【摘要】：目的:利用放射線誘導(dǎo)建立急性放射性腸炎(Acute Radiation Enteritis ARE)大鼠模型,觀察經(jīng)方“下瘀血湯”對ARE大鼠模型的治療作用,初步探討其作用機理,并基于此研究上分析“下瘀血湯”的組成成分,進一步探討其有效組分大黃酸對ARE大鼠模型的治療作用及相關(guān)分子機制,為臨床應(yīng)用經(jīng)方“下瘀血湯”及其有效組分治療ARE提供理論及實驗依據(jù)。方法:將30只雄性大鼠隨機分為3組,A組即正常對照組(n=10);B組即生理鹽水對照組(n=10);C組即下瘀血湯組(n=10)。B組、C組以高能醫(yī)用X射線I0Gy單次局部照射建立急性放射性腸炎大鼠模型。從照射后第1日開始,除正常對照組,B組、C組分別以生理鹽水及下瘀血湯對其進行干預(yù),連續(xù)灌胃7天,每日觀察大鼠體質(zhì)量衰減百分率、糞便性狀、便血、自主活動等一般情況。用HE染色法觀察大鼠模型回腸和結(jié)腸的組織病理學(xué)變化;采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定大鼠模型血清中炎性相關(guān)因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-αα)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素(IL-6)水平;免疫組化實驗測定大鼠模型腸道組織中相關(guān)炎性因子TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá)。通過高效液相色譜法(HPLC)分析下瘀血湯中有效成分及含量測定。確定主要組分后,選取“下瘀血湯”中有效成分大黃酸并進一步探討其對急性放射性腸炎大鼠模型的治療作用,將50只雄性大鼠隨機分為5組,分別為A組正常對照組(n=10);B組生理鹽水對照組(n=10);C組大黃酸組(n=30),C組又分 C1:大黃酸(9ug/100g)組(n=10)、C2:大黃酸(18ug/100g)組(n=10)及 C3:大黃酸(36ug/100g)組(n=10)。用同樣的方法造模型及給藥,進行疾病活動度指數(shù)(DAI)評分,HE染色法觀察大鼠模型回腸和結(jié)腸的組織病理學(xué)變化;免疫組化實驗測定大鼠模型腸道組織中相關(guān)炎性因子TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定大鼠模型血清中一氧化碳(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;western-blot檢測大鼠模型腸道組織中PPAR-γ、NF-kB的表達(dá)。結(jié)果:1、本實驗利用醫(yī)用X射線直線加速器照射大鼠腹部,成功建立急性放射性腸炎大鼠模型。2、造模成功后,與正常對照組相比較,各照射組大鼠均出現(xiàn)不同程度的體質(zhì)量、糞便性狀及自主活動的改變,下瘀血湯治療組一般情況及排便情況較生理鹽水組好。3、HE染色法觀察大鼠模型回腸和結(jié)腸的組織病理學(xué)變化,照射后下瘀血湯治療組大鼠模型回腸與結(jié)腸腸粘膜基本完整,炎癥較輕;而生理鹽水組大鼠模型腸道組織出現(xiàn)粘膜壞死、脫落、腺體萎縮,炎癥反應(yīng)重等情況。4、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定大鼠模型血清中炎癥相關(guān)因子水平,結(jié)果顯示下瘀血湯治療組與生理鹽水組相比,血清中TNF-α的含量顯著降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。IL-1及IL-6的含量降低則更為顯著(P0.01)。5、免疫組化實驗測定大鼠模型腸道中炎癥相關(guān)因子水平,結(jié)果顯示下瘀血湯治療組與生理鹽水組相比,在大鼠模型回腸組織中TNF-α陽性率顯著降低(P0.01);IL-1陽性率有顯著性差異(P0.05);IL-6陽性率有顯著性差異(P0.05)。下瘀血湯治療組與生理鹽水組相比,在大鼠模型結(jié)腸組織中TNF-α 陽性率顯著降低(P0.01);IL-1陽性率有顯著性差異(P0.01);IL-6陽性率有顯著性差異(P0.05),均有統(tǒng)計學(xué)差異。6、“下瘀血湯”中含有以下成分:苦杏仁苷、尿嘧啶、大黃酸和大黃素。7、造模成功后,與正常對照組相比較,各照射組大鼠均出現(xiàn)不同程度的體質(zhì)量、糞便性狀及自主活動的改變,大黃酸治療組一般情況及排便情況較生理鹽水組好。8、HE染色法觀察大鼠模型回腸和結(jié)腸的組織病理學(xué)變化,照射后生理鹽水組大鼠模型腸組織出現(xiàn)粘膜破壞,絨毛剝脫和隱窩萎縮;大黃酸治療組大鼠模型腸組織絨毛及腸粘膜的凝固性壞死較少,炎癥較輕。大黃酸治療組三個亞組(C1、C2、C3)中,C2組的腸損傷較C1組輕(P0.05),C3組的腸損傷又較C2組輕(P0.05),均有統(tǒng)計學(xué)差異。9、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定大鼠模型血清中NO、SOD、GSH和MDA的含量,實驗結(jié)果顯示,與正常對照組相比較,各照射組大鼠模型血清中NO和MDA升高(P0.01),SOD和GSH活性降低(P0.01),大黃酸治療組大鼠模型血清中的NO和MDA含量較生理鹽水組顯著降低(P0.01),而SOD和GSH活性較生理鹽水組高(P0.01)。大黃酸治療組的三個亞組(C1、C2、C3)中,C3組的NO和MDA含量較C1、C2組低(P0.01),SOD和GSH活性較C1、C2組高(P0.01),均有統(tǒng)計學(xué)差異。10、免疫組化實驗測定大鼠腸道中炎癥相關(guān)因子水平,結(jié)果顯示,與正常對照組相比較,各照射組大鼠模型腸道組織中TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá)均升高(P0.05),且生理鹽水組大鼠模型腸道組織中的TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá)明顯高于大黃酸治療組(P0.05),大黃酸治療組的三個亞組(C1、C2、C3)中,C3組腸道中的TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá)較C1、C2組低(P0.05),C1、C2組腸道組織的TN F-α、IL-1、IL-6的表達(dá)對比無明顯異常(P0.05),均有統(tǒng)計學(xué)意義。11、通過western-blot檢測大鼠模型腸道組織中PPAR-γ/NF-kB的表達(dá),實驗結(jié)果顯示,與正常對照組相比較,各照射組大鼠PPAR-γ的表達(dá)顯著降低(P0.01),大黃酸治療組的PPAR-γ的表達(dá)明顯高于NS組(P0.01),大黃酸治療組的三個亞組中,組間差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。相反,各照射組大鼠的NF-kB的表達(dá)顯著升高(P0.01),大黃酸治療組的NF-kB的表達(dá)明顯低于NS組(P0.01),大黃酸治療組的三個亞組中,隨著大黃酸濃度的升高,NF-kB的表達(dá)降低(P0.01)。結(jié)論:1、“下瘀血湯”可以有效的減輕急性放射性腸炎大鼠模型的癥狀,如消瘦、腹瀉、便血等。2、“下瘀血湯”對急性放射性腸炎大鼠模型的腸粘膜具有保護作用,能夠有效的降低大鼠血清及腸道組織中炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1和IL-6的濃度。3、初步判定“下瘀血湯”中含有以下成分:大黃酸、苦杏仁苷、尿嘧啶和大黃素。4、“下瘀血湯”中有效成分大黃酸可以有效減輕急性放射性腸炎大鼠模型的癥狀,如消瘦、腹瀉、便血等。5、“下瘀血湯”中有效成分大黃酸能夠降低大鼠模型腸道組織中炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1和IL-6的濃度而發(fā)揮對急性放射性腸炎的抗炎作用。6、“下瘀血湯”中有效成分大黃酸能夠通過提高大鼠模型血清中SOD和GSH的含量及降低NO和MDA的表達(dá)從而達(dá)到對急性放射性腸炎的抗氧化損傷作用。7、“下瘀血湯”中有效成分大黃酸有效治療急性放射性腸炎的作用機理與PPAR-γ/NF-kB通路作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

