【摘要】：目的:觀察外源性線粒體損傷相關分子模式(MTDs)對肺泡巨噬細胞(AM)的致炎作用,以及自噬對MTDs誘導的炎癥反應的影響,初步探討自噬調(diào)控MTDs致炎作用的分子機制。方法:提取SD大鼠肝臟組織MTDs,采用Janus Green B進行線粒體染色;體外培養(yǎng)NR8383細胞,分別予non-MTDs、MTDs、LPS+Nigericin、RAPA+MTDs、3-MA+MTDs、MCCC950、MCCC950+MTDs處理,采用ELISA檢測細胞上清液中的炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-18含量,采用Western Blot檢測細胞中NLRP3、ASC、Pro-caspase-1和Pro-IL-1β的表達和上清液中成熟caspase-1、IL-1β含量,采用免疫熒光檢測細胞中LC3標記自噬小體和ASC聚合體形成,采用透射電子顯微鏡檢測自噬小體形成,采用RT-qPCR檢測細胞中NLRP3、ASC和caspase-1mRNA的表達。結(jié)果:1、Janus Green B染色顯示成功富集線粒體;MTDs刺激AM后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18含量較control組或non-MTDs處理組顯著升高,細胞中NLRP3、ASC和Pro-caspase-1蛋白表達增多。2、RAPA預處理AM后予以MTDs刺激,自噬小體較control組或單純MTDs組增多,3-MA預處理AM后未見自噬小體;與MTDs組相比,RAPA+MTDs組上清液中IL-1β和IL-18含量減少,TNF-α含量無明顯變化,3-MA+MTDs組上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18含量變化無顯著差異。3、RAPA或3-MA預處理的AM予以MTDs刺激,與MTDs組相比,RAPA+MTDs組上清液中成熟caspase-1和IL-1β含量,以及細胞中ASC聚合體、NLRP3、ASC和Pro-caspase-1蛋白表達均顯著減少,相反,3-MA+MTDs組均無顯著差異;但是RAPA和3-MA預處理對MTDs誘導AM細胞中Pro-IL-1β蛋白和NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA表達均無顯著影響。4、MCC950預處理AM后予以MTDs刺激,與MTDs組相比,MCC950組細胞上清液中IL-1β和IL-18含量明顯降低,成熟caspase-1和IL-1β含量顯著減少,細胞中ASC聚合體形成減少,但是上清液中TNF-α含量以及細胞中Pro-caspase-1和Pro-IL-1β蛋白表達無顯著改變。結(jié)論:外源性MTDs可以誘導大鼠AM炎癥因子分泌和NLRP3炎性體相關蛋白表達,誘導自噬可以減輕MTDs誘導的炎癥反應,初步分析其機制主要是自噬降低MTDs活化的NLRP3炎性體的穩(wěn)定性,促進其降解,減少caspase-1活化,抑制炎性體特異性炎癥因子IL-1β和IL-18成熟和分泌。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

第 1 章 引言器給溶酶體，進行降解，以利于細胞重新利用的過程，因此自噬被認為是一種胞內(nèi)物質(zhì)循環(huán)再利用的機制[33]。Saitoh 等[34]敲除 ATG16L1，抑制自噬小體形成，降低自噬相關的降解，增強巨噬細胞 caspase-1 活化，促進炎癥因子 IL-1β 和 IL-18成熟和分泌，增強內(nèi)毒素誘導小鼠的炎癥反應。而敲除自噬相關基因或 3-MA 處理抑制自噬可增強 NLRP3 炎性體活化，促進炎癥因子分泌，促進中性粒細胞浸潤，增加膿毒癥死亡率[35,36]。相反，自噬誘導劑可以抑制 NLRP3 炎性體活化，減輕 DAMP 誘導的炎癥反應[37,38]。這些研究表明，自噬可抑制 NLRP3 炎性體活化，減少炎性體特異性炎癥因子的分泌，改善炎性體相關疾病，但自噬對 MTDs誘導的 NLRP3 炎性體活化的調(diào)控作用仍未見報道，基于以上研究推測，自噬可能通過減少 MTDs 誘導的 NLRP3 炎性體活化，減輕 AM 炎癥反應，從而改善創(chuàng)傷后 ARDS（圖 1-1）。

