【摘要】：目的:近年來(lái),男性不育癥患者發(fā)病率逐年遞增,但是其發(fā)病原因及分子機(jī)制仍然不明,目前尚缺少特異性的有效改善精子活力的藥物。中藥鎖陽(yáng)屬于鎖陽(yáng)科,取鎖陽(yáng)的肉質(zhì)莖水提取物為藥,藥性溫和,其藥理作用有補(bǔ)腎、壯陽(yáng)、潤(rùn)腸、通便的作用,主要治療腎臟陽(yáng)氣不足、精血虧損、陽(yáng)痿少精等。本研究的目的是探討鎖陽(yáng)水提取物對(duì)精子發(fā)生及精子活力、血清睪酮水平的影響及促進(jìn)未分化精原細(xì)胞增殖、相關(guān)基因的表達(dá),為傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)新藥的研制提供可能的理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1、將80只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組(n=20),分別是正常組(Control)、模型組(Model)、鎖陽(yáng)水提取物組(CS)、左卡尼汀口服溶液組(L-carnitine)。采用環(huán)磷酰胺構(gòu)建大鼠少、弱精子癥模型,分別給予模型大鼠鎖陽(yáng)水提物、左卡尼汀口服溶液連續(xù)灌胃4周。2、觀察以下指標(biāo):(1)鎖陽(yáng)水提物對(duì)大鼠睪丸組織重量的影響;(2)蘇木素伊紅(HE)染色觀察大鼠睪丸組織中生精細(xì)胞的分布情況;(3)計(jì)算機(jī)輔助精液分析法(CASA)檢測(cè)大鼠附睪尾部精子數(shù)目及活力;(4)采用染色質(zhì)擴(kuò)散法(SCD)檢查附睪尾部精子DNA碎片化指數(shù)(DFI);(5)采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法測(cè)定大鼠血清中卵泡刺激素(FSH)及睪酮(T)水平;(6)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)方法檢查附睪尾部精子中脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物(LPO)及活性氧(ROS)的水平;(7)采用流式細(xì)胞儀(FACS)檢測(cè)CS灌胃治療后精原干細(xì)胞(SSC)S期細(xì)胞比例;(8)采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)缺口末端標(biāo)記法(Tunel)染色的方法檢測(cè)大鼠精原干細(xì)胞的凋亡情況;(9)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time PCR)的方法檢測(cè)大鼠睪丸組織中精原細(xì)胞表面標(biāo)志物Thy1、GFRα1、PLZF以及C-kit基因mRNA表達(dá)。結(jié)果:(1)Control組,Model組,CS組以及L-carnitine組睪丸組織重量分別為:1.7±0.058g,1.335±0.02g,1.55±0.015g,1.587±0.056g,CS 組大鼠睪丸組織重量較 Model組有所增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而CS組與L-carnitine組間未見(jiàn)明顯差異;(2)HE染色結(jié)果示CS組睪丸組織中部分生精小管層數(shù)較Model組增加,管腔中精子數(shù)增加,排列規(guī)則,呈簇樣;(3)CASA結(jié)果示CS組附睪尾部精子數(shù)目較Model組增加(P0.05);(4)CASA結(jié)果顯示四組精子活力分別為:66.57±4.76g%、41.40±5.73%、57.52±7.54%、59.52±12.06%,CS組附睪尾部精子活力較Model組增加,低于Control組;(5)CS組附睪尾部精子DFI較Model組減少(P0.05);ROS水平及LPO水平較 Model 組下降(P0.05);(6)CS組大鼠血清中FSH及T水平較Model組增加(P0.05);(7)GFRο1(+)精原細(xì)胞群經(jīng)CS處理后,S期細(xì)胞比例較Model組增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(8)各濃度CS組之間大鼠精原干細(xì)胞凋亡率無(wú)顯著差異;(9)CS組大鼠睪丸組織中Thy1、GFRο、PLZF基因mRNA水平增加(P0.05),但C-kit基因表達(dá)無(wú)顯著差異;(10)CS組睪丸組織中GDNF基因mRNA表達(dá)水平高于Model組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.環(huán)磷酰胺構(gòu)建大鼠少弱精子癥模型的作用機(jī)制與氧化過(guò)度和能量代謝障礙密切相關(guān);2.鎖陽(yáng)水提取物可以顯著改善環(huán)磷酰胺的損傷,其主要作用機(jī)制為:1)增加大鼠附睪尾部精子的數(shù)目以及活率;2)有助于降低血清中ROS水平,改善LPO水平,降低精子DNA碎片化指數(shù)(DFI),從而改善精子活力;3)升高血清睪酮濃度促進(jìn)性成熟及促進(jìn)精子發(fā)生過(guò)程;4)促進(jìn)垂體FSH的分泌,繼而促進(jìn)精原干細(xì)胞增殖和睪丸組織中Thy1、GFRα、PLZF基因表達(dá)水平增加。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【圖文】：

鍘砂ｊ＜３題敢對(duì)少、弱慵子癥大鼠丨截酌＾＾恭＾＾卩血清睪圾促進(jìn)未分二、結(jié)果逡逑睪丸組織重量變化逡逑膦酰胺造模大鼠鎖陽(yáng)水提物0．５ｇ／ｋｇ／ｄ灌胃治療，持續(xù)４周后，４）、模型組（Ｍｏｄｅｌ）、鎖陽(yáng)水提物組（ＣＳ）、左卡尼汀組（Ｌ－ｃａｍｉｔｉｎｅ）為：１．７±０．０５８ｇ，邋１．３３５±０．０２ｇ，１．５５±０．０１５ｇ，邋１．５８７±０．０５６ｇ，重量較Ｍｏｄｅｌ組有所增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。Ｌ－ｃａ異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５），結(jié)果表明鎖陽(yáng)的確有助于精子發(fā)生過(guò)Ｗｅｉｇｈｔ邋ｏｆ邋ｔｅｓｔｉｓ逡逑２0＂＾＝０．００１５邐媝

睪尾部精子數(shù)目較Ｍｏｄｅｌ組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＜０．０５）；邋Ｌ－ｃａｍｉｔｉｎｅ組附睪逡逑尾部精子數(shù)目也較Ｍｏｄｅｌ組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；邋ＣＳ組與Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ逡逑組之間無(wú)顯著性差異，如［圖３］所示。逡逑附睪尾部精子數(shù)目逡逑２５０－１逡逑２００－邐，邋＊邐，逡逑１５０－W邐’邐＾逡逑１００－邋＿陶曊逡逑５０■W 邐＿邐＾逡逑０邐＿ｔ－；Ｖ；ｖＭ＿——ｒ邋邋Ｉ邋丨川邋１丨丨１丨１逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邐Ｍｏｄｅｌ邐ＣＳ邐Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ逡逑圖３：采用ＣＡＳＡ計(jì)數(shù)大鼠附睪尾部精子數(shù)目。ＣＳ組附睪尾部精子數(shù)目較Ｍｏｄｅｌ逡逑組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸＜0．0５邋（＊），ＣＳ組與Ｌ－ｃａｍｉｔｉｎｅ組之間無(wú)顯著性差異。逡逑２３逡逑

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本文編號(hào)：2721575