粘膜層凝固性壞死，Ｃ組大鼠模型腸道組織無明顯炎性細(xì)胞浸潤，小部分回腸粘膜層至肌逡逑層凝固性壞死；Ｂ組大鼠模型結(jié)腸組織可見局部上皮細(xì)胞脫落壞死，Ｃ組大鼠模型結(jié)腸粘逡逑膜基本正常（圖１－３）。逡逑正常組邐生押鹽水組邐下Ｗｆｌｌ湯紺逡逑：：；丨逡逑圖１－３放射性腸炎大鼠模型回腸及結(jié)腸組織的病理改變逡逑４．邋３酶聯(lián)免疫法（ＥＬＩＳＡ）檢測放射性腸炎大鼠血清中ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１、ＩＬ－６的含量逡逑處死后大鼠用ＥＬＳＩＡ法檢測血清中ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌ、ＩＬ－６含量，結(jié)果如（（表１－２，閣１－４）逡逑所示，Ｃ組與Ｂ組相比，大鼠模型血清中ＴＮＦ－ａ的含量顯著降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０１）。逡逑９逡逑

邐丁逡逑■ｇｉｌｌ逡逑圖１－３大鼠模型的體重變化逡逑４．邋２大鼠模型回腸及結(jié)腸形態(tài)組織學(xué)改變逡逑處死后將各組大鼠的回腸及結(jié)腸組織在光鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)Ｂ組大鼠回腸粘膜層有較多逡逑淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和少量中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，大部分絨毛上皮糜爛，絨毛和逡逑粘膜層凝固性壞死，Ｃ組大鼠模型腸道組織無明顯炎性細(xì)胞浸潤，小部分回腸粘膜層至肌逡逑層凝固性壞死；Ｂ組大鼠模型結(jié)腸組織可見局部上皮細(xì)胞脫落壞死，Ｃ組大鼠模型結(jié)腸粘逡逑膜基本正常（圖１－３）。逡逑正常組邐生押鹽水組邐下Ｗｆｌｌ湯紺逡逑：：；丨逡逑圖１－３放射性腸炎大鼠模型回腸及結(jié)腸組織的病理改變逡逑４．邋３酶聯(lián)免疫法（ＥＬＩＳＡ）檢測放射性腸炎大鼠血清中ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１、ＩＬ－６的含量逡逑處死后大鼠用ＥＬＳＩＡ法檢測血清中ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌ、ＩＬ－６含量，結(jié)果如（（表１－２，閣１－４）逡逑所示，Ｃ組與Ｂ組相比，大鼠模型血清中ＴＮＦ－ａ的含量顯著降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０１）。逡逑９逡逑

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本文編號：2729014