【摘要】：目的:(1)研究金線蓮苷對(duì)ANIT致肝內(nèi)膽汁淤積型肝損傷的保護(hù)作用;(2)考察金線蓮苷在比格犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征及生物利用度,為其成藥性研究提供數(shù)據(jù)支持。方法:(1)構(gòu)建ANIT致大鼠肝內(nèi)膽汁淤積型肝損傷模型,通過灌胃給藥的方式連續(xù)給予不同劑量的金線蓮苷,考察灌胃給予金線蓮苷后血漿生化指標(biāo)、肝臟組織病理及生物基質(zhì)中膽汁酸的濃度變化,在整體動(dòng)物水平評(píng)價(jià)金線蓮苷對(duì)膽汁淤積型肝損傷的保護(hù)作用。并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫印跡的方法測(cè)定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)收集肝臟樣本中核受體、膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體、代謝酶的基因和蛋白表達(dá)水平,以研究金線蓮苷對(duì)膽汁淤積型肝損傷發(fā)揮保護(hù)作用的潛在機(jī)制。(2)通過系統(tǒng)地評(píng)價(jià)金線蓮苷在比格犬全血和血漿中的穩(wěn)定性,本文建立一種快速、靈敏的犬血漿中金線蓮苷的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測(cè)方法,并系統(tǒng)地評(píng)價(jià)金線蓮苷在比格犬全血和血漿中的穩(wěn)定性。將經(jīng)過完整方法學(xué)驗(yàn)證的檢測(cè)方法應(yīng)用于金線蓮苷在比格犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究,并考察金線蓮苷在比格犬體內(nèi)的生物利用度。結(jié)果:(1)金線蓮苷可以顯著降低膽汁淤積大鼠血漿生化指標(biāo)、改善肝臟病理生理情況,并降低血漿中濃度顯著性升高的膽汁酸濃度;金線蓮苷通過激動(dòng)FXR上調(diào)膽汁酸外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá),從而促進(jìn)膽汁酸外排并緩解肝內(nèi)膽汁淤積,且對(duì)大鼠肝內(nèi)膽汁淤積型肝損傷的保護(hù)作用呈現(xiàn)劑量依賴性。(2)通過體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),確定金線蓮苷在生物基質(zhì)中的不穩(wěn)性主要是由于其容易水解導(dǎo)致的,并采用嚴(yán)格控制溫度和樣品處理時(shí)間的方式解決金線蓮苷在犬基質(zhì)中的穩(wěn)定性問題;通過體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),首次揭示金線蓮苷在比格犬體內(nèi)的生物利用度,金線蓮苷在犬體內(nèi)低、中、高劑量的生物利用度均為30%左右,生物利用度較高。結(jié)論:金線蓮苷對(duì)ANIT誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積型肝損傷具有保護(hù)作用,其犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果也表明灌胃給藥后吸收迅速、生物利用度較高,具有良好的新藥研發(fā)前景。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)流程圖物樣本的采集重大鼠并記錄體重后，用 25%烏拉坦麻醉大鼠，剪開麻醉大鼠腹腔離膽管，并使用 PE-50 軟管對(duì)大鼠膽管進(jìn)行插管，待觀測(cè)到膽汁流象后，用預(yù)先稱重好的 2mLEP 管接取膽汁，1h 后結(jié)束膽汁收集，有大鼠膽汁的 EP 管重量，并將收集的血漿置于冰上保存。隨后，行心臟穿刺取血至含抗凝劑肝素鈉的1.5mLEP管中，冰上放置30mpm 離心 10min，收集血漿并分裝后，將收集的血漿和膽汁立即保存后，使用預(yù)熱 37 ℃的生理鹽水從肝門靜脈對(duì)大鼠進(jìn)行心臟灌流，凈且大鼠肝臟變?yōu)橥咙S色后，收集大鼠肝臟并稱重。將大鼠肝臟隨一份保存在 4%多聚甲醛中用于病理生理考察，剩余 5 份迅速放于完成對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的樣品采集后，將于液氮中凍存的所有樣本

圖 1.4 金線蓮苷對(duì) ANIT 致膽汁淤積大鼠肝臟病理生理的影響。A，正常大鼠；B，ANIT模型大鼠；C，ANIT 模型下灌胃給予低劑量金線蓮苷（50mg/kg）大鼠；D，ANIT 模型下灌胃給予中劑量金線蓮苷（100mg/kg）大鼠；E，ANIT 模型下灌胃給予高劑量金線蓮苷（200mg/kg）大鼠；F，ANIT 模型下灌胃給予 UDCA（80mg/kg）治療大鼠；G，正常大鼠灌胃給予 100mg/kg 金線蓮苷。3.4 金線蓮苷對(duì) ANIT 致膽汁淤積大鼠血漿膽汁酸穩(wěn)態(tài)的影響金線蓮苷對(duì) ANIT 致膽汁淤積大鼠血漿膽汁酸穩(wěn)態(tài)的影響如圖 1.5 所示。大鼠灌胃給予 75mg/kgANIT 后，血漿中 DCA、LCA、TCA、T-α-MCA、T-β-MCA、TCDCA、TDCA、TUDCA、TLCA 和 GCA 顯著性升高，但 CDCA、UDCA 和GUDCA 顯著性下降。灌胃給予不同劑量金線蓮苷可以顯著降低膽汁淤積大鼠血漿中濃度升高的 LCA、TCA、T-α-MCA、T-β-MCA、TCDCA 和 TLCA，但可升高血漿中 CA 和 CDCA 濃度水平。值得注意的是，正常大鼠給予 100mg/kg 金線

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5 趙s

本文編號(hào)：2718692