【摘要】：連錢草為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr.的干燥地上部分,有利濕通淋,散瘀消腫和清熱解毒等功效,臨床上主要用于利小便、治療膀胱結(jié)石、腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石、腎炎水腫、濕熱黃疸、膽囊炎、膽石癥、腮腺炎、燒傷等。研究表明清熱解毒中藥往往都具有抗補體活性,為了闡述連錢草清熱解毒的藥效物質(zhì),我們對連錢草的抗補體活性的進行了篩選,結(jié)果發(fā)現(xiàn)連錢草75%醇提物抗補體活性較弱,而其粗多糖具有較好的抗補體活性。為了明確連錢草抗補體的活性成分,就連錢草粗多糖進行了進一步的純化,從中共分離出了2個有抗補體活性的均一多糖,分別為GLP-1和GLP-2。通過多種理化方法表征了兩個均一多糖結(jié)構(gòu)特性。GLP-1,棕褐色疏松狀,其主要為2種單糖組成的雜多糖,單糖組成為阿拉伯糖和半乳糖,其中阿拉伯糖和半乳糖的摩爾比為1:6.3。GLP-1的分子量為5.37 KDa,蛋白質(zhì)含量為0.94%,糖含量為94.8%。甲基化的結(jié)果結(jié)合核磁共振波譜數(shù)據(jù),表明GLP-1是主鏈為1,6連接的半乳糖以及少量的1,3,6-連接的半乳糖,支鏈連接為1-連接阿拉伯糖終端和1-連接半乳糖終端,原子力顯微鏡結(jié)果表明其空間結(jié)構(gòu)較為疏松,卷曲程度較高。GLP-2與GLP-1的結(jié)構(gòu)較為相似,淺黃色疏松狀,GLP-2主要由阿拉伯糖和半乳糖兩種單糖組成,其中阿拉伯糖和半乳糖的摩爾比為1:4.9。GLP-2的分子量為20.04 KDa,蛋白質(zhì)含量為0.95%;糖含量為93.5%。甲基化的結(jié)果及核磁數(shù)據(jù)顯示:主鏈主要為1,6-連接的半乳糖以及少量的1,4,6-連接的半乳糖,支鏈連接為1-連接的阿拉伯糖終端和1,4-連接的半乳糖。原子力顯微鏡結(jié)果表明GLP-2的空間結(jié)構(gòu)卷曲度較低,具有較為密集的網(wǎng)狀連接特性�？寡a體活性研究結(jié)果表明,GLP-1和GLP-2都具有較強的抗補體活性,CH_(50)分別為0.028±0.011mg/mL,0.056±0.015 mg/mL,與陽性對照肝素鈉(CH_(50)為0.041 mg/mL)相當,GLP-1較GLP-2的抗補體活性好,可能與其空間構(gòu)象有關(guān)。補體系統(tǒng)與炎癥的誘發(fā)有緊密聯(lián)系,我們就兩個均一多糖的抗炎活性進行了進一步的研究。巨噬細胞在炎癥反應(yīng)中有相當重要的作用,炎癥反應(yīng)會誘發(fā)炎癥因子的產(chǎn)生。因此我們就脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬細胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)產(chǎn)生炎癥因子,將NO釋放抑制率作為評價指標,通過測定炎癥因子IL-6、IL-1β和TNF-α的釋放量探討其抗炎活性的作用機制,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)均一多糖對炎癥細胞NO的釋放量有明顯抑制的作用,說明連錢草均一多糖GLP-1和GLP-2有明顯的抗炎活性,且GLP-1的效果要比GLP-2的效果好。均一多糖GLP-1和GLP-2對炎癥因子IL-6和TNF-α的釋放有明顯的抑制,但均一多糖對炎癥因子IL-1β雖有抑制作用,但作用較弱,推測均一多糖GLP-1和GLP-2的抗炎活性作用機制可能主要是通過抑制炎癥因子IL-6和TNF-α來發(fā)揮其抗炎活性。前期研究發(fā)現(xiàn)連錢草具有利尿通淋功效的主要活性成分是迷迭香酸,但目前迷迭香酸在大鼠體內(nèi)的代謝研究報道較少。本實驗采用超高效液相-四極飛行時間質(zhì)譜(Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Quadrupole-time-of-flight Mass Spectrometry,UHPLC-QTOF-MS/MS)技術(shù)結(jié)合診斷離子策略快速鑒定連錢草的主含量和活性成分迷迭香酸在大鼠尿液、血漿、糞便、膽汁和五臟中(心,肝,脾,肺和腎)的代謝產(chǎn)物。利用空白基質(zhì)扣減技術(shù)、基于預(yù)測代謝物質(zhì)量虧損的篩選技術(shù)及診斷離子和中性丟失策略快速鎖定并鑒定迷迭香酸的代謝產(chǎn)物,總共在血漿、尿液、膽汁和糞便中鑒定了16個代謝產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)迷迭香酸在大鼠體內(nèi)主要發(fā)生甲基化、磺酸化和葡萄糖醛酸化等代謝反應(yīng),代謝產(chǎn)物主要經(jīng)尿液和膽汁排出體外,主要分布在腎臟。通過迷迭香酸體內(nèi)代謝研究進一步表明該化合物作用靶點在腎臟,為其利尿通淋功效提供了一定的科學依據(jù)。
【學位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

連錢草活性多糖結(jié)構(gòu)及迷迭香酸的代謝研究草素-7-O-葡萄糖醛酸乙酯苷 luteolin-7-O-β-D-glucoside ethyl 刺槐素 AcacetinC-葡萄糖-8-C-葡萄糖芹菜素 6-C-glucose-8-C-glucose-apige菜素-7-O-葡萄糖醛酸乙酯苷 apigenin-7-O-β-D-glucuronide ethy-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖-芹菜素 6-C-arabinose-8-C-glucose-apige海常素 Clerodendrin芹菜素 Apigenin蘆丁 Rutinum芫花素 Genkwanin

5 -蒎烯 -pinene6 胡薄荷酮 Pulelgone7 β-蒎烯 β-pinene8 對-聚傘花素 p-cymene9 -松油醇 -terpineol10 早熟素 Prococene11 薄荷醇 Mentholk12 異松樟酮 Isopinocamphone13 芳樟醇 Linalool14 1-8-桉葉素 1,8-cineole15 喇叭烯 Viridiflorene16 異薄荷酮 Isomenthone

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本文編號：2724545