【摘要】：目的乳腺癌是目前最常見的女性惡性腫瘤之一,全球發(fā)病率正在逐年上升。中醫(yī)學認為乳腺癌屬本虛標實之證,本虛為主,乳腺癌患者普遍存在氣血虧虛,故乳腺癌應以扶正固本為總則,施以益氣補血法治療。然而益氣補血方藥對惡性腫瘤的臨床療效一直存在爭議,部分臨床醫(yī)生懼用補益類中藥�；谥嗅t(yī)扶正固本治則指導和課題組前期研究,本實驗擬通過4T1乳腺癌荷瘤小鼠造模后給予當歸、黃芪治療,探討益氣補血法對4T1乳腺癌小鼠血清及腫瘤組織IL-10、TGF-β1的影響。方法選取健康的BALB/c小鼠,通過皮下種植4T1乳腺癌細胞,建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型。將小鼠分為9組:空白對照組(N)、模型組(M)、當歸低劑量組(DL)、當歸中劑量組(DM)、當歸高劑量組(DH)?黃芪低劑量組(HL)、黃芪中劑量組(HM)、黃芪高劑量組(HH)、環(huán)磷酰胺組(CTX)。分別依次給予生理鹽水(0.2m L)、生理鹽水(0.2m L)、低劑量當歸(10mg/kg)、中劑量當歸(30mg/kg)、高劑量當歸(100mg/kg)、低劑量黃芪(30mg/kg)、中劑量黃芪(100mg/kg)、高劑量黃芪(300mg/kg)、CTX(30mg/kg)治療。造模48h后開始給藥,每3天給藥1次,空白對照組、模型對照組和中藥組采用灌胃給藥,CTX組采用腹腔注射給藥。每周觀察小鼠的精神狀態(tài)、皮毛光澤度等基本情況,測量并記錄體重和腫瘤長短徑,運用公式計算腫瘤體積,繪制體重增長曲線和腫瘤生長曲線。造模當天記為第1天,第28天進行眼眶取血,剖取原位瘤、胸腺、腫瘤同側腋窩下淋巴結、肺臟及脾臟,稱重并計算各臟器指數(shù);肉眼觀察臟器的質地、大小,并拍照記錄;用10%福爾馬林固定肺臟48h后,肉眼觀察并記錄各組的肺轉移灶大小,分別記錄數(shù)目;解剖后將各組的胸腺和腫瘤組織放入10%福爾馬林中固定,通過蘇木素-伊紅(HE)染色,觀察當歸、黃芪對胸腺組織形態(tài)學的影響;目內眥取血后,采用血常規(guī)檢測和血涂片法,觀察當歸、黃芪對外周血象和細胞形態(tài)的影響;通過ELISA法,分析當歸、黃芪對血清及腫瘤組織IL-10和TGF-β1水平的影響;通過免疫組化(IHC)法,分析當歸、黃芪對胸腺組織CD3和腫瘤組織IL-10和TGF-β1表達的影響。結果與模型組相比,低劑量當歸組顯著升高淋巴細胞數(shù)LYMPH、嗜酸性粒細胞數(shù)EO。中劑量當歸組顯著升高淋巴細胞數(shù)LYMPH、大未染細胞數(shù)LCU。顯著降低了嗜堿性粒細胞數(shù)BASO、嗜堿性粒細胞百分比BASO%、平均紅細胞血紅蛋白MCH、血紅蛋白分布寬度CHDW。與模型組相比,低劑量黃芪組顯著降低嗜堿性粒細胞百分比BASO%、平均紅細胞血紅蛋白量MCH、血紅蛋白分布寬度HDW。中劑量黃芪組顯著降低嗜堿性粒細胞百分比BASO%、血紅蛋白分布寬度HDW;高劑量黃芪組顯著降低單核細胞數(shù)MONO、單核細胞百分比MONO%、嗜堿性粒細胞數(shù)BASO、嗜堿性粒細胞百分比BASO%、平均紅細胞體積MCV。與正常組相比,模型組小鼠的胸腺重量、胸腺指數(shù)明顯下降。與模型組相比,高劑量當歸組胸腺重量、胸腺指數(shù)顯著升高,并接近正常組。