【摘要】：甲狀腺癌屬于內(nèi)分泌惡性腫瘤,近幾年的發(fā)病率不斷上升,其中乳頭狀甲狀腺癌的發(fā)病率最高。盡管有多種手段治療甲狀腺癌,但仍存在復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、惡化等風(fēng)險(xiǎn),有些治療還會(huì)帶來副作用。多酚類物質(zhì)具有一定的抗腫瘤活性,并且作為天然化合物的代表具有來源廣、毒性低、作用靶點(diǎn)多樣等優(yōu)勢。石榴中提取的安石榴苷屬于多酚中的大分子物質(zhì),其抗腫瘤功效已經(jīng)引起科學(xué)家的關(guān)注。然而安石榴苷在甲狀腺癌中的作用機(jī)制尚未明晰。本論文主要探究安石榴苷對乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細(xì)胞的抑制作用和相關(guān)機(jī)理,為安石榴苷在甲狀腺癌治療方面的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)探索新的治療靶點(diǎn)。本課題首先探討安石榴苷對BCPAP細(xì)胞的毒性作用。SRB和MTT檢測結(jié)果顯示安石榴苷以劑量依賴和時(shí)間依賴方式抑制BCPAP細(xì)胞存活,并且與正常甲狀腺細(xì)胞Nthy-ori 3-1相比,安石榴苷對BCPAP細(xì)胞的抑制效應(yīng)更顯著。臺(tái)盼藍(lán)以及PI染色結(jié)果顯示,安石榴苷破壞了BCPAP細(xì)胞膜的完整性,且具有濃度依賴性。在此基礎(chǔ)上,我們探討安石榴苷誘導(dǎo)BCPAP細(xì)胞死亡的途徑。PI/Hoechst 33342雙染以及western blot檢測結(jié)果顯示安石榴苷未引起細(xì)胞凋亡。AO染色以及自噬相關(guān)蛋白的檢測結(jié)果顯示安石榴苷誘導(dǎo)了細(xì)胞自噬。聯(lián)用安石榴苷與自噬抑制劑3-MA、Baf A1后,我們發(fā)現(xiàn)安石榴苷促進(jìn)了細(xì)胞內(nèi)自噬流。MTT結(jié)果顯示3-MA顯著地逆轉(zhuǎn)了安石榴苷誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡效應(yīng)。Western blot檢測結(jié)果進(jìn)一步說明安石榴苷可能通過正調(diào)控ERK與p38通路和負(fù)調(diào)控mTOR通路來誘導(dǎo)自噬,進(jìn)而促進(jìn)BCPAP細(xì)胞死亡。第三部分探討安石榴苷對BCPAP細(xì)胞DNA損傷的影響及相關(guān)機(jī)制。結(jié)果顯示安石榴苷促進(jìn)DNA損傷標(biāo)志物H2A.X的磷酸化,引起細(xì)胞DNA斷裂,但不引起DNA構(gòu)象改變,而且對DNA損傷的誘導(dǎo)不依賴活性氧簇的產(chǎn)生。安石榴苷還促進(jìn)DNA損傷應(yīng)答相關(guān)蛋白ATM的磷酸化,然而對ATR的磷酸化無明顯影響。ATM抑制劑KU-55933能逆轉(zhuǎn)安石榴苷對BCPAP細(xì)胞存活率的抑制作用,說明ATM參與介導(dǎo)安石榴苷誘導(dǎo)的BCPAP細(xì)胞死亡。最后部分探究安石榴苷對BCPAP細(xì)胞衰老的影響及相關(guān)機(jī)制。細(xì)胞粒徑測定及粒度分析、β-半乳糖苷酶活性檢測、細(xì)胞周期及相關(guān)蛋白水平檢測等結(jié)果表明,安石榴苷可誘導(dǎo)細(xì)胞衰老,且具有劑量依賴效應(yīng)。通過分析衰老相關(guān)分泌表型IL-8,IL-6,IL-1β的mRNA水平,我們發(fā)現(xiàn)安石榴苷無法誘導(dǎo)IL-8表達(dá),但可明顯上調(diào)IL-6和IL-1β的表達(dá)水平,且具有濃度依賴性。此外,安石榴苷無法誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(以毒胡蘿卜素為陽性對照藥物)。進(jìn)一步的研究顯示安石榴苷激活了NF-κB通路,并通過該通路正調(diào)控IL-6和IL-1β的表達(dá)。NF-κB還參與介導(dǎo)安石榴苷誘導(dǎo)的BCPAP細(xì)胞衰老和死亡。綜上所述,本研究證明了安石榴苷通過誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡以及DNA損傷和細(xì)胞衰老來抑制乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細(xì)胞的生長存活,其中涉及到MAPK,mTOR,ATM,NF-κB等通路。安石榴苷有望成為治療甲狀腺癌的新興藥物。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

它的化學(xué)分子式為 C48H28O30，相對分子質(zhì)量達(dá)到9]。安石榴苷具有多個(gè)親水性羥基，因而有著良好的水溶解性，可被水解為石榴皮鞣素和鞣花酸，石榴皮鞣素又進(jìn)沒食子酸[11]。安石榴苷還可溶于甲醇等有機(jī)溶劑[12]。在酸下，安石榴苷的穩(wěn)定性較差，易降解為鞣花酸等物質(zhì)[13]。包括安石榴苷在內(nèi)的鞣花單寧類物質(zhì)既可被直接吸收至過腸道微生物的生物轉(zhuǎn)化作用變?yōu)榛钚源x物而被間接的皮中所含安石榴苷的量不盡相同，范圍在 39.8 ~121.5 m mg/g[15]。安石榴苷目前僅能通過天然提取的方式獲得。

3 結(jié)果與討論榴苷對乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細(xì)胞的毒性研究榴苷對甲狀腺癌 BCPAP 細(xì)胞的抑制作用定安石榴苷對 BCPAP 細(xì)胞的抑制作用，我們用不同濃度安石榴）刺激 BCPAP 細(xì)胞 24 h（另設(shè) SC 對照）后，先鏡像觀察，從細(xì)析其存活情況。圖 3-1 顯示，與 SC 相比，隨著安石榴苷作用濃顯減少，說明細(xì)胞的生長受到抑制，高濃度組（50，100 μmol/L

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2718275