【摘要】：王不留行黃酮苷(vaccarin)是王不留行中的主要有效成分。目前,已知的vaccarin的活性研究主要是王不留行黃酮苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用。Vaccarin可以通過抑制Notch信號(hào)通路,減少過氧化氫誘導(dǎo)的EA·hy926內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。Vaccarin可以促進(jìn)HMEC-1內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成。但是,vaccarin促HMEC-1內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成的靶受體和相關(guān)機(jī)制并不清楚。本研究將通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn),著重探討vaccarin促內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管形成的靶受體和相關(guān)機(jī)制。對(duì)vaccarin促內(nèi)皮細(xì)胞增殖的活性進(jìn)行了研究:利用SRB法發(fā)現(xiàn)vaccarin可以顯著促進(jìn)HMEC-1和EA·hy926這兩株內(nèi)皮細(xì)胞增殖,且這種促進(jìn)作用呈現(xiàn)非劑量依賴性,其中最佳濃度為2.15μM。但在2.15μM的濃度下,vaccarin對(duì)NIH3T3,A549和RAW264.7這三株非內(nèi)皮細(xì)胞無明顯促增殖作用;利用臺(tái)盼藍(lán)染色和Hoechst33342染色發(fā)現(xiàn)vaccarin不會(huì)顯著促進(jìn)HMEC-1內(nèi)皮細(xì)胞死亡和凋亡;利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)vaccarin能夠顯著促進(jìn)HMEC-1內(nèi)皮細(xì)胞從G0/G1期進(jìn)入S期,且這種促進(jìn)作用呈現(xiàn)非劑量依賴性,其中最佳濃度為2.15μM。進(jìn)一步地對(duì)vaccarin促內(nèi)皮細(xì)胞增殖的靶受體進(jìn)行了研究:利用western blotting實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)vaccarin對(duì)VEGFR-2的磷酸化無顯著影響,而對(duì)FGFR-1及其下游信號(hào)分子ERK1/2的磷酸化具有顯著促進(jìn)作用,且利用抑制劑SU5402阻斷FGFR-1后,vaccarin誘導(dǎo)的FGFR-1及其下游信號(hào)分子ERK1/2的磷酸化被顯著抑制;利用SRB法發(fā)現(xiàn)阻斷FGFR-1后,vaccarin的促內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用被顯著抑制。進(jìn)一步地對(duì)vaccarin促內(nèi)皮細(xì)胞增殖的信號(hào)通路進(jìn)行了研究:利用western blotting實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)周期蛋白cyclinD1在FGFR-1介導(dǎo)的vaccarin促內(nèi)皮細(xì)胞增殖信號(hào)通路中位于ERK1/2的下游。同時(shí),vaccarin可以顯著激活HMEC-1和EA hy926這兩株內(nèi)皮細(xì)胞的FGFR-1信號(hào)通路,而不能顯著激活NIH3T3,A549和RAW264.7這三株非內(nèi)皮細(xì)胞的FGFR-1信號(hào)通路;利用免疫熒光也發(fā)現(xiàn)vaccarin可以顯著提高HMEC-1和EA hy926這兩株內(nèi)皮細(xì)胞的FGFR-1的磷酸化水平,而在NIH3T3,A549和RAW264.7這三株非內(nèi)皮細(xì)胞上無上述現(xiàn)象;利用FGF-2抗體中和除去HMEC-1細(xì)胞培養(yǎng)基中FGF-2后發(fā)現(xiàn)vaccarin誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖被顯著抑制,說明vaccarin是通過FGF-2間接地發(fā)揮促內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的;利用ELISA法發(fā)現(xiàn)vaccarin可以顯著提高HMEC-1細(xì)胞培養(yǎng)液中FGF-2的含量,且這種促進(jìn)作用呈非劑量依賴性,其中最佳濃度為2.15μM。同時(shí),在2.15μM的濃度下,vaccarin可以顯著提高另一株內(nèi)皮細(xì)胞EA hy926細(xì)胞培養(yǎng)液中FGF-2的含量,但是不能顯著提高NIH3T3,A549和RAW264.7這三株非內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中FGF-2的含量。接著,對(duì)vaccarin促血管生成的活性進(jìn)行了研究:通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)vaccarin可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和成管;通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)vaccarin可以促進(jìn)小鼠體內(nèi)種植的基質(zhì)膠中的血管生成。進(jìn)一步地對(duì)vaccarin促血管生成的機(jī)制進(jìn)行了研究:通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阻斷FGFR-1之后,vaccarin對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和成管的促進(jìn)作用被顯著抑制;通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阻斷FGFR-1之后,vaccarin對(duì)小鼠體內(nèi)種植的基質(zhì)膠中血管生成的促進(jìn)作用被顯著抑制;通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)vaccarin通過FGF-2間接地發(fā)揮促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和成管地作用。綜上所述,vaccarin通過激活FGFR-1信號(hào)通路促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

