【摘要】：目的:研究ICS Ⅱ對LPS誘導的星形膠質細胞炎癥反應的影響,并探索其可能的作用機制。方法:體外分離新生SD大鼠腦皮質組織提取原代星形膠質細胞并進行培養(yǎng)。將星形膠質細胞分為空白組、空白+ICS Ⅱ高濃度組(20 μM ICS Ⅱ)、模型組(1 μg/mL LPS)、模型+ICS Ⅱ低濃度組(1 μg/mL LPS+5 μM ICS Ⅱ)、模型+ICS Ⅱ中濃度組(1μg/mL LPS+10 μM ICS Ⅱ)、模型+ICS Ⅱ高濃度組(1 μg/mL LPS+20 μM ICS Ⅱ)、模型+地塞米松組(1 μg/mL LPS+1 μM DXMS)。ICSⅡ(5,10,20 μM)或DXMS(1 μM)預處理星形膠質細胞1 h后,繼續(xù)與脂多糖共同作用24 h。采用MTT法檢測ICS Ⅱ作用于星形膠質細胞的安全濃度范圍,確定安全濃度后再觀察ICS Ⅱ對LPS誘導的星形膠質細胞炎癥反應的影響;采用ELISA法檢測星形膠質細胞中TNF-α、IL-1β、Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Griess法檢測星形膠質細胞中NO的水平;采用蛋白免疫印跡技術檢測COX-2、iNOS、I1κB-α、NF-κB(p65)(胞核)、NF-κB(p65)(胞質)、BACE1和APP的蛋白表達,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子對接技術模擬ICS Ⅱ與BACE1蛋白的結合情況。結果:ICS Ⅱ(0-50μM)對星形膠質細胞無毒性作用。模型組較空白組星形膠質細μ胞中TNF-α、IL-1β和NO水平均顯著上升(P0.05);細胞炎癥相關蛋白COX-2、iNOS、NF-κB(p65)(胞核)、BACE1及淀粉樣前體蛋白APP表達升高(P0.05);IκB-α、NF-κB(p65)(胞質)表達顯著降低(P0.05);NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明顯上升(P0.05)。給予ICS Ⅱ能夠明顯降低TNF-α、IL-1β和NO水平(P0.05),此外,ICS Ⅱ顯著下調炎癥相關蛋白COX-2、iNOS、NF-κB(胞核)、BACE1及淀粉樣前體蛋白APP的表達(P0.05),明顯上調NF-κB(胞質)和IκB-α蛋白表達(P0.05);同時,顯著降低NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P0.05),對LPS誘導的IκB-α降解、NF-κB活化及細胞核易位均具有顯著的抑制作用。結論:在本實驗條件下,ICS Ⅱ通過調節(jié)IKK/IκB/NF-κB/BACE1信號通路對LPS誘導的星形膠質細胞炎癥發(fā)揮保護作用。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

５０、１００、２００和４００邋ｐＭ）作用于細胞２４邋ｈ、４８邋ｈ和７２邋ｈ，當藥物濃度為０？５０邋ｐＭ濃逡逑度時，與空白組細胞活力對比，差異無統(tǒng)計學意義。因此，確定０￣５０ｐＭ濃度是ＩＣＳ逡逑ＩＩ的安全濃度范圍（圖２Ａ－Ｃ）。本研宄在前期研究的基礎上，充分考慮藥物的有效逡逑性和安全性后，確定實驗中ＩＣＳ邋ＩＩ的作用濃度為５、１０、２０邋ｐＭ，并確定本實驗中逡逑ＤＸＭＳ的作用濃度為１邋ｐＭ。逡逑１７逡逑

型組較空Ｓ組細胞中ＮＯ水平顯著上升，當給予不同濃度的ＩＣＳ邋ＩＩ作用后，給藥組逡逑較模型組ＮＯ水平顯漕下調并呈濃度依賴性＾提示ＩＣＳ邋ＩＩ可顯著減少ＬＰＳ誘導刺激逡逑的星形膠質細胞中ＮＯ的產生（圖４）0逡逑１４－｜逡逑＾１２＂邋＃逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ＋２０邋ＬＰＳ邋＿５邐１０邐２０邋ＤＸＭＳ邋卩Ｍ逡逑￣ＩＣＳ邋ＩＩ￣邐＋邋ＩＣＳ邋ＩＩ逡逑圖４邋ＩＣＳ邋ＩＩ減少ＬＰＳ誘導刺激后星形膠質細胞中ＮＯ的水平？用ＬＰＳ邋（１咫／ｍＬ）和ＩＣＳ邋ＩＩ邋（５，１０逡逑和２０ｇＭ）或ＤＸＭＳ（１邋ｇＭ）處理星形膠質細胞２４ｈ；邋ＮＯ水平（ｎ＝５）；與對照組相比，＊＊Ｐ＜０．０１；逡逑與模型組對比＜０．０５，邋＃＃Ｐ＜邋０．０１。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４邋ＩＣＳ邋ＩＩ邋ｒｅｄｕｃｅｓ邋ＮＯ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．邋Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ逡逑ｗｅｒｅ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＬＰＳ邋（１邋｜ｘｇ／ｍＬ）邋ｗｉｔｈ邋ＩＣＳ邋ＩＩ邋（５，邋１０邋ａｎｄ邋２０邋｜ｘＭ）邋ｏｒ邋ＤＸＭＳ邋（１邋ｊｘＭ）邋ｆｏｒ邋２４邋ｈ．邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ逡逑ｏｆ邋ＮＯ邋（ｎ邋＝邋５）．邐＜０．０１邋ｖｅｒｓｕｓ邋ｕｎｔｒｅａｔｅｄ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｃｅｌｌｓ；邋＃Ｐ邋＜邋０．０５

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