【摘要】：目的:基于名中醫(yī)臨床經(jīng)典名方的傳承,開發(fā)糖腎康處方水丸劑型的醫(yī)療機構(gòu)制劑的新藥研究。以糖腎康水丸劑的藥效學(xué)及其代謝組學(xué)的系統(tǒng)性相關(guān)研究,為該制劑在臨床上治療和預(yù)防糖尿病腎病的作用機制提供理論研究基礎(chǔ)。方法:1.根據(jù)該經(jīng)典處方臨床上使用習(xí)慣和處方組成藥味的特點,結(jié)合中藥水丸制備工藝的特性,針對處方中水煎煮的工藝路線,采用三因素三水平L_9(3~4)正交試驗對水煎煮加水量、煎煮時間及煎煮次數(shù)主要影響因素進行考察,利用高效液相色譜法測定處方中黃芪的代表性組分黃芪甲苷的提取率與水煎煮的總固形物重量綜合加權(quán),統(tǒng)計學(xué)處理優(yōu)化提取工藝最佳路線。在提取工藝的研究基礎(chǔ)上,針對糖腎康水丸進行制劑學(xué)研究,制定糖腎康水丸的成型制劑工藝,根據(jù)三批中試原料投料量和制劑成品合格率偏差對制劑工藝驗證。采用薄層色譜法對制劑中處方藥味專屬性鑒別,建立符合醫(yī)療機構(gòu)制劑的糖腎康水丸質(zhì)量標準。2.結(jié)合藥效學(xué)研究,采用基于UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)的代謝組學(xué)研究方法,對大鼠尿液小分子內(nèi)源性代謝組分以正負離子模式掃描檢測供試品,m/z 100~1500;利用PLS-DA(偏最小二乘法-判別分析)檢測糖腎康丸對治療糖尿病腎病大鼠尿液和血清潛在生物標記物含量的影響,從代謝通路角度探討糖腎康丸干預(yù)治療糖尿病腎病的作用機理。結(jié)果:1.經(jīng)過三批中試工藝驗證試驗,糖腎康水丸的最佳成型工藝:取處方標示量中黃芪的半量,與處方中茯苓、烏梅、蒼術(shù)、山藥、川芎等其余藥味粉碎成細粉,備用;處方中剩余的半量黃芪,與處方中其余黃精、山茱萸、地黃、水蛭等藥味加水10倍量,煎煮2次,每次2小時,水煎煮液濾過,濾液合并,將濾液濃縮至相對密度1.25-1.30(60℃)的浸膏,將浸膏與前述備用藥粉混勻,干燥,粉碎成細粉;制備水泛丸制劑,稱取起模用藥粉量14%,起模,泛水丸,用水量45%,制成的糖腎康濃縮水丸,三批水丸成品率與投藥量比均在誤差范圍內(nèi),工藝穩(wěn)定。2.對糖腎康水丸建立符合醫(yī)院自身質(zhì)控條件的醫(yī)療機構(gòu)制劑質(zhì)量標準的研究,對處方中黃芪、川芎、烏梅、茯苓進行薄層色譜鑒別。各鑒別的藥味專屬性成分的分離度Rf值均符合比移值范圍,各藥味的陰性對照制劑均無干擾。3.糖腎康丸各給藥組與模型組比較,糖腎康丸各給藥組與模型組比較,能明顯降低空腹血糖值(FBG)、糖化血紅蛋白(GHB)含量,以中藥中劑量預(yù)防組效果最好;能夠明顯減少尿微量白蛋白(U-mAlb)量,以中藥中劑量預(yù)防組的作用最好;能夠減少血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),以中劑量組效果最明顯,而對血β2微球蛋白(β2-MG)的含量的影響各組之間差異不顯著。通過對腎臟組織病理學(xué)的觀察,糖腎康丸治療組(高、中、低)腎小球硬化程度減輕,系膜細胞和基質(zhì)增生降低,GBM及腎小管無病變,接近于正常組;但腎小球系膜基質(zhì)仍輕度增多,中劑量組相對較好。4.DN模型大鼠尿液中10個內(nèi)源性生物標記物主要通過以下途徑作用:氨基酸代謝通路,能量代謝通路、核苷酸代謝(嘌呤代謝通路)。糖腎康中劑量組的大鼠尿液中的標記物基本含量都趨近于假手術(shù)組的方向回調(diào),與模型組相比,糖腎康劑量組回調(diào)8個標記物,厄貝沙坦組回調(diào)7個標記物。結(jié)論:1.經(jīng)工藝驗證,以黃芪甲苷提取量為測定指標,與原藥材含量比較,水提取工藝黃芪甲苷的轉(zhuǎn)移率均達到60%以上。同時,將處方中粘性較大的藥材采用水提取工藝,既可以作為泛水丸的粘合劑,又可以除去部分雜質(zhì),并減少臨床服用劑量,達到滿足臨床用藥的需求。其制劑的質(zhì)量標準方法可行,能夠保證對該醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)制劑糖腎康水丸劑的質(zhì)量控制。2.糖腎康丸對早期糖尿病腎病模型大鼠各項指標的改變具有一定的改善和治療作用。3.糖腎康丸可改善糖尿病腎病引起的代謝紊亂,可能是通過調(diào)節(jié)氨基酸代謝通路,能量代謝通路、核苷酸代謝等通路的代謝擾動達到其治療作用,可從代謝通路的角度揭示其治療作用機理。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5;R283.6
【圖文】：

