皮、植物纖維、沙石等),說明蟾酥加工過程中衛(wèi)生環(huán)境差。采用碘液裝片,37批中有6批樣品鏡片下出現(xiàn)具層紋的紫色顆粒,即6批樣品中摻有淀粉。2.2薄層檢識本論文建立的蟾酥薄層檢識方法可以鑒別蟾酥藥材的真?zhèn)�。以環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮(3:3:2)為展開劑,蟾毒靈、華蟾毒精和酯蟾毒配基具有較好的分離度。37批樣品經(jīng)鑒定均為蟾酥。2.3蟾酥多成分含量測定本論文共收集了37批蟾酥藥材,甲醇超聲提取20min,以Zorbax SB-C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)為色譜柱,乙腈-0.1%甲酸溶液為流動相,流速1.0mL/min,柱溫30 ℃,296nm下進(jìn)行含量測定分析。采用一測多評法測定蟾酥中的待測成分,蟾酥藥材中酯蟾毒配基與華蟾毒精的總含量在0.15%-7.37%之間,蟾毒靈在0.48%-1.99%�！吨袊幍洹芬�(guī)定蟾酥中華蟾毒精與酯蟾毒配基的總含量不少與6.0%,依據(jù)此標(biāo)準(zhǔn),5批樣品符合藥典規(guī)定。依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果制定蟾酥質(zhì)量提高標(biāo)準(zhǔn):華蟾毒精與酯蟾毒配基的總含量不少于6.0%。蟾毒靈的含量不少于1.0%。2.4 蟾酥指紋圖譜研究對不同產(chǎn)地藥材進(jìn)行指紋圖譜分析,據(jù)此建立特征指紋圖譜,蟾酥指紋圖譜中共有10個(gè)共有峰,通過標(biāo)準(zhǔn)品指認(rèn)共鑒定出8個(gè)色譜峰(11α-OH蟾毒靈、沙蟾毒精、5-OH蟾毒靈、蟾毒它靈、5-OH華蟾毒精、為蟾毒靈、華蟾毒精、酯蟾毒配基)。2.5其他檢測項(xiàng)依據(jù)《中國藥典》中規(guī)定的方法檢測蟾酥藥材總灰分的含量,檢測結(jié)果顯示樣品中總灰分符合藥典的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定蟾酥中重金屬Cu、As、Cd、Pb的含量,結(jié)果顯示13批藥材中僅有1批樣品的銅含量超標(biāo),其他元素含量均在限量值以下。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1
【圖文】：

的生長［３］。Ｃａｌｅｂｉｎ－Ａ衍生物（化合物１３－１５）的結(jié)構(gòu)中Ｃ－３與Ｃ－４是通過Ｏ來連接，逡逑結(jié)構(gòu)與姜黃素類似，這種化合物可以抑制細(xì)胞生長和誘導(dǎo)耐藥人胃癌細(xì)胞凋亡［４］。逡逑具體化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖１。逡逑：：Ｃｒ＾Ｓｘ逡逑１２邐３邐４逡逑0邐００邐Ｏ邋Ｏ邐0邋ＯＨ邋０逡逑ｈ，ｃ0邋丫、／ｈ，ｃ0邋丫、逡逑５邐６邐７邐８逡逑ＯＨ邋Ｏ邋Ｏ邐0邋ＯＨ邐Ｈ0ｙ＊＾邐Ｈ0＇Ｙ／５！ｉ１邐＾＾Ｙ0Ｈ逡逑ＨｉＣＯＸＡ＾ｑＡＪ１ＯＣＨｊ逡逑Ｏ邐０逡逑ＩＸＴ－＾Ｃ：邋ＩＩ＾ＸＸ：逡逑ＯＣＨ，逡逑１３邐１４邐１６Ｒ，＝Ｈ，邋Ｒ，＝ＯＨ邐２１邋Ｒ，＝Ｒ邋Ｒ，＝０Ｈ逡逑１７邋Ｒ，＝０ＣＨ３＞邋Ｒ２＝ＯＨ邐２２邋Ｒ，＝ＯＣＨ３，邋Ｒ２＝ＯＨ逡逑0邐ｆＹＷ邐ｌＳＲ＾Ｈ，邋Ｒ，＝Ｈ邐２３邋Ｒ

這一類成分，但受限于當(dāng)時(shí)的分離手段，并未獲得單體化合物。林雄浩等人在逡逑ＨＰＬＣ－ＤＡＤ－ＭＳｎ的指導(dǎo)下，對特定流分進(jìn)行富集，并對該部位有針對性分離，最逡逑終獲得２６個(gè)結(jié)構(gòu)新穎的萜取代姜黃素類成分Ｗ，結(jié)構(gòu)見圖２。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯逡逑示，部分此類成分對人肺癌細(xì)胞（Ａ５４９）、肝癌細(xì)胞（ＨｅｐＧ２）和乳腺癌細(xì)胞（ＭＤＡ－逡逑ＭＢ－２３１和ＭＣＦ－７）的細(xì)胞毒活性明顯強(qiáng)于姜黃素。如ｔｅｒｐｅｃｕｒｃｕｍｉｎＱ對Ａ５４９、逡逑ＨｅｐＧ２、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１邋及邋ＭＣＦ－７邋的邋ＩＣ５０邋分別為邋９．０、７．６、８．３、３．９ｐＭ，而姜黃逡逑素的ＩＣ５Ｇ均大于３０邋ｐＭ。進(jìn)一步的機(jī)制研宄發(fā)現(xiàn)，部分萜取代姜黃素主要通過激逡逑活ＲＯＳ介導(dǎo)的ｐ３８／Ｈ２ＡＸ信號通路從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用［６＿７］。逡逑ＯＨ邐Ｏ邋ＯＨ邐Ｏ邋ＯＮ邐０邋ＯＨ逡逑ｈ0ＸＪ邐ｕｏＸＪ邐Ｕｌ0逡逑２６邐２７邐２８邐２９逡逑Ｏ邋ＯＨ邐０邋ＯＨ邐０邋ＯＨ邐ＯＨ邋０逡逑？0Ｕ邐｜邐：邋ｈＹ＾0Ｍ逡逑＾ｉｒＴＹ逡逑３０邐３１邐３２邐３３逡逑ＯＨ邋Ｏ邐ＯＨ邋Ｏ邐ＯＨ邋Ｏ邐ＯＨ邋Ｏ逡逑ＡＪＵｇ＂邋＾邋ＸＪＬ＾邐ＸＸＡ邋＾邋ＸｌＡ逡逑３４邐３５邋Ｉ邐３６邋ＯＨ邐３７邋Ｌ逡逑ＯＨ邋Ｏ邐ＯＨ邋０邐ＯＨ邋Ｏ邐ＯＨ邋Ｏ逡逑ＨｏＡ；邋．邋．Ｕｏｈ邐Ｈ0ＸＸ邋Ｐ：ｉ0邐ＪＪ邋0邋Ｕ0邐ＨｏＸＸ邋Ｖ0Ｈ逡逑３８邐３９邐＾邐４０邐＊Ｈ邐４１逡逑ＯＮ邋０邐／逡逑ＨｉＣ０、＾＿

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2729796