【摘要】：目的:研究斑地錦正丁醇萃取物對小鼠肝損傷的保護作用及其化學成分,為斑地錦的臨床應用提供理論和實驗基礎。方法:1、斑地錦正丁醇萃取物對小鼠肝損傷的保護作用研究60只雄性昆明小鼠,隨機分為正常組,模型組,斑地錦正丁醇萃取物低、中、高劑量組和聯(lián)苯雙酯組,共6組,每組10只。空白組和模型組給予等容積的蒸餾水,其他組灌胃給予相應劑量的藥物15d,每天上午灌胃1次,在末次灌胃藥物后1h,除正常組外,其余組以60%乙醇12m L/kg誘導小鼠急性肝損傷,禁食不禁水,24h后,摘眼球取血,分離血清,并快速取出肝臟。測定血清中AST、ALT、TC和TG水平,肝勻漿中MDA、SOD和GSH水平。部分肝臟切片后,HE染色觀察病理組織形態(tài),部分以RT-qPCR分析肝組織中TLR4、NF-κB、TNF-α基因的m RNA表達。2、斑地錦正丁醇萃取物的化學成分研究利用MTT法考察斑地錦正丁醇萃取物的大孔樹脂洗脫部位對撲熱息痛誘導的Hep G2細胞損傷的保護作用。通過計算細胞存活率,確定對撲熱息痛誘導的Hep G2細胞損傷具有保護作用的活性部位。然后對其活性部位以反相硅膠柱、MPLC制備及反復的Sephadex LH-20柱進行分離純化。3、斑地錦正丁醇萃取物中單體鞣花酸對小鼠肝損傷的保護作用研究50只雄性昆明小鼠,隨機分為5組,分別為正常組,模型組,鞣花酸低、高劑量組和聯(lián)苯雙酯組,每組10只。空白組和模型組給予等容積的蒸餾水,其他組灌胃給予相應劑量的藥物15d,每天上午灌胃1次,在末次灌胃藥物后1h,除正常組外,其余各組以60%乙醇12ml/kg誘導小鼠急性肝損傷,禁食不禁水,24h后,摘眼球取血,分離血清,并快速取出肝臟。測定血清中AST、ALT、TC和TG水平,肝勻漿中MDA、SOD和GSH水平。部分肝臟切片后,HE染色觀察病理組織形態(tài),部分以RT-qPCR分析肝組織中TLR4、NF-κB、TNF-α基因的m RNA表達。結果:1、與正常組相比,酒精性肝損傷模型組血清中AST、ALT、TG、TC水平明顯升高,肝勻漿中MDA含量明顯增加,SOD和GSH水平則降低,TLR4、NF-κB、TNF-α基因的m RNA表達量明顯增加;病理組織學觀察到肝細胞排列紊亂,發(fā)生嚴重的變性,壞死,細胞質疏松,細胞核深染等情況。與模型組相比,斑地錦正丁醇萃取物低、中、高劑量組均可以明顯降低ALT、TG水平(P0.05,P0.01,P0.01),升高SOD水平(P0.05,P0.01);斑地錦正丁醇萃取物中、高劑量組可以顯著降低AST、TC、MDA水平(P0.01,P0.01),升高GSH水平(P0.01,P0.01);斑地錦正丁醇萃取物低、中、高劑量組均可以顯著降低肝組織中NF-κB、TNF-α基因的m RNA表達(P0.01,P0.01,P0.01);中、高劑量組還能顯著降低TLR4基因的m RNA表達(P0.01,P0.01)。病理組織學顯示斑地錦正丁醇萃取物各劑量組均不同程度的減輕了肝組織的病理損傷程度。2、斑地錦正丁醇-50%乙醇部位、70%乙醇部位和95%乙醇部位在1~10μg/m L范圍內對撲熱息痛引起的Hep G2細胞的損傷均具有保護作用;對以上三個保肝活性部位進行分離,從斑地錦正丁醇萃取物的50%乙醇部位得到了3個單體化合物,從70%乙醇部位和95%乙醇部位均得到了1個單體化合物。經LC-MS和NMR分析,確定其為槲皮素、山奈酚和鞣花酸。3、與模型組相比,鞣花酸可以明顯降低AST、ALT、TC、TG、MDA水平,顯著升高SOD、GSH水平(P0.01);能明顯降低TLR4、NF-κB、TNF-α基因的m RNA表達。病理組織學結果顯示,鞣花酸各劑量組均不同程度的減輕了肝組織的病理損傷程度。結論:1、斑地錦正丁醇萃取物對乙醇誘導的急性酒精性肝損傷具有保護作用,其作用機制與改善脂質代謝、抗氧化及通過抑制TLR4—NF-κB信號通路的活化來減少細胞炎癥因子(如TNF-α)的產生等有關。2、斑地錦正丁醇-50%乙醇部位、70%乙醇部位和95%乙醇部位對撲熱息痛誘導的Hep G2細胞的損傷具有保護作用;從斑地錦正丁醇50%乙醇部位得到了槲皮素、山奈酚、鞣花酸,從70%乙醇部位和95%乙醇部位均得到了鞣花酸。3、鞣花酸可通過調節(jié)脂質代謝、抗氧化及抗炎作用來發(fā)揮對酒精性肝損傷的保護作用。
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285.5
【圖文】：

圖 5 斑地錦正丁醇萃取物對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟組織的影響（HE，200A：正常組；B：模型組；C：斑地錦正丁醇萃取物 250mg/kg 組；D：斑地錦正丁醇萃取物 50組；E：斑地錦正丁醇萃取物 1000mg/kg 組；F：聯(lián)苯雙酯 150mg/kg 組Figure5Effect of EEM on liver tissue of acute alcoholic liver injury mice（HE, 200

PCR擴增產物凝膠電泳圖

【參考文獻】

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本文編號：2722171