及治療閉經(jīng)和乳腺炎等疾病中[2-4]。研究發(fā)現(xiàn)從王不留行中可括黃酮、三萜皂苷、環(huán)肽、生物堿、酚酸以及類固醇[5,6]。黃酮苷的研究黃酮苷(vaccarin)是從王不留行中分離提取出來的單體化合典（2015 版）中被認(rèn)為是王不留行（Vaccariasegetalis）的主苷是一種黃酮糖苷，呈淡黃色顆粒狀結(jié)晶，易溶于甲醇、甲醇等，難溶于氯仿、乙酸乙酯和石油醚等。王不留行黃酮苷，由于王不留行黃酮苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的治療作用，其受到越來點(diǎn)。王不留行黃酮苷可以通過抑制 Notch 信號(hào)通路，減少過內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，這證明王不留行黃酮苷可以用于糖尿病患者治療[8]。王不留行黃酮苷在體外可以刺激 HMEC-1 細(xì)胞增殖管生成[9]。將王不留行黃酮苷附著于細(xì)菌纖維素膜后，可以機(jī)械性能，同時(shí)載有王不留行黃酮苷的細(xì)菌纖維素膜能夠更，王不留行黃酮苷促內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成的靶受體和相步研究。

第一章 緒論到 FGFR-1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的特定功能：在近膜區(qū)域中的 Y463 負(fù)責(zé)Y653 和 Y654 在第二激酶結(jié)構(gòu)域中對(duì)激酶活性有重要意義；Y-γ）[39]的結(jié)合位點(diǎn)。已知幾種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)通過 FGFR-1 介導(dǎo)括 Ras 途徑，Src 家族酪氨酸激酶，磷酸肌醇 3-激酶（PI3K）和，F(xiàn)GFR-1 的研究越來越受到關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，肽酶 C56 的蛋白 可以通過激活 FGFR-1 信號(hào)通路促進(jìn)血管生成和骨生成[40]。還色素瘤糖蛋白 B（GPNMB）可以通過激活 FGFR-1 信號(hào)通路，促和成管，促進(jìn)小鼠體內(nèi)的基質(zhì)膠中血管生成以及促進(jìn)骨生成[41]。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 Arzu Hizay;Mark Seitz;Maria Grosheva;Nektarios Sinis;Yasemin Kaya;Habib Bendella;Levent Sarikcioglu;Sarah A.Dunlop;Doychin N.Angelov;;FGF-2 is required to prevent astrogliosis in the facial nucleus after facial nerve injury and mechanical stimulation of denervated vibrissal muscles[J];The Journal of Biomedical Research;2016年02期

2 Nan Su;Min Jin;Lin Chen;;Role of FGF/FGFR signaling in skeletal development and homeostasis: learning from mouse models[J];Bone Research;2014年01期

3 徐新蓉;龔國富;馬萍;;ELISA檢測(cè)過程中影響因素及防控措施分析[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

4 桑圣民,毛士龍,勞愛娜,陳仲良;中藥王不留行化學(xué)成分的研究Ⅲ[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2000年03期

5 桑圣民,夏增華,毛士龍,勞愛娜,陳仲良;中藥王不留行中黃酮甙類成分的研究[J];中國中藥雜志;2000年04期

本文編號(hào)：2720306