【摘要】：目的:本課題通過觀察當(dāng)歸多糖對人成骨細(xì)胞增殖及凋亡的影響,進(jìn)一步研究它對細(xì)胞周期和相關(guān)基因(CyclinDl、Bcl-2、Bax)表達(dá)的作用,從而探討出當(dāng)歸多糖治療骨質(zhì)疏松癥的作用及可能機(jī)制。方法:(1)將體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞系分為對照組及實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組加入不同終濃度的當(dāng)歸多糖(0.25mg/ml,0.5mg/ml,lmg/ml,10mg/ml)培養(yǎng),兩組分別培養(yǎng)72h,用MTS法檢測不同濃度的當(dāng)歸多糖對人成骨細(xì)胞細(xì)胞活性的影響;(2)將體外培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞系分為對照組和當(dāng)歸多糖組(終濃度為0.5mg/ml),共培養(yǎng)5天;用MTS法檢測當(dāng)歸多糖對人成骨細(xì)胞增殖的影響,用流式細(xì)胞儀檢測當(dāng)歸多糖對人成骨細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響,最后運(yùn)用q-PCR和Western blot技術(shù)檢測當(dāng)歸多糖對CyclinD、Bcl-2及Bax表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)在終濃度0.25mg/ml到1mg/ml之間的當(dāng)歸多糖對于人成骨細(xì)胞增殖起促進(jìn)作用,以0.5mg/ml濃度組效應(yīng)最為顯著;但是10mg/ml終濃度下的當(dāng)歸多糖具有細(xì)胞毒性,抑制其增殖。(2)當(dāng)歸多糖(終濃度為0.5mg/ml)能夠促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖,并且效應(yīng)呈時間依賴性,以第五天效應(yīng)最為明顯(p0.01)。(3)當(dāng)歸多糖(終濃度為0.5mg/ml)干預(yù)人成骨細(xì)胞5天后,運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞周期分布比例,結(jié)果表明:與對照組S期細(xì)胞比例(27.70±0.6658)%相比,當(dāng)歸多糖組S期細(xì)胞比例為(38.86±0.9557)%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(4)當(dāng)歸多糖(終濃度為0.5mg/ml)干預(yù)人成骨細(xì)胞5天后,運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞凋亡比例,結(jié)果表明:對照組的凋亡細(xì)胞比例為(10.49±1.011)%,而當(dāng)歸多糖組的凋亡細(xì)胞比例為(6.233±1.621)%,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(5)當(dāng)歸多糖(終濃度為0.5mg/ml)干預(yù)人成骨細(xì)胞5天后,采用q-PCR和Western blot檢測CyclinD1、Bcl-2及Bax的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):相對于對照組,當(dāng)歸多糖組CyclinD1的表達(dá)顯著上調(diào)(p0.05),然而Bcl-2和Bax的表達(dá)無明顯變化(P0.05)。結(jié)論:一定濃度范圍的當(dāng)歸多糖能夠促進(jìn)體外人成骨細(xì)胞增殖,可能與促進(jìn)CyclinD1表達(dá)來進(jìn)一步使得細(xì)胞向S期分布這一機(jī)制相關(guān),這也為其治療骨質(zhì)疏松癥提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285

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本文編號：2720371