【摘要】：目的采用化學(xué)顯色法、SDS-PAGE特征圖譜和分光光度法等技術(shù)對采自西南地區(qū)胡蜂的蜂毒所含各類物質(zhì)成分進(jìn)行鑒別研究和含量測定研究,為分離純化得到的分子結(jié)構(gòu)鑒定提供參考;采用HPLC分離純化胡蜂毒中6個(gè)色譜純組分,并利用質(zhì)譜、核磁共振光譜、蛋白多肽N端測序和C端測序等技術(shù)手段對各組分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。方法采用了茚三酮試驗(yàn)、蛋白黃反應(yīng)試驗(yàn)和雙縮脲反應(yīng)試驗(yàn)來鑒別胡蜂毒中的氨基酸和多肽蛋白類成分;α-萘酚試驗(yàn)、斐林試驗(yàn)、多糖試驗(yàn)來鑒別本品中糖或苷類成分;采用碘化鉍鉀試驗(yàn)、碘化汞鉀試驗(yàn)、碘-碘化鉀試驗(yàn)、硅鎢酸試驗(yàn)等鑒別本品中生物堿類成分,堿性β-萘酚等試劑來鑒別本品中的芳胺類成分;利用SDS-PAGE特征圖譜檢測同一產(chǎn)地不同批次的胡蜂毒的分子量分布;初步研究胡蜂毒的大類化學(xué)成分,并進(jìn)行了相關(guān)含量研究:采用BCA法、福林酚法、考馬斯亮藍(lán)法測定胡蜂毒中多肽蛋白類物質(zhì)含量;茚三酮法測定本品中游離氨基酸含量;苯酚-硫酸法測定胡蜂毒中的多糖含量;采用制備HPLC技術(shù)分離純化了胡蜂毒的主要成分,并利用現(xiàn)代波譜技術(shù)和測序技術(shù)完成了各主成分的結(jié)構(gòu)表征。結(jié)果蛋白黃鑒別試驗(yàn)、茚三酮和雙縮脲的鑒別試驗(yàn)結(jié)果表明本品中可能含有氨基酸和多肽蛋白類物質(zhì);α-萘酚鑒別試驗(yàn)、斐林鑒別試驗(yàn)和多糖鑒別試驗(yàn)結(jié)果表明本品中可能含有多糖類物質(zhì),不含有還原糖和苷類物質(zhì);生物堿的鑒別試驗(yàn)證明了本品中可能含有生物堿類成分,芳胺類物質(zhì)的鑒別試驗(yàn)則顯示了本品中可能含有芳仲胺類成分;以上對本品中大類成分的鑒別研究對進(jìn)一步的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了有力支持。對總多肽蛋白、游離氨基酸和多糖含量測定的研究結(jié)果表明,本品中含有豐富的蛋白多肽類物質(zhì)以及游離氨基酸和多糖類成分。利用制備HPLC技術(shù)對胡蜂毒進(jìn)行了分離純化,開發(fā)了能實(shí)現(xiàn)大量富集本品主要成分的分離純化技術(shù),得到了大量的A～F等6個(gè)主要成分,經(jīng)系統(tǒng)的純度檢查樣品純度達(dá)到了 98%以上。并利用現(xiàn)代質(zhì)譜、核磁共振光譜以及蛋白多肽N端和C端測序技術(shù)完成了主成分的結(jié)構(gòu)鑒定工作,得到了2個(gè)胺類和生物堿類成分、3個(gè)生物活性小肽和1個(gè)生物活性蛋白家族亞型。結(jié)論本課題經(jīng)過對西南地區(qū)胡蜂毒的大類化學(xué)成分鑒別研究和含量測定研究以及主要成分的大量分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定工作,補(bǔ)充了對該種胡蜂蜂毒的物質(zhì)基礎(chǔ)研究內(nèi)容,為今后本品的藥用開發(fā)及藥效機(jī)理研究等奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284
【圖文】：

３．１胡蜂毒中總肽蛋白類物質(zhì)和氨基酸的鑒別實(shí)驗(yàn)逡逑３．１．１蛋白黃鑒別反應(yīng)逡逑如圖１－１所示，實(shí)驗(yàn)中加入硝酸后，對照品溶液呈黃色，供試品溶液呈乳黃逡逑色；如圖１－２所示，當(dāng)加入氧氧化鈉后，對照品和供試品溶液均呈現(xiàn)橙黃色，表逡逑明胡蜂毒可能含有蛋白質(zhì)類成分。此鑒別方法專屬性高，重復(fù)性好。逡逑｜—邐ｉ邋：邋Ｉ逡逑空白對照品批１邋批２邋批３邐空白對照品批１邋批２邋批３逡逑圖１－１胡蜂毒的蛋白黃鑒別中間反應(yīng)邐圖１－２胡蜂毒的蛋白黃鑒別最終反應(yīng)逡逑３．１．２茚三酮鑒別反應(yīng)逡逑如圖１－３所示，在實(shí)驗(yàn)中加入２邋％茚三酮乙醇溶液，加熱后，供試品和對照逡逑品均顯紫色，說明胡蜂毒可能含有游離氨基酸類成分，同時(shí)未顯示黃色，提示胡逡逑蜂毒可能不含脯氨酸和羥脯氨酸成分。此方法針對檢測供試品中的氨基酸及具有逡逑游離ｏｔ－氨基和（Ｘ－羧基的肽類組分，簡單易行，顯色明顯，重復(fù)性好。逡逑＇１１邋１邋￡逡逑空白對照品批１邋批２邋批３逡逑圖１－３胡蜂毒的茚三酮鑒別ｋ應(yīng)逡逑１０逡逑

３．１胡蜂毒中總肽蛋白類物質(zhì)和氨基酸的鑒別實(shí)驗(yàn)逡逑３．１．１蛋白黃鑒別反應(yīng)逡逑如圖１－１所示，實(shí)驗(yàn)中加入硝酸后，對照品溶液呈黃色，供試品溶液呈乳黃逡逑色；如圖１－２所示，當(dāng)加入氧氧化鈉后，對照品和供試品溶液均呈現(xiàn)橙黃色，表逡逑明胡蜂毒可能含有蛋白質(zhì)類成分。此鑒別方法專屬性高，重復(fù)性好。逡逑｜—邐ｉ邋：邋Ｉ逡逑空白對照品批１邋批２邋批３邐空白對照品批１邋批２邋批３逡逑圖１－１胡蜂毒的蛋白黃鑒別中間反應(yīng)邐圖１－２胡蜂毒的蛋白黃鑒別最終反應(yīng)逡逑３．１．２茚三酮鑒別反應(yīng)逡逑如圖１－３所示，在實(shí)驗(yàn)中加入２邋％茚三酮乙醇溶液，加熱后，供試品和對照逡逑品均顯紫色，說明胡蜂毒可能含有游離氨基酸類成分，同時(shí)未顯示黃色，提示胡逡逑蜂毒可能不含脯氨酸和羥脯氨酸成分。此方法針對檢測供試品中的氨基酸及具有逡逑游離ｏｔ－氨基和（Ｘ－羧基的肽類組分，簡單易行，顯色明顯，重復(fù)性好。逡逑＇１１邋１邋￡逡逑空白對照品批１邋批２邋批３逡逑圖１－３胡蜂毒的茚三酮鑒別ｋ應(yīng)逡逑１０逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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4 李娜;岳蓓蓓;張家賀;趙s

本文編號：2719202