【摘要】：憂遁草作為我國一種重要的中草藥,在抗炎、抗氧化、抗病毒、抑菌、抗腫瘤等方面具有很好的功效。通過植物組織培養(yǎng)的方式,優(yōu)化憂遁草培養(yǎng)條件,使其快速繁殖,是憂遁草可持續(xù)發(fā)展的有效途徑之一。本研究的目的是實(shí)現(xiàn)憂遁草的微繁并對其部分活性物質(zhì)進(jìn)行分離鑒定。主要內(nèi)容包括:(1)通過改變固體培養(yǎng)條件下的激素配比、培養(yǎng)基類型、蔗糖濃度、NO_3~-/NH_4~+、磷源濃度,觀察憂遁草組培苗的生長情況并測量莖高及腋芽的誘導(dǎo)率,確定最適合憂遁草組培苗生長的培養(yǎng)條件。(2)利用憂遁草帶腋芽的莖段進(jìn)行叢生芽及根的誘導(dǎo),探究不同的培養(yǎng)基類型、激素種類及濃度配比對叢生芽和根的誘導(dǎo)的影響,確定最佳的叢生芽和根誘導(dǎo)培養(yǎng)條件。(3)通過改變液體培養(yǎng)條件,實(shí)現(xiàn)憂遁草組培苗的微觀無土快繁,建立合適的液體培養(yǎng)體系。(4)對憂遁草實(shí)生苗與組培苗進(jìn)行活性物質(zhì)總黃酮的提取純化,并進(jìn)行抑菌性和抗氧化性試驗(yàn),比較兩者之間總黃酮含量及抑菌能力和抗氧化能力的差異性。主要研究結(jié)果如下:1.憂遁草生長及腋芽誘導(dǎo)最優(yōu)培養(yǎng)條件為:改良的MS培養(yǎng)基(40 mmol·L~(-1)KNO_3+10 mmol·L~(-1) NH_4NO_3+3 mmol·L~(-1) KH_2PO_4,其他條件不變)+蔗糖30 g·L~(-1)+瓊脂粉6 g·L~(-1)+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.8 mg·L~(-1),pH 6.0,憂遁草生長最快,腋芽誘導(dǎo)率最大。2.憂遁草叢生芽誘導(dǎo)最優(yōu)培養(yǎng)條件為:MS+蔗糖30 g·L~(-1)+瓊脂粉6 g·L~(-1)+6-BA0.8 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1),pH 6.0,憂遁草叢生芽誘導(dǎo)數(shù)最多。3.憂遁草根誘導(dǎo)最優(yōu)培養(yǎng)條件為:1/2 MS+蔗糖30 g·L~(-1)+瓊脂粉6 g·L~(-1)+IBA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1),pH 6.0,憂遁草生根數(shù)較多,根系發(fā)達(dá)。4.憂遁草液體微繁最優(yōu)培養(yǎng)條件為:改良的1/2 MS培養(yǎng)基(20 mmol·L~(-1) KNO_3+5mmol·L~(-1) NH_4NO_3+1.5 mmol·L~(-1) KH_2PO_4,其他條件不變)+蔗糖20 g·L~(-1)+瓊脂粉6g·L~(-1)+IBA 1.0 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.8 mg·L~(-1)+KT 0.2 mg·L~(-1),pH 6.0。憂遁草葉片蔥綠,根系發(fā)達(dá),生長旺盛。5.用75%乙醇對憂遁草總黃酮進(jìn)行粗提,測得憂遁草實(shí)生苗總黃酮含量為13.08±0.15 mg·g~(-1)。憂遁草組培苗中的總黃酮的含量是實(shí)生苗中總黃酮的含量的1.3倍,為17.22±0.31 mg·g~(-1)。經(jīng)AB-8型大孔樹脂純化,憂遁草實(shí)生苗總黃酮I的含量達(dá)到60.56%±0.70%。憂遁草組培苗總黃酮II的含量達(dá)到65.62%±0.53%。經(jīng)抑菌性和抗氧化性試驗(yàn),總黃酮I和總黃酮II對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用,并對DPPH自由基、羥基自由基都有良好的清除能力。憂遁草組培苗提取的總黃酮II在各方面的性質(zhì)都要好于憂遁草實(shí)生苗提取的總黃酮I。因此,通過組織培養(yǎng)的方式培育憂遁草,不僅對憂遁草的產(chǎn)業(yè)化種植提供種苗基礎(chǔ),其在藥理方面的研究也有進(jìn)一步的開發(fā)價值。
【學(xué)位授予單位】：大連工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S567;R284
【圖文】：

第一章 緒論第一章 緒論hus nutans），又稱鱷嘴花、柔刺草、沙植物[1]，是一種灌木狀的草本植物，莖呈形或卵狀形，頂端漸尖，基部稍偏斜，兩面更長，成熟期大概為 3-9 個月（如圖 1.1

第二章 材料和方法選用產(chǎn)地馬來西亞的憂遁草實(shí)生苗莖段為外植體（圖 2.1），去除葉片，經(jīng) 75%乙醇簡易消毒，用剪刀剪成 5-6 cm 的小段，每段均有多個節(jié)點(diǎn)。采用 L9（33）正交表設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，選用自來水、10%次氯酸鈉、0.1%氯化汞三個因素（表 2.5）。消毒過程：自來水沖洗→75%乙醇浸泡 30 s→無菌水沖洗 2 次→10%次氯酸鈉浸泡→無菌水沖洗 2次→0.1%氯化汞（添加 3-5 滴吐溫 20）浸泡→無菌水清洗 4 次，用無菌濾紙吸干后放于接種盤中。將莖段兩端部分剪去并剪成 2-3 cm 的莖段，每段需有一個節(jié)點(diǎn)，用鑷子將莖段接種于培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種 3 個莖段，每個試驗(yàn)處理接種 10 瓶，重復(fù) 3 次。將接種后的培養(yǎng)基放于溫度 25 ℃、光照強(qiáng)度 1500 lx、光照時間 12 h/d 的培養(yǎng)室中培養(yǎng)30 d，每 5 d 觀察培養(yǎng)基染菌情況并統(tǒng)計(jì)，最后利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定憂遁草外植體最佳消毒滅菌方案。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2713568