實驗旨在建立基于氣相色譜“全”揮發(fā)性代謝物的代謝組學(xué)分析對糖尿病的治療效果、時間和劑量效應(yīng)，同時分析了患者服藥前間的生化指標[61]。為建立基于氣相色譜的“全”揮發(fā)性代謝物的代謝組學(xué)分析方法發(fā)至干，加入內(nèi)標采用硅烷化衍生試劑，形成硅烷基產(chǎn)物。實驗胺作溶劑，經(jīng)實驗優(yōu)化衍生試劑與溶劑的比例以 1 ：1 為宜。8樣中含羥基、羧基、氨基、巰基等基團的化合物轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物圖 2 給出氣相色譜分析正常人和患者尿樣的指紋圖譜。研究采衍生的處理方法，可以檢測到比有機酸代謝輪廓分析更多的色譜出，這兩類樣品存在一些差異，其中 20～30min 區(qū)域大量代謝物在選定條件下平行進樣 5 次，選取共有的 7 個典型色譜峰，考示，這些峰的保留時間和峰面積的 RSD 值分別小于 0.40%和 3.所建立的指紋圖譜具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

圖 3 糖尿病患者與對照組尿樣 PCA 分析A.PCA 的三位得分矩陣圖（■：對照，▲：DM2 患者）；B.PCA 的表 3 區(qū)分糖尿病患者和正常人的潛在標記物實驗建立了尿樣全揮發(fā)性代謝物的代謝組學(xué)分析方法，處理方

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王興;田力銘;李春香;郝玉杰;王桂英;檀金川;;糖尿病腎病的中醫(yī)病機研究進展[J];中國中醫(yī)急癥;2015年12期

2 韓雅純;孫林;;糖尿病腎病治療的循證醫(yī)學(xué)新進展[J];中華腎病研究電子雜志;2015年05期

3 程莉;王佑民;劉佳;;吸煙對2型糖尿病男性患者血糖控制的影響[J];安徽醫(yī)藥;2015年08期

4 顧媛媛;李殿明;徐紅英;陳大忠;;雙黃連粉針劑UPLC-MS指紋圖譜的建立及聚類分析[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2015年06期

5 閆映竹;杜聯(lián);;淺談古代中醫(yī)學(xué)對糖尿病腎病的認識[J];河北中醫(yī);2015年05期

6 麻麗娜;孫新宇;;“毒損腎絡(luò)”與糖尿病腎病炎癥機制的相關(guān)性[J];中醫(yī)學(xué)報;2015年04期

7 郭潤;韓穎;程斌;;中醫(yī)藥治療糖尿病腎病研究進展[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2015年03期

8 施旭光;鄒忠杰;吳美音;曾元桂;連至誠;黃曼婷;龔夢鵑;;補中益氣湯治療慢性淺表性胃炎脾氣虛證的代謝組學(xué)研究[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2014年04期

9 徐丁潔;徐洪;趙舒;曹穎;董玉山;成秀梅;杜惠蘭;;基于GC-TOFMS的虛寒證原發(fā)性痛經(jīng)患者尿液代謝組學(xué)[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2013年13期

10 馬建;傅靜波;崔淑玫;李永華;程妍;;糖腎康飲對糖尿病腎病大鼠腎組織AGES、PKC表達的影響[J];中國中醫(yī)藥科技;2012年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 孫曉峰;基于代謝組學(xué)技術(shù)的妊娠期糖尿病中醫(yī)證候的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2017年

2 門麗慧;黃芩和黃芩—梔子藥對治療糖尿病腎病的代謝組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2017年

3 依秋霞;益氣解毒活絡(luò)復(fù)方防治早期糖尿病腎病大鼠腎損傷的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 邵雪;基于HPLC/TripleTOF-MS/MS技術(shù)慢性乙型肝炎感染不同階段的代謝組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2012年

5 高曉霞;桂枝茯苓膠囊的代謝組學(xué)與藥代動力學(xué)研究[D];沈陽藥科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張曉冬;杜仲壯骨顆粒制劑學(xué)及藥效學(xué)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 馮楚文;糖腎康飲治療早期糖尿病腎病的臨床療效觀察及對VEGF的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2017年

3 張璐;高脂飲食中添加菊粉對小鼠腸道菌群及其代謝產(chǎn)物的影響[D];清華大學(xué);2017年

4 曹彬彬;糖腎康飲治療早期糖尿病腎病的臨床療效觀察及對血清MCP-1的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

5 鄭小平;糖腎康飲治療早期糖尿病腎病的臨床療效觀察及對TNF-α的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 姚春艷;糖腎康飲治療早期糖尿病腎病的臨床療效觀察及對hs-CRP的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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本文編號：2714603