【摘要】：目的:通過研究益氣養(yǎng)陰方含藥血清對非小細胞肺癌A549細胞株的增長抑制、細胞周期改變、PCNA mRNA和蛋白表達以及VEGF mRNA和蛋白表達的影響,探討其誘導腫瘤休眠的機制。方法:20只SD大鼠隨機分為4組,對照組、高劑量組、中劑量組和低劑量組,每組5只。將益氣養(yǎng)陰方熬煮濃縮,中劑量為等效劑量,即每天需給與生藥量10.26 g/100g大鼠;高劑量乘以1.5,即每天需給與生藥量15.39 g/100 g大鼠;低劑量除以1.5,即每天需給與生藥量6.84 g/100 g大鼠。對照組給予等量生理鹽水,連續(xù)灌胃3天。末次給藥后2 h采眼眶血,分離出含藥血清,將采自同組5只小鼠的血清進行充分混合。A549細胞經(jīng)24 h預培養(yǎng)進入對數(shù)生長期后,將對照組、高、中、低劑量組含藥血清分別加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h。用CCK-8法檢測細胞抑制率,流式細胞技術檢測細胞周期,熒光定量PCR技術檢測PCNA、VEGF mRNA表達水平,Western blotting技術檢測PCNA、VEGF蛋白表達水平。結果:1、細胞增殖抑制作用實驗:高、中、低劑量組與對照組相比均有抑制作用,差異具有統(tǒng)計學意義(P(27)0.01),高、中、低劑量組抑制率分別為46.09%、57.45%、70.27%。2、細胞周期阻滯實驗:與對照組相比,用不同劑量含藥血清處理A549細胞后G0/G1期細胞比例均有所升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P(27)0.05),高、中、低劑量組作用A549細胞后細胞分裂周期停滯在G0/G1期。3、PCNA mRNA和蛋白質(zhì)表達水平檢測:與對照組相比,低、中劑量組PCNA mRNA表達量都有降低,差異有統(tǒng)計學意義(P(27)0.05),高劑量處理組作用后PCNA mRNA表達量略有升高,但差異無顯著性(P(29)0.05)。與對照組相比,各劑量含藥血清處理組PCNA蛋白的表達均降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P(27)0.01)。4、VEGF mRNA和蛋白質(zhì)表達水平檢測:與對照組相比,中、低劑量益氣養(yǎng)陰方含藥血清各劑量處理組對A549細胞內(nèi)VEGF mRNA表達沒有明顯的影響(P(29)0.05),而高劑量處理組的細胞內(nèi)VEGF蛋白相對表達升高,差異有統(tǒng)計學意義(P(27)0.01)。結論:適當濃度的益氣養(yǎng)陰方可能通過降低PCNA的表達抑制細胞增殖,誘導A549細胞進入細胞休眠狀態(tài)。益氣養(yǎng)陰方誘導A549細胞休眠的作用可能與下調(diào)血管生成途徑的VEGF因子無關。
【學位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

益氣養(yǎng)陰方含藥血清對肺癌 A549 細胞的休眠作用研究第三章 結果3.1A549 細胞的最佳生長時間應用 CCK-8 法檢測 NSCLC A549 細胞 48 h 內(nèi)的增殖狀態(tài)。根據(jù) C顯示：A549 細胞從 6 h 到 48 h 均處于持續(xù)生長階段，24 h 到 48 h 為生長（圖 1），故后續(xù)實驗加藥時間均選在 24 h。

C圖 2 流式細胞技術檢測益氣養(yǎng)陰方含藥血清對 A549 細胞分裂周期的影響。Figure 2 Flow cytometry analysis on the effect of the serum containing Yiqi Yangyindecoction onA549 cells division cycle.注：A、B、C、D 分別為對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組各組 G0/G1 期細胞占比。Note:A, B, C, and D are the control group, low-dose group, middle-dose group, high-dose group,respectively, G0/G1 phase cell proportion.表 9 不同益氣養(yǎng)陰方含藥血清處理組 G0/G1 期 A549 細胞的百分數(shù)（ x ± s，n=3）Table 9 Percentage ofA549 cells in G0/G1 phase treated with different doses of Yiqi Yangyin decoctiocontaining serum ( x ± s, n=3)組別 G0/G1 期細胞占比（％）對照組 58.885 ± 0.225低劑量組 61.515 ± 0.185*#中劑量組 61.345 ± 0.185*#D

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