炙甘草湯含藥血清對hERG鉀通道的影響

發(fā)布時間：2020-06-23 18:08

【摘要】：心律失常是臨床上常見疾病,多種疾病如高血壓,心肌梗塞,心力衰竭、心肌缺血等時常伴隨有心律失常。室性心動過速,室顫等惡性心律失常死亡率高,嚴重威脅人類的生命健康。目前經(jīng)典的抗心律失常藥物作用靶點單一,不良反應(yīng)多。雖然現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展使臨床不斷獲益,但心律失常仍然是棘手的問題之一。近年來,人們的目光逐漸轉(zhuǎn)向傳統(tǒng)中藥,中藥用藥人群廣,應(yīng)用時間長,往往具有多靶點,多層次的優(yōu)勢,能夠從整體觀調(diào)節(jié)病人機體。作為治療心律失常的經(jīng)典名方,炙甘草湯獲得了人們的青睞,研究發(fā)現(xiàn),炙甘草湯對心律失常病人,以及多種藥物誘發(fā)的動物心律失常模型都有明顯的預(yù)防和治療作用。一般認為炙甘草湯可以延長心肌細胞動作電位時程(APD),來對抗快速型心律失常。進一步研究發(fā)現(xiàn),炙甘草湯含藥血清抑制L-型鈣電流和瞬時外向鉀電流(Ito)的綜合結(jié)果導(dǎo)致了APD的延長。快激活延遲整流鉀電流(Ikr)是動作電位復(fù)極3期的主要組成成分,hERG(Kv11.1)是心肌細胞中Ikr的α亞單位,與輔助亞單位KCNE1或KCNE2(MiRP2)共同組成Ikr。影響Ikr會導(dǎo)致動作電位發(fā)生明顯改變,Ikr通道是抗心律失常藥物的重要靶點。炙甘草湯對Ikr的影響如何,尚未見報道。由于原生心肌細胞Ikr電流較小,且不易與其他鉀電流分離,所以本研究采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hERG的HEK293細胞系,在細胞和分子水平上探討炙甘草湯對Ikr通道的影響。本研究采用膜片鉗技術(shù),觀察了炙甘草湯含藥血清對兔心肌細胞動作電位的作用,進一步探討了炙甘草湯含藥血清對表達在HEK293細胞中hERG鉀通道的作用,希望為解釋該方抗心律失常提供新的思路,為中藥的開發(fā)及現(xiàn)代化研究做出貢獻。第一部分炙甘草湯含藥血清對兔心室肌細胞動作電位的影響目的:在急性分離的兔心室肌細胞中探究炙甘草湯含藥血清對動作電位(AP)的影響。方法:炙甘草湯按照傳統(tǒng)工藝煎煮,濃縮。兔連續(xù)灌胃5天后取血,離心,得到相應(yīng)血清。酶解法急性分離正常兔心室肌細胞,采用穿孔膜片鉗技術(shù)記錄動作電位,比較不同濃度空白血清和含藥血清對動作電位的影響。結(jié)果:與藥前相比,不同濃度空白血清對兔心肌細胞動作電位無明顯影響(p0.05),而含藥血清則濃度依賴性地延長了apd。與給藥前相比,5%,10%,20%,40%的含藥血清分別使兔心肌細胞的apd50延長了14.17%,56.26%,44.61%和87.06%(p0.01),apd90延長了10.07%,26.54%,45.86%和55.49%(p0.01),沖洗后apd50和apd90可部分恢復(fù),但沒有達到藥前水平。不同濃度的含藥血清對兔心肌細胞apa和vmax沒有顯著影響(p0.05)。結(jié)論:炙甘草湯含藥血清濃度依賴性延長兔心室肌細胞動作電位時程。第二部分炙甘草湯含藥血清對herg鉀通道的作用目的:觀察灌流給予炙甘草湯含藥血清對herg鉀電流的影響,并從通道動力學(xué)角度闡述給藥引起電流變化的原因。方法:在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染herg的hek293細胞中灌流給予0%,5%,10%,20%,40%空白血清和含藥血清,全細胞膜片鉗技術(shù)記錄herg鉀電流,觀察空白血清及含藥血清對電流的影響。結(jié)果:(1)空白血清和含藥血清對herg鉀電流的作用:給予20%含藥血清5min后,抑制作用達到最大,沖洗后電流不能完全恢復(fù);+20mv下5%,10%,20%,40%含藥血清對herg鉀電流的抑制率分別為15.73%,38.15%,46.73%和51.09%(p0.05),用hill方程擬合量效關(guān)系曲線后得到ic50為15.47%,20%空白血清給藥后沒有抑制作用。(2)空白血清和含藥血清對herg鉀電流大小的影響:5%-40%空白血清對herg鉀電流的電流大小沒有影響,5%-40%含藥血清可以明顯減小herg鉀電流。與0%含藥血清相比,5%-40%含藥血清使激活曲線左移,半數(shù)激活電壓從0%含藥血清的-13.21±1.04mv分別減小為-18.01±0.62mv,-17.84±0.69mv,-20.26±0.52mv,-20.70±0.52mv(p0.05),對曲線斜率因子k無顯著影響。(3)20%炙甘草湯含藥血清對herg鉀通道激活過程的影響:激活時間常數(shù)顯示隨著去極化電壓增大,激活時間變短,相同激活電壓下,含藥血清使激活時間變長(p0.01),減慢了herg鉀通道的激活。(4)20%炙甘草湯含藥血清對herg鉀通道去活過程的影響:隨著去極化電壓的增大,快、慢去活時間常數(shù)也隨之增大。相同電壓下,20%含藥血清可以增加快、慢去活時間常數(shù)(P0.01),延長去活過程,沖洗可部分恢復(fù)但不能完全糾正含藥血清對去活過程的影響。(5)20%炙甘草湯含藥血清對hERG鉀通道穩(wěn)態(tài)失活過程的影響:給予20%含藥血清后半數(shù)失活電壓增加了4.34mV(P0.01),普通外液沖洗后可使半數(shù)激活電壓恢復(fù)到藥前水平(P0.01),即20%含藥血清可以加速hERG鉀通道的失活過程,沖洗后可恢復(fù)含藥血清對hERG鉀通道穩(wěn)態(tài)失活過程的影響。(6)20%炙甘草湯含藥血清對hERG鉀通道復(fù)活過程的影響:20%含藥血清延長復(fù)活時間常數(shù),減慢通道恢復(fù),沖洗后可部分恢復(fù)但不能完全糾正含藥血清對復(fù)活過程的影響(P0.01)。結(jié)論:炙甘草湯含藥血清通過加速hERG通道失活,減慢hERG通道激活、去活和復(fù)活來降低hERG電流。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

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