【摘要】：鹿茸自古以來是我國貴重的藥材,主要功效有補(bǔ)腎填精、強(qiáng)筋健骨、調(diào)節(jié)機(jī)體,對耳聾耳鳴也有著不錯(cuò)的治療效果。研究表明鹿茸具有抗炎的作用功效,本研究圍繞鹿茸多肽的抗炎活性展開。首先取新鮮的雙陽梅花鹿(Cervus nippon)鹿茸,分別用超聲助提法和CO_2超臨界提取法提取鹿茸蛋白多肽。通過比對不同提取工藝的提取率,進(jìn)一步確定鹿茸總蛋白的提取工藝:超聲助提法對鹿茸總蛋白的提取率為2.81%,CO_2超臨界提取法對鹿茸總蛋白的提取率為3.93%,CO_2超臨界提取法對鹿茸總蛋白的提取率要優(yōu)于超聲助提法的提取率。將提取出的鹿茸蛋白分別通過胃蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶及復(fù)合蛋白酶(堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶復(fù)合物)進(jìn)行酶解,并通過單因素分析及甲醛滴定法確定鹿茸酶解的最佳工藝,得到最佳酶解工藝為:以鹿茸蛋白為水解底物,其濃度為3%,通過復(fù)合酶酶解,酶解溫度為50℃、酶解時(shí)間為3h。構(gòu)建小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(NIH3T3)細(xì)胞抗炎模型,對各種工藝酶解后的鹿茸多肽抗炎效果進(jìn)行評估。各工藝酶解后的鹿茸多肽在給藥25mg時(shí)抗炎效果最佳,其抗炎效果為:復(fù)合酶酶解后鹿茸多肽抗炎活性中性蛋白酶酶解后鹿茸多肽抗炎活性胰蛋白酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性堿性蛋白酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性胃蛋白酶酶解后鹿茸多肽抗炎活性未酶解鹿茸總蛋白抗炎活性。之后對復(fù)合酶酶解后得到的鹿茸多肽進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,從凝膠電泳結(jié)果我們看出經(jīng)過復(fù)合酶酶解后,大分子鹿茸多肽被大量酶解,酶解后的鹿茸多肽分子量大約在4~15kDa。經(jīng)過復(fù)合酶酶解后的鹿茸多肽通過凝膠層析法分離出20種單體多肽,通過構(gòu)建NIH3T3體外細(xì)胞抗炎模型對20種多肽的抗炎活性進(jìn)行考察,共計(jì)篩選出13種具有抗炎活性的多肽,將此13種具有抗炎活性的多肽進(jìn)行測序,并與NCBI數(shù)據(jù)比對,分析其功能。在給藥計(jì)量相同的情況下將13種多肽的抗炎效果與復(fù)合酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性進(jìn)行比對,得出結(jié)論單體多肽的抗炎活性低于復(fù)合酶酶解后的鹿茸多肽抗炎活性,我們推斷鹿茸的抗炎效果是多種多肽共同作用的結(jié)果,單一蛋白多肽并不能有效的抑制炎癥發(fā)生。本研究為鹿茸的利用及其相關(guān)鹿茸產(chǎn)品的開發(fā)奠定了一定基礎(chǔ),對鹿業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展有重要意義。對鹿茸中有效物質(zhì)的功效研究及鹿茸產(chǎn)品開發(fā)提供思路和理論依據(jù),并奠定一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：長春工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R284
【圖文】：

胃蛋白酶在不同鹿茸多肽濃度下對蛋白水解度的影響度保持 50℃不發(fā)生變化，在所需酶解溶液到達(dá) 50℃后，在溶液中加，并以不同濃度的蛋白底物——鹿茸總蛋白進(jìn)行酶解，水解時(shí)間為 4為 500mL，結(jié)果見圖 3.2。當(dāng)?shù)孜锫谷椎鞍椎臐舛瘸^ 3%時(shí)，水解增加而增加，并且還有降低的趨勢。綜合考慮到蛋白酶和鹿茸的成本人力的關(guān)系，最終通過實(shí)驗(yàn)得出胃蛋白酶水解鹿茸多肽底物最佳適

圖 3.1 堿性蛋白酶在不同鹿茸多肽濃度下對蛋白水解度的影響胃蛋白酶在不同鹿茸多肽濃度下對蛋白水解度的影響保持 50℃不發(fā)生變化，在所需酶解溶液到達(dá) 50℃后，在溶液中加入并以不同濃度的蛋白底物——鹿茸總蛋白進(jìn)行酶解，水解時(shí)間為 4h，為 500mL，結(jié)果見圖 3.2。當(dāng)?shù)孜锫谷椎鞍椎臐舛瘸^ 3%時(shí)，水解度加而增加，并且還有降低的趨勢。綜合考慮到蛋白酶和鹿茸的成本以人力的關(guān)系，最終通過實(shí)驗(yàn)得出胃蛋白酶水解鹿茸多肽底物最佳適合

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2718380