第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果3.1 MTDs 誘導 AM 炎癥反應3.1.1 線粒體 Janus Green B 染色提取線粒體后，采用 Janus Green B 對線粒體進行染色觀察。線粒體經(jīng) JanusGreen B 染色后，內(nèi)膜呈藍綠色，線粒體懸液光鏡下可見大量藍綠色線粒體，而去線粒體上清中，只看到極少量藍綠色的線粒體（圖 3-1），提示成功獲得高濃度線粒體。

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陳英,彭心昭,樸英杰;自噬分子機制的研究動向[J];解剖科學進展;2000年04期

2 葉青;鄭民華;;自噬的分子機制與病理生理意義[J];國際病理科學與臨床雜志;2007年04期

3 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細胞存活和死亡中的作用[J];生理科學進展;2008年01期

4 張志才;邵增務;;自噬分子機制的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2008年01期

5 趙勇;師長宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機制[J];中國比較醫(yī)學雜志;2010年10期

6 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

7 伍靜;趙勇;師長宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2010年20期

8 王雄;譚璐;;自噬研究進展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

9 卞龍艷;;運動與自噬的關系進展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2011年07期

10 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關系的研究[J];合肥師范學院學報;2011年06期

相關會議論文 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機制[A];中國活性氧生物學效應學術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強;劉春風;蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2009年學術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細胞—生命的基礎——中國細胞生物學學會2013年全國學術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對活體細胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設計[A];中國化學會第28屆學術(shù)年會第8分會場摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導小鼠肝細胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學科學前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導致的自噬[A];中華醫(yī)學會第十三次全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

相關重要報紙文章 前8條

1 生命學院;俞立課題組在《科學》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報;2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進展[N];廣東科技報;2011年

4 楊一唯邋記者 王春;我科學家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應新機制[N];科技日報;2007年

5 王蔚;我國科學家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應新機制[N];大眾科技報;2007年

6 記者 徐瑞哲;第三者“插足”抑制炎癥反應[N];解放日報;2007年

7 記者白毅;炎癥反應中淋巴結(jié)重塑新機制被揭示[N];中國醫(yī)藥報;2011年

8 記者 耿挺;尋找炎癥反應蛋白[N];上海科技報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學;2015年

2 皮會豐;DNM1L蛋白介導的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

3 李倩;miRNAs介導的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

4 黎炳護;激活TRPV1誘導自噬在血管平滑肌細胞泡沫化中作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機制研究[D];上海交通大學;2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學;2015年

8 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細胞自噬的研究[D];上海交通大學;2012年

9 袁揚;線粒體自噬的抗缺血性腦損傷作用及其調(diào)控機制研究[D];浙江大學;2016年

10 夏小靜;IFN-γ誘導的自噬對奶牛乳腺上皮細胞泌乳與細胞增殖及抗細菌感染的調(diào)控[D];吉林大學;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 彭菲菲;自噬降低外源性MTDs誘導肺泡巨噬細胞炎癥反應的機制研究[D];南昌大學;2017年

2 匡紅;Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學;2015年

3 洪永桃;自噬在類風濕關節(jié)炎滑膜成纖維細胞中的作用及甲氨蝶呤對自噬的影響[D];川北醫(yī)學院;2015年

4 李寧;自噬在嗎啡心肌保護中的作用及機制研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

5 劉冰;腦缺血預處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學;2014年

6 王存凱;microRNA-30a-5p通過抑制自噬阻止肝星狀細胞激活[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

8 唐芙蓉;自噬對奶山羊雄性生殖干細胞生物學特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

9 陳軍童;腎損傷分子1對高糖誘導人腎小管上皮細胞自噬作用的影響[D];鄭州大學;2015年

10 包勇;Kap1在LBH589誘導的乳腺癌細胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復旦大學;2013年

本文編號：2728880