低劑量黃芪組和高劑量黃芪組胸腺重量明顯增加,胸腺指數(shù)顯著升高。與正常組相比,模型組小鼠的肺、脾、淋巴結重量明顯增加,肺、脾、淋巴結指數(shù)明顯升高。與模型組相比,低劑量當歸組淋巴結、肺重量明顯增加,淋巴結、肺指數(shù)顯著升高。中劑量當歸組肺指數(shù)明顯升高。中劑量黃芪組(P0.05)肺指數(shù)較模型組明顯升高。模型組小鼠普遍發(fā)生肺轉移。與模型組相比,低劑量當歸組、中劑量當歸組、高劑量當歸組、低劑量黃芪組和高劑量黃芪組的肺大轉移灶數(shù)明顯下降。低劑量黃芪組和高劑量黃芪組的肺總轉移灶數(shù)和肺轉移率也明顯下降。正常組小鼠的胸腺組織,淋巴細胞結構清晰,輪廓清楚,分布均勻;模型組小鼠的胸腺組織,淋巴細胞形態(tài)、大小不一,量少而稀疏;CTX組小鼠的胸腺組織,淋巴細胞大小不一,排列紊亂,細胞核形態(tài)各異;當歸和黃芪組胸腺組織淋巴細胞有不同程度的改善。與正常組相比,模型組CD3陽性表達顯著降低。CTX組CD3陽性表達較模型組增多。與模型組相比,低、中、高劑量當歸組和低、中、高劑量黃芪組胸腺的CD3陽性表達均有不同程度的增加。模型組血清IL-10水平與正常組相比顯著升高。中、高劑量黃芪組和CTX組小鼠血清IL-10水平均顯著低于模型組。模型組血清TGF-β1水平與正常組相比顯著升高。與模型組相比,低、中劑量當歸組小鼠血清TGF-β1水平顯著降低;低、中劑量黃芪組小鼠血清TGF-β1水平顯著降低;CTX組小鼠血清TGF-β1水平顯著降低。乳腺癌腫瘤組織IL-10和TGF-β1表達陽性,模型組腫瘤組織呈現(xiàn)IL-10高表達。CTX組腫瘤的IL-10陽性表達較模型組明顯降低。與模型組相比,低、中、高劑量當歸組和低、中、高劑量黃芪組腫瘤的IL-10陽性表達均有減少。其中,各劑量黃芪組減少更明顯。模型組腫瘤組織呈現(xiàn)TGF-β1高表達。CTX組腫瘤的TGF-β1陽性表達較模型組明顯降低。與模型組相比,各劑量當歸組和黃芪組腫瘤的TGF-β1陽性表達均減少。結論1.當歸、黃芪能改善4T1乳腺癌小鼠外周血淋巴細胞和嗜堿性粒細胞異常,改善胸腺結構,增加胸腺重量和指數(shù),減少肺轉移,具有一定的抗乳腺癌作用。2.IL-10和TGF-β1可能是當歸、黃芪改善4T1乳腺癌小鼠外周血象、降低肺轉移的作用機制之一。
【學位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 5 當歸、黃芪對 4T1 乳腺癌小鼠肺、脾和腫瘤重量的影響注：與正常組比較，#P<0.05,##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.010200400600800100012001400N M DL DM DH HL HM HH CTX量（重gm）肺重量 脾重量 腫瘤重量##*****##

塵樣的紫紅色顆粒，胞核大，核形不規(guī)則，呈腎形、馬蹄形等，常折疊彎曲，淡紫紅色，染色質細致、疏松如網(wǎng)狀。由圖9可見，乳腺癌荷瘤小鼠的中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞增多

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本文編號：2729727