【摘要】：研究目標(biāo):非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精外,由其他明確的損肝因素所致的,以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征。它是很多慢性重型肝臟疾病,如肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的重要原因之一。NAFLD與活性氧(ROS)自由基產(chǎn)生和氧化還原平衡的破壞相關(guān)。Bmi1蛋白是聚刷蛋白抑制復(fù)合物1(polycomb repressor complex 1,PRC1)的組分之一,其主要功能是在組織發(fā)育和細(xì)胞分化、增殖中調(diào)控發(fā)育和增殖相關(guān)基因表達(dá)。Bmi1蛋白在介導(dǎo)ROS的生成、線粒體的功能與DNA損傷修復(fù)(DNA damage repair,DDR)中扮演重要作用。研究顯示天然植物性抗氧化劑,白藜蘆醇可以保護(hù)肝組織免受氧化應(yīng)激和肝線粒體功能障礙的損傷。本研究中,我們通過油酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞NAFLD模型,以及向L02細(xì)胞中轉(zhuǎn)染過表達(dá)和降低Bmi1的質(zhì)粒的方法,采用Western blot、qRT-PCR和免疫熒光技術(shù),評(píng)價(jià)白藜蘆醇是否是通過上調(diào)氧化相關(guān)蛋白Bmi1的表達(dá),降低ROS從而起到緩解油酸誘導(dǎo)的脂毒性作用。研究方法:本研究首先查看研究所給予的白藜蘆醇劑量是否可以緩解油酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂肪積累、代謝損傷和凋亡毒性作用。然后查看實(shí)驗(yàn)中的白藜蘆醇是否可以降低油酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞氧化應(yīng)激能力,以及改善DNA損傷。再用Western blot和qRT-PCR的方法確定目標(biāo)分子Bmi1是否是白藜蘆醇的作用靶點(diǎn)。最后,在L02細(xì)胞中過表達(dá)和降低Bmi1的表達(dá)水平,查看油酸對(duì)L02細(xì)胞的脂毒性作用,從而證明給予白藜蘆醇起著和上調(diào)Bmi1一樣的保護(hù)作用。研究結(jié)果:白藜蘆醇改善了油酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞脂毒性作用,并且白藜蘆醇降低了油酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞積累的ROS水平;同時(shí),油酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞中,Bmi1蛋白表達(dá)降低且其下游通路蛋白INK4A/ARF上調(diào),而白藜蘆醇上調(diào)了Bmi1蛋白卻降低INK4A/ARF。此外,向L02細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Bmi1 siRNA后,細(xì)胞更容易造成脂毒性;而向L02細(xì)胞中轉(zhuǎn)染過表達(dá)Bmi1質(zhì)粒,可以拮抗油酸誘導(dǎo)的脂毒性損傷。這些發(fā)現(xiàn)不僅闡明了白藜蘆醇作為抗氧化劑緩解NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,也為開發(fā)白藜蘆醇作為防治NAFLD的藥物提供了理論支持。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文降（圖 1.C）。油酸處理后，L02 細(xì)胞中促進(jìn)凋亡蛋白 cleaved caspase3 和 Bax 蛋白表達(dá)顯著上升，抑制凋亡蛋白 Bcl2 蛋白表達(dá)顯著下降，而油酸與白藜蘆醇聯(lián)合給藥時(shí)，凋亡相關(guān)基因表達(dá)情況都被逆轉(zhuǎn)（圖 1.D）。這所有的結(jié)果都顯示，白藜蘆醇改善了油酸誘導(dǎo)的 L02 細(xì)胞凋亡。

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文（0.8 mM）或聯(lián)合白藜蘆醇（50 uM）培養(yǎng) 24 h 后，Western blot 顯示凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。3.2 白藜蘆醇改善了油酸誘導(dǎo)的 L02 細(xì)胞脂滴積累Joseph A. Baur 在 2006 年首次報(bào)道白藜蘆醇降低了肥胖小鼠的脂滴積累，隨后大量的研究證實(shí)了白藜蘆醇能改善肝臟脂肪化，因而我們應(yīng)用油酸模型驗(yàn)證白藜蘆醇對(duì)脂滴形成的作用。我們發(fā)現(xiàn)，用 0.8 mM 油酸處理 L02 細(xì)胞 24 h 后，油紅 O 染色結(jié)果顯示，細(xì)胞脂滴積累明顯增多（圖 2.A）。而當(dāng)將白藜蘆醇和油酸聯(lián)合給藥時(shí)，因油酸而積累的脂滴數(shù)量明顯降低（圖 2.A）。同時(shí)，我們應(yīng)用TG 定量試劑盒檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)的脂滴濃度，發(fā)現(xiàn)油酸處理組 TG 濃度顯著升高，而白藜蘆醇和油酸聯(lián)合組 TG 濃度較油酸處理組顯著降低（圖 2.B）。**: p < 0.01表示組間有顯著性差異。

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本文編號(hào)：2718291