【摘要】：目的基于益氣活血法探討竹節(jié)參干預(yù)脊髓缺血再灌注損傷(SCII)大鼠模型的防治效果。通過(guò)比較竹節(jié)參干預(yù)SCII后脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元組織形態(tài)的變化,并檢測(cè)相應(yīng)的凋亡蛋白,從而探討益氣活血法對(duì)SCII后的脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的是否有保護(hù)作用。方法100只清潔級(jí)SD大鼠,雄雌不限,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、竹節(jié)參低、中、高劑量組;適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后,對(duì)假手術(shù)組與模型組按每天2ml生理鹽水灌胃,竹節(jié)參低、中、高劑量組分別采用濃度為1.33g/kg·d~(-1)、2.67g/kg·d~(-1)、5.33g/kg·d~(-1)灌胃干預(yù);灌胃時(shí)間一共7d,然后造模,且于造模后6、24h采用改良Tarlov行為學(xué)評(píng)分評(píng)價(jià)竹節(jié)參對(duì)SCII的干預(yù)療效;尼氏染色、HE染色法分別觀察SCII后脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)目、細(xì)胞形態(tài)的變化;ELISA檢測(cè)血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的含量變化;免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)相應(yīng)脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞中C-fos、C-jun、Bax蛋白的表達(dá)情況、免疫印跡法檢測(cè)相應(yīng)脊髓組織中C-fos、C-jun、Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1.改良Tarlov行為評(píng)分結(jié)果:在SCII6、24h后,假手術(shù)組評(píng)分均趨近于正常值(p0.05);在同一時(shí)間內(nèi),與模型組相比,中劑量組評(píng)分均高于模型組(p0.05);與中劑量組比較,低、高劑量組評(píng)分均低于中劑量組(p0.05)。2.HE染色結(jié)果:在SCII6、24h后,假手術(shù)組脊髓神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)完整,核仁、核膜清晰;模型組脊髓神經(jīng)元細(xì)胞腫脹明顯,呈空泡狀,胞體固縮嚴(yán)重;竹節(jié)參低、中劑量組脊髓神經(jīng)元細(xì)胞腫脹減小,核仁、核膜較清晰,但中劑量組優(yōu)于低劑量組;3.NisslStaining結(jié)果:在SCII6、24h后,假手術(shù)組尼氏小體顆粒數(shù)目相對(duì)較多,模型組神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)不完整,且細(xì)胞間隙較大,數(shù)目突出性減少。竹節(jié)參低、中劑量組神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)有明顯改善,尼氏小體顆粒數(shù)目明顯增多,但中劑量組優(yōu)于低劑量組。4.ELISA結(jié)果:在SCII6、24h后,假手術(shù)組趨于正常值;在同一時(shí)間內(nèi),與模型組相比較,竹節(jié)參劑量組均低于模型組(p0.05);與中劑量組相比,低、高劑量組均高于中劑量組(p0.05)。5.Immunohistochemistry結(jié)果:在SCII6、24h后,假手術(shù)組脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞中C-fos、C-jun、Bax的表達(dá)基本相同(p0.05);在同一時(shí)間內(nèi),與模型組相比,竹節(jié)參低、中劑量組C-fos、C-jun、Bax的表達(dá)均下調(diào)(p0.05),而高劑量組C-fos、C-jun、Bax的表達(dá)無(wú)顯著下調(diào)(p0.05);與低劑量組相比,中劑量組C-fos、C-jun、Bax的表達(dá)均顯著下調(diào)(p0.05);6.WesternBlotting結(jié)果:在SCII6、24h后,假手術(shù)組脊髓神經(jīng)元中C-fos、C-jun、Bax、Bcl-2的表達(dá)基本相同(p0.05);在同一時(shí)間內(nèi),與模型組相比,竹節(jié)參中劑量組C-fos、C-jun、Bax的表達(dá)均明顯下調(diào),Bcl-2的表達(dá)均上調(diào)(P0.05);結(jié)論1.益氣活血法干預(yù)SCII可減輕脊髓神經(jīng)元細(xì)胞的受損程度。2.竹節(jié)參可能通過(guò)抑制SCII后脊髓組織中C-fos、C-jun、Bax蛋白的表達(dá)水平,同時(shí)促進(jìn)Bcl-2蛋白的表達(dá)水平,從而減少脊髓神經(jīng)細(xì)胞的過(guò)度凋亡。3.基于益氣活血法探討竹節(jié)參干預(yù)SCII后脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用有可能是通過(guò)抑制細(xì)胞過(guò)度凋亡作用而達(dá)到的。
【學(xué)位授予單位】：湖北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

大鼠脊髓缺血再灌注損傷造模實(shí)驗(yàn)及損傷后T2-5階段定位

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)尼氏染色法觀察 SCII 后脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的變化。結(jié)果顯示，假手術(shù)脊髓神經(jīng)元細(xì)胞中尼氏小體顆粒數(shù)目相對(duì)較多，且均稱地散布于細(xì)胞質(zhì)中，其著色為深紫色，神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)良好（見(jiàn)圖 2-2A、2-3A）；在 SCII 6 、24 h 后，與假手術(shù)組對(duì)比，模型組脊髓神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)表現(xiàn)為均不完整，且細(xì)胞間隙較大，神經(jīng)元胞體皺縮較重，色澤較淺，神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)目突出性減少（見(jiàn)圖 2-2B、2-3B）；與模型組對(duì)比，竹節(jié)參低、中劑量組神經(jīng)元細(xì)胞破裂相對(duì)較少，著色較深，神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)有明顯改善，神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目明顯增多，二者相比中劑量組神經(jīng)元細(xì)胞的病理學(xué)改善較明顯（見(jiàn)圖 2-2C/D、2-3C/D）；與模型組相比，高劑量組神經(jīng)元細(xì)胞的病理學(xué)無(wú)明顯改善（見(jiàn)圖 2-2E、2-3E）。（見(jiàn)圖 2-2、2-3）

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本文編號(hào)：2721430