發(fā)布時(shí)間：2020-06-18 10:39

【摘要】：在中醫(yī)藥領(lǐng)域,硫熏加工方法作為傳統(tǒng)的中藥材養(yǎng)護(hù)方法,具有快速干燥、漂白、防霉、防蟲(chóng)和延長(zhǎng)貯藏期等作用,已廣泛應(yīng)用到中藥材的初加工和倉(cāng)儲(chǔ)等環(huán)節(jié)。當(dāng)前中藥材硫熏濫用現(xiàn)象極為普遍,尤其是產(chǎn)地加工和貯藏保管等環(huán)節(jié)。一方面,二氧化硫是國(guó)內(nèi)外允許使用的一種食品添加劑,多以亞硫酸鹽的形式添加到食品中,發(fā)揮防腐、漂白和抗氧化的作用。另一方面,過(guò)度硫熏產(chǎn)生的大量二氧化硫不僅會(huì)影響藥材質(zhì)量,改變藥材化學(xué)成分,甚至危害人體健康。如何制定切實(shí)可行的中藥材硫熏工藝,使之既能發(fā)揮硫熏防蟲(chóng)防霉的養(yǎng)護(hù)作用,又能最大限度降低二氧化硫殘留危害是急需解決的問(wèn)題。針對(duì)中藥材硫熏以及二氧化硫殘留帶來(lái)的問(wèn)題,國(guó)內(nèi)外雖然制定了二氧化硫限量標(biāo)準(zhǔn),但各國(guó)限量標(biāo)準(zhǔn)不一致,有些國(guó)家制定的標(biāo)準(zhǔn)過(guò)于嚴(yán)苛,并不適合中藥材二氧化硫殘留評(píng)價(jià)�？紤]到空氣中含有二氧化硫,植物本身也含有硫,甚至一些中藥材本身就有含硫化合物(如天麻),這就會(huì)導(dǎo)致某些中藥材即使不經(jīng)硫熏,也會(huì)出現(xiàn)二氧化硫超標(biāo)的情況。故當(dāng)前中藥材二氧化硫限量標(biāo)準(zhǔn)的合理性還需進(jìn)一步驗(yàn)證。另外,針對(duì)中藥材使用特點(diǎn)和用藥習(xí)慣,有必要研究并制定符合的中藥材的二氧化硫限量標(biāo)準(zhǔn)。此外,在評(píng)價(jià)中藥材硫熏程度方面,僅以二氧化硫作為質(zhì)控指標(biāo)是不夠的,缺少穩(wěn)定可靠的中藥材硫熏標(biāo)志物作為內(nèi)在質(zhì)控指標(biāo)。因此,本論文首先進(jìn)行中藥材二氧化硫風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,在此基礎(chǔ)上選取硫熏較為嚴(yán)重的天麻和牛膝為研究對(duì)象,從硫熏工藝和硫熏標(biāo)志物方面對(duì)其藥材質(zhì)量和安全性進(jìn)行了系統(tǒng)性研究。研究結(jié)果如下:1.結(jié)合中藥使用特點(diǎn)和用藥習(xí)慣開(kāi)展中藥材二氧化硫風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估根據(jù)美國(guó)環(huán)保局提出的THQ風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型和JECFA規(guī)定的二氧化硫每日容許攝入量(ADI=0.7mg/(kg·d)),綜合考慮中藥用藥特點(diǎn)和暴露頻率、暴露時(shí)間等指標(biāo),對(duì)中藥材二氧化硫最大暴露風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià),計(jì)算更為科學(xué)合理的二氧化硫限量標(biāo)準(zhǔn)值。最終得到中藥材中二氧化硫最大殘留限量值為750 mg/kg,極大地降低了中藥材二氧化硫超標(biāo)率。這與食品添加劑法典標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的蔬菜水果類(lèi)的二氧化硫限量值(500～1000mg/kg)相一致。尤其是考慮到藥材并不像食品一樣每天都會(huì)食用,故該參考值更加符合中藥材的使用特點(diǎn)和用藥習(xí)慣。2.基于代謝組學(xué)和硫熏工藝探討硫磺熏蒸對(duì)天麻藥材質(zhì)量的影響為了尋找穩(wěn)定可靠的內(nèi)在硫熏質(zhì)控指標(biāo),本論文采用基于UPLC-Q-TOF-MS的代謝組學(xué)技術(shù)和多元統(tǒng)計(jì)分析方法對(duì)天麻硫熏前后藥材質(zhì)量進(jìn)行差異分析。