【摘要】：連錢(qián)草為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr.的干燥地上部分,有利濕通淋,散瘀消腫和清熱解毒等功效,臨床上主要用于利小便、治療膀胱結(jié)石、腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石、腎炎水腫、濕熱黃疸、膽囊炎、膽石癥、腮腺炎、燒傷等。研究表明清熱解毒中藥往往都具有抗補(bǔ)體活性,為了闡述連錢(qián)草清熱解毒的藥效物質(zhì),我們對(duì)連錢(qián)草的抗補(bǔ)體活性的進(jìn)行了篩選,結(jié)果發(fā)現(xiàn)連錢(qián)草75%醇提物抗補(bǔ)體活性較弱,而其粗多糖具有較好的抗補(bǔ)體活性。為了明確連錢(qián)草抗補(bǔ)體的活性成分,就連錢(qián)草粗多糖進(jìn)行了進(jìn)一步的純化,從中共分離出了2個(gè)有抗補(bǔ)體活性的均一多糖,分別為GLP-1和GLP-2。通過(guò)多種理化方法表征了兩個(gè)均一多糖結(jié)構(gòu)特性。GLP-1,棕褐色疏松狀,其主要為2種單糖組成的雜多糖,單糖組成為阿拉伯糖和半乳糖,其中阿拉伯糖和半乳糖的摩爾比為1:6.3。GLP-1的分子量為5.37 KDa,蛋白質(zhì)含量為0.94%,糖含量為94.8%。甲基化的結(jié)果結(jié)合核磁共振波譜數(shù)據(jù),表明GLP-1是主鏈為1,6連接的半乳糖以及少量的1,3,6-連接的半乳糖,支鏈連接為1-連接阿拉伯糖終端和1-連接半乳糖終端,原子力顯微鏡結(jié)果表明其空間結(jié)構(gòu)較為疏松,卷曲程度較高。GLP-2與GLP-1的結(jié)構(gòu)較為相似,淺黃色疏松狀,GLP-2主要由阿拉伯糖和半乳糖兩種單糖組成,其中阿拉伯糖和半乳糖的摩爾比為1:4.9。GLP-2的分子量為20.04 KDa,蛋白質(zhì)含量為0.95%;糖含量為93.5%。甲基化的結(jié)果及核磁數(shù)據(jù)顯示:主鏈主要為1,6-連接的半乳糖以及少量的1,4,6-連接的半乳糖,支鏈連接為1-連接的阿拉伯糖終端和1,4-連接的半乳糖。原子力顯微鏡結(jié)果表明GLP-2的空間結(jié)構(gòu)卷曲度較低,具有較為密集的網(wǎng)狀連接特性�？寡a(bǔ)體活性研究結(jié)果表明,GLP-1和GLP-2都具有較強(qiáng)的抗補(bǔ)體活性,CH_(50)分別為0.028±0.011mg/mL,0.056±0.015 mg/mL,與陽(yáng)性對(duì)照肝素鈉(CH_(50)為0.041 mg/mL)相當(dāng),GLP-1較GLP-2的抗補(bǔ)體活性好,可能與其空間構(gòu)象有關(guān)。補(bǔ)體系統(tǒng)與炎癥的誘發(fā)有緊密聯(lián)系,我們就兩個(gè)均一多糖的抗炎活性進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中有相當(dāng)重要的作用,炎癥反應(yīng)會(huì)誘發(fā)炎癥因子的產(chǎn)生。因此我們就脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)產(chǎn)生炎癥因子,將NO釋放抑制率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)測(cè)定炎癥因子IL-6、IL-1β和TNF-α的釋放量探討其抗炎活性的作用機(jī)制,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)均一多糖對(duì)炎癥細(xì)胞NO的釋放量有明顯抑制的作用,說(shuō)明連錢(qián)草均一多糖GLP-1和GLP-2有明顯的抗炎活性,且GLP-1的效果要比GLP-2的效果好。均一多糖GLP-1和GLP-2對(duì)炎癥因子IL-6和TNF-α的釋放有明顯的抑制,但均一多糖對(duì)炎癥因子IL-1β雖有抑制作用,但作用較弱,推測(cè)均一多糖GLP-1和GLP-2的抗炎活性作用機(jī)制可能主要是通過(guò)抑制炎癥因子IL-6和TNF-α來(lái)發(fā)揮其抗炎活性。前期研究發(fā)現(xiàn)連錢(qián)草具有利尿通淋功效的主要活性成分是迷迭香酸,但目前迷迭香酸在大鼠體內(nèi)的代謝研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相-四極飛行時(shí)間質(zhì)譜(Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Quadrupole-time-of-flight Mass Spectrometry,UHPLC-QTOF-MS/MS)技術(shù)結(jié)合診斷離子策略快速鑒定連錢(qián)草的主含量和活性成分迷迭香酸在大鼠尿液、血漿、糞便、膽汁和五臟中(心,肝,脾,肺和腎)的代謝產(chǎn)物。利用空白基質(zhì)扣減技術(shù)、基于預(yù)測(cè)代謝物質(zhì)量虧損的篩選技術(shù)及診斷離子和中性丟失策略快速鎖定并鑒定迷迭香酸的代謝產(chǎn)物,總共在血漿、尿液、膽汁和糞便中鑒定了16個(gè)代謝產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)迷迭香酸在大鼠體內(nèi)主要發(fā)生甲基化、磺酸化和葡萄糖醛酸化等代謝反應(yīng),代謝產(chǎn)物主要經(jīng)尿液和膽汁排出體外,主要分布在腎臟。通過(guò)迷迭香酸體內(nèi)代謝研究進(jìn)一步表明該化合物作用靶點(diǎn)在腎臟,為其利尿通淋功效提供了一定的科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

連錢(qián)草活性多糖結(jié)構(gòu)及迷迭香酸的代謝研究草素-7-O-葡萄糖醛酸乙酯苷 luteolin-7-O-β-D-glucoside ethyl 刺槐素 AcacetinC-葡萄糖-8-C-葡萄糖芹菜素 6-C-glucose-8-C-glucose-apige菜素-7-O-葡萄糖醛酸乙酯苷 apigenin-7-O-β-D-glucuronide ethy-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖-芹菜素 6-C-arabinose-8-C-glucose-apige海常素 Clerodendrin芹菜素 Apigenin蘆丁 Rutinum芫花素 Genkwanin

5 -蒎烯 -pinene6 胡薄荷酮 Pulelgone7 β-蒎烯 β-pinene8 對(duì)-聚傘花素 p-cymene9 -松油醇 -terpineol10 早熟素 Prococene11 薄荷醇 Mentholk12 異松樟酮 Isopinocamphone13 芳樟醇 Linalool14 1-8-桉葉素 1,8-cineole15 喇叭烯 Viridiflorene16 異薄荷酮 Isomenthone

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本文編號(hào)：2724545