【摘要】：目的:本文以黃連為研究對(duì)象,采用HPLC和UV測(cè)定野生與種植黃連不同部位有效成分鹽酸小檗堿及總生物堿的含量,鹽酸小檗堿親和介質(zhì)的制備及蛋白質(zhì)SDS-PAGE垂直電泳技術(shù),通過(guò)比較分析野生與種植黃連植株不同部位生物堿的含量,分析野生與種植黃連不同部位的差異蛋白,以期建立黃連植物體中鹽酸小檗堿的生源代謝途徑,為確保優(yōu)質(zhì)藥材種植資源及質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。方法:紫外分光光度法200-600 nm全波長(zhǎng)掃描后采用測(cè)定波長(zhǎng)345 nm。HPLC采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,乙腈和0.4%磷酸水溶液等度洗脫,流速1.0 mL/min,進(jìn)樣量10μL,檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm,柱溫30℃。通過(guò)制備鹽酸小檗堿親和介質(zhì)釣取其相關(guān)代謝酶,采用SDS-PAGE凝膠電泳和考馬斯亮藍(lán)法,以蛋白條帶豐度、蛋白分子的相對(duì)分子量、A_(595 nm)和每克藥材中蛋白質(zhì)含量為指標(biāo),比較水提法、Tris-HCl法、硫酸銨沉降法所得黃連蛋白的差異,并對(duì)野生與種植黃連不同部位蛋白質(zhì)的差異進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)。結(jié)果:種植黃連植株的總生物堿含量中根莖、須根和莖葉含(9.875±0.029)%、(6.406±0.033)%、(1.924±0.037)%,種植黃連植株的鹽酸小檗堿含量中根莖、須根和莖葉含(0.4505±0.0373)%、(0.1673±0.0331)%、(0.0879±0.0293)%。野生黃連植株的總生物堿含量中根莖含(7.953±0.028)%、莖葉含(0.644±0.031)%,野生黃連植株的鹽酸小檗堿含量中根莖含(0.3802±0.0323)%、莖葉含(0.1597±0.0315)%。優(yōu)選得出最佳黃連蛋白質(zhì)提取方法為Tris-HCl法,該法所提取的黃連蛋白豐度最高,且每克藥材中蛋白質(zhì)含量最高;野生與種植黃連不同部位蛋白質(zhì)的差異明顯,蛋白質(zhì)豐度及每克藥材中蛋白質(zhì)含量順序均為:種植黃連根莖野生黃連根莖種植黃連莖葉野生黃連莖葉種植黃連須根,并且聚類分析可知野生與種植黃連根莖蛋白關(guān)聯(lián)關(guān)系較為顯著,與其他部位蛋白關(guān)聯(lián)不顯著。結(jié)論:野生與種植黃連植株不同部位的生物堿含量存在明顯差異,在種植黃連植株根莖的鹽酸小檗堿和總生物堿含量均明顯高于其須根和莖葉部位的;在野生黃連植株根莖的含量也遠(yuǎn)高于其莖葉部位的;種植黃連根莖高于野生黃連根莖。就總生物堿的含量而言,種植黃連根莖的含量最高,質(zhì)量最佳。本研究?jī)?yōu)選的Tris-HCl法可以充分提取黃連中的蛋白質(zhì);野生與種植的黃連根莖的蛋白明顯高于其他部位,且種植6年生的黃連根莖蛋白含量高于野生未知年限黃連根莖。黃連不同部位蛋白質(zhì)的差異性既為其初級(jí)次級(jí)代謝成分及代謝途徑研究奠定基礎(chǔ),也為黃連藥材種質(zhì)資源研究及質(zhì)量控制評(píng)價(jià)提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284.1
【圖文】：

圖 2-1 三種方法的 SDS-PAGE 蛋白電泳圖Figure 2-1 Electrophoresis of SDS-PAGE protein in three methods清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制所得牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖 2-2，牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線方82·C+0.01648，r=0.9991。

25-2 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（a：1 號(hào)管 700-500nm 波長(zhǎng)掃描；b：牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)re 2-2 bovine serum albumin standard curve drawing (a: 1 tube 700-500 nm wavelength scabovine serum albumin standard curve)提取方法的蛋白質(zhì)含量提法、Tris-HCl 法、硫酸銨沉降法的考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定的蛋白質(zhì)含量見(jiàn)表

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳稚;吳都督;鄭博丹;黃偉強(qiáng);楊晶晶;盧佩然;唐鳴藝;李佩琪;胡紫薇;韓瑤瑤;;黃連素抗結(jié)核影響因素研究[J];廣東化工;2015年21期

2 陶夢(mèng)琳;顧文濤;汪子青;侯珂惠;崔書盛;唐道超;秦娜;張大永;萬(wàn)軍;;基于支持向量機(jī)的黃連飲片產(chǎn)地識(shí)別研究[J];中草藥;2015年21期

3 魏世超;徐麗君;鄒欣;李井彬;姜淑君;許嘯虎;黃銳;陸付耳;;黃連粉末中小檗堿、藥根堿及單體化合物在2型糖尿病大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)特征分析[J];中國(guó)中藥雜志;2015年21期

4 馬學(xué)強(qiáng);劉翰林;陳國(guó)平;袁世超;梁斌;;黃連素結(jié)合光動(dòng)力學(xué)對(duì)胃癌細(xì)胞MGC-803凋亡的影響[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2015年09期

5 岑超;江紅;;查玉明升清泄?jié)?逐痰行瘀“降脂方”治療高脂血癥[J];實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2015年06期

6 涂春聯(lián);李紅勝;;黃連解毒湯治療肥胖型2型糖尿病臨床研究[J];中醫(yī)學(xué)報(bào);2015年05期

7 趙卓;孫文斌;嵇雅茹;郝錫聯(lián);;溫度對(duì)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的影響（英文）[J];Agricultural Science & Technology;2015年02期

8 辛靈艷;范理宏;;黃連素對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2014年05期

9 汪瑩;申俊龍;趙坤元;;基于蛛網(wǎng)模型的中藥材價(jià)格波動(dòng)原因分析及對(duì)策研究[J];現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐;2014年02期

10 鄧曉威;謝寧;;黃連素治療2型糖尿病研究進(jìn)展[J];中國(guó)中藥雜志;2014年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 張慧芹;小檗堿干預(yù)非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的分子機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 王玉;小檗堿對(duì)前列腺癌的抑制作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2722288