結(jié)果從天麻藥材中得到6種硫熏標(biāo)志物,包括2個(gè)含硫的酚酸類(lèi)成分(p-hydroxybenzyl hydrogen sulfite 和p-mercaptobenzyl hydrogen sulfate),1 個(gè)含硫的二糖類(lèi)成分(3-O-(6-O-sulfo-β-D-galactopyranosyl)-β-D-glucopyranose),1 個(gè)糖酯類(lèi)成分(Gingerglycolipid B),2 個(gè)磷脂類(lèi)成分(Phosphatidylinositol(18:2/0:0)and Phosphatidylinositol(0:0/18:2))。其中,p-hydroxybenzyl hydrogen sulfite 作為硫熏天麻中豐度較高且專(zhuān)屬性較好的硫熏標(biāo)志物,是判斷天麻硫熏與否的重要質(zhì)控指標(biāo)。為了實(shí)現(xiàn)市場(chǎng)和產(chǎn)地天麻硫熏程度的檢測(cè),本研究對(duì)天麻中硫熏標(biāo)志物p-hydroxybenzyl hydrogen sulfite進(jìn)行化學(xué)合成和分離純化,并建立了該天麻硫熏標(biāo)志物的定量分析方法。通過(guò)考察不同貯藏時(shí)間和加熱處理對(duì)該硫熏標(biāo)志物的影響,發(fā)現(xiàn)該標(biāo)志物在貯藏過(guò)程中(0～8個(gè)月)穩(wěn)定性好,且不同加熱溫度(50℃、60℃、70℃和80℃)和加熱時(shí)間(2h、4h、8h、12h和24h)對(duì)其影響較小。故該標(biāo)志物可作為評(píng)價(jià)天麻硫熏與否以及硫熏程度的重要指標(biāo)。為進(jìn)一步研究硫熏對(duì)天麻藥材質(zhì)量的影響程度,本論文建立了 UPLC同時(shí)測(cè)定天麻藥材中8種化學(xué)成分(腺苷、天麻素、對(duì)羥基苯甲醇、對(duì)羥基苯甲醛、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷E)的定量分析方法。在此基礎(chǔ)上,探討了產(chǎn)地加工環(huán)節(jié)不同硫磺熏蒸工藝,貯藏環(huán)節(jié)不同貯藏時(shí)間以及煎煮處理對(duì)硫熏天麻藥材化學(xué)成分和二氧化硫殘留量的影響。通過(guò)考察不同硫磺用量(硫磺與藥材比1:20、1:40、1:80)和熏蒸時(shí)間(0～24h)對(duì)天麻藥材質(zhì)量的影響,得到1:40組熏蒸1h以?xún)?nèi),恰好能夠?qū)⑻炻樗幉谋砻嫜?且能保證藥材中二氧化硫殘留量在限量值(750mg/kg)以?xún)?nèi)。經(jīng)綜合評(píng)價(jià),最終確定既能保證藥材質(zhì)量和控制二氧化硫殘留量,又能達(dá)到較好的防霉的效果的最佳硫熏工藝為硫磺與藥材用量比1:40,熏蒸1h。通過(guò)不同貯藏時(shí)間考察,硫熏天麻藥材中二氧化硫殘留量在貯藏過(guò)程中逐漸降低,且在貯藏4個(gè)月后,其殘留量會(huì)降低50%以上。另外,在硫熏天麻煎煮過(guò)程中發(fā)現(xiàn)大量的二氧化硫會(huì)隨著水蒸氣擴(kuò)散到大氣中,僅有少量化學(xué)成分和二氧化硫會(huì)隨著水煎液進(jìn)入到人體。本研究針對(duì)硫熏天麻標(biāo)志物和硫熏天麻藥材提取物進(jìn)行了體外細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)。首先考察了不同劑量天麻硫熏標(biāo)志物p-hydroxybenzyl hydrogen sulfite對(duì)人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)、人正常肝細(xì)胞(L-02)和大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC-12)活力的影響。結(jié)果表明該成分對(duì)于人體的肝細(xì)胞和腎細(xì)胞生長(zhǎng)均表現(xiàn)出良好的促進(jìn)作用,且參照《美國(guó)藥典》的毒性分級(jí)法,認(rèn)為該成分對(duì)PC-12細(xì)胞的安全劑量范圍為0～1000 μmol/L,即在0～1000 μmol/L濃度范圍內(nèi),該成分不存在細(xì)胞毒性。此外,按照本研究制定的最佳硫熏工藝進(jìn)行天麻藥材硫熏處理后,對(duì)其藥材水提物進(jìn)行上述3種細(xì)胞活力研究,發(fā)現(xiàn)硫熏后天麻提取物對(duì)上述3種細(xì)胞的無(wú)細(xì)胞毒性,表明該硫熏工藝能夠較好地保證藥材質(zhì)量安全。3.基于代謝組學(xué)和硫熏工藝探討硫磺熏蒸對(duì)牛膝藥材質(zhì)量的影響本論文采用代謝組學(xué)技術(shù)和多元統(tǒng)計(jì)分析方法對(duì)牛膝硫熏前后藥材質(zhì)量進(jìn)行差異分析,尋找特異性的硫熏標(biāo)志物。結(jié)果發(fā)現(xiàn),從牛膝藥材共鑒定得到5個(gè)顯著性差異成分,包括未硫熏牛膝中3個(gè)三萜苷類(lèi)差異成分(BetavulgarosideⅣ、Betavulgaroside Ⅲ、Betavulgaroside Ⅱ)和硫熏牛膝中2個(gè)酰胺類(lèi)差異成分(阿魏酰-3-甲氧基酪胺(Feruloyl-4-O-methyldopamine)和阿魏�；野�(Moupinamide)),未發(fā)現(xiàn)專(zhuān)屬性較好的含硫標(biāo)志物。建立了 UPLC-MS同時(shí)測(cè)定牛膝藥材中5種化學(xué)成分(β-蛻皮甾酮、甜菜堿、齊墩果酸、阿魏酸、5-羥甲基糠醛)的定量分析方法。在此基礎(chǔ)上,探討了不同硫磺用量和硫熏時(shí)間對(duì)牛膝藥材化學(xué)成分和二氧化硫殘留量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),硫磺與藥材用量1:80熏蒸2 h以?xún)?nèi)對(duì)藥材化學(xué)成分影響不大,并且按照硫磺與藥材用量1:40熏蒸1 h以?xún)?nèi)能夠最大限度減小對(duì)牛膝藥材質(zhì)量的影響,又能控制藥材中二氧化硫殘留量在限量值(750mg/kg)以?xún)?nèi)。另外,按照本研究制定的最佳硫熏工藝進(jìn)行牛膝藥材硫熏處理后,對(duì)其藥材水提物進(jìn)行人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)、人正常肝細(xì)胞(L-02)和大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC-12)3種細(xì)胞活力研究,發(fā)現(xiàn)在正常的濃度范圍內(nèi),硫熏牛膝提取物與未硫熏藥材提取物相比,對(duì)HK-2、L-02和PC-12細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性無(wú)細(xì)胞毒性。進(jìn)一步驗(yàn)證本研究制定的硫熏工藝能夠較好地保證藥材質(zhì)量安全。綜上,本研究建立了中藥材二氧化硫風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型,得到二氧化硫最大殘留理論限量值;并在此基礎(chǔ)上,制定了一套合理可行的中藥材硫磺熏蒸質(zhì)量控制研究方案,可用于快速尋找特征性硫熏標(biāo)志物,獲得了安全可靠的硫熏天麻特異性質(zhì)控指標(biāo),并確定了天麻和牛膝藥材的最佳硫熏工藝。本研究為其他硫熏中藥材的質(zhì)量控制和安全性評(píng)價(jià)提供思路,同時(shí)也為中藥材二氧化硫限量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R282.4
【圖文】：

圖３－２不同提取溶劑的天麻提取液總離子流圖逡逑Ａ：邋５０％乙醇；Ｂ：邋５０％甲醇；Ｃ：純水逡逑

邐３５逡逑Ｔｉｍｅ邋（ｍｉｎ）逡逑圖３－２不同提取溶劑的天麻提取液總離子流圖逡逑Ａ：邋５０％乙醇；Ｂ：邋５０％甲醇；Ｃ：純水逡逑１００１邐Ａ逡逑ｈｉ邋Ｉ逡逑0」Ｌ．Ｉ．，．邋ｉ．邋．邐－邋－邋．ｌｉｌｌｉ邋）ｉｉ．邋ｔ．．邋Ｉ邋ｉＬ邋＞邋ｊ邋．．邋ｉ邋ｊ邐！一【邋一ｉ－＊邐ｊｉ．／ｉ＾Ｌ邋＾逡逑0邐５邐１０邐１５邐２０邐２５邐３０邐３５逡逑１００邋］邐Ｂ逡逑％邋．逡逑ｇ逡逑ｃ＼ｊ逡逑＾邋５０邋－逡逑１邐－邐Ｒｕｔｉｎ逡逑？逡逑—邐－邋＼逡逑Ａ邋Ｉ邋Ｉ，．邋？邋ｍ邋ｉｉｉｉｉｉｉ邋ｌｉ邋ｉ邋ＵＡ邋ｉ邋ｊ邋．ｌ．邋ｉｌｉｉ邐，邐■．邐．邋ｊｉ邋ｊａ．Ｉ邋＊邋Ｖ－逡逑＊１—＊—

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2719116