發(fā)布時(shí)間：2020-06-14 19:07

【摘要】：目的:本專題以傳統(tǒng)古籍文獻(xiàn)“射干用堇竹葉煎煮,從午時(shí)至亥時(shí),漉出,日干用之”為理論依據(jù),制備射干炮制品,分別從化學(xué)成分含量、抗炎活性、血清生化指標(biāo)及體內(nèi)藥物吸收的角度分析射干生品及炮制品的差異,探討堇竹葉炮制射干的目的,為射干醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化提供科學(xué)依據(jù)。材料與方法:1.采用紫外-可見分光光度法測(cè)定炮制前后射干總黃酮含量,比較生品及炮制品總黃酮含量差異。2.采用超高效液相色譜系統(tǒng)(UPLC),以色譜柱:ACQUITY UPLC?BEH C18(2.1mm×50mm,1.7μm),流動(dòng)相:0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)-含0.5%甲基-β-環(huán)糊精的0.1%磷酸水溶液(C)三相梯度洗脫,流速:0.2m L·min-1,柱溫40℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm為色譜條件,同時(shí)測(cè)定炮制前后射干藥材主要有效成分射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素及白射干素的含量,分析射干生品及炮制品各成分含量差異。3.以雄性大鼠為動(dòng)物模型,按體重隨機(jī)分成空白組、模型組、陽(yáng)性藥組、射干生品組及射干炮制品組,采用灌胃給藥方式,連續(xù)給藥7天,于末次給藥后30min在大鼠左足趾處注射1%的角叉菜膠,測(cè)定角菜膠致炎后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠的足體積,計(jì)算足趾腫脹率,采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件將各給藥組與模型組進(jìn)行組間t檢驗(yàn),探討射干生品及其炮制品對(duì)大鼠足趾腫脹的抑制作用。4.將大鼠隨機(jī)分成3組,灌胃給予射干生品、射干炮制品以及等體積的生理鹽水,連續(xù)給藥7天,在末次給藥后采集血清樣品,測(cè)定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的含量,探討射干生品及炮制品對(duì)血液生化指標(biāo)的影響。5.選擇比格犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,單次灌胃給予射干炮制品,利用HPLC-MS方法測(cè)定血清中射干苷和鳶尾黃素在比格犬體內(nèi)不同的血藥濃度,采用DAS2.0藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,并與前期課題組射干生品的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較。結(jié)果:1.總黃酮含量結(jié)果顯示,射干炮制品比生品總黃酮含量減少9.89%。2.單體活性成分含量結(jié)果顯示,射干生品及炮制品中射干苷的含量為5.849mg·g-1、3.102mg·g-1,野鳶尾苷16.74mg·g-1、7.801mg·g-1,鳶尾黃素0.9770mg·g-1、0.8385mg·g-1,鳶尾甲黃素A 1.040mg·g-1、0.7862mg·g-1,鳶尾甲黃素B 0.4290mg·g-1、0.3221mg·g-1,野鳶尾黃素6.992mg·g-1、4.595mg·g-1,次野鳶尾黃素1.433mg·g-1、1.175mg·g-1,白射干素0.3392mg·g-1、0.2725mg·g-1;與生品比較,炮制品中8種活性成分含量均呈下降趨勢(shì),分別減少46.96%、53.40%、15.90%、24.40%、24.92%、34.28%、18.00%、19.66%,且制品在8min鐘保留時(shí)間左右有新異黃酮成分產(chǎn)生,提示堇竹葉炮制射干可能會(huì)導(dǎo)致射干化學(xué)成分改變。3.大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與模型對(duì)照組比較,射干生品及炮制品均顯著抑制了大鼠的足趾腫脹(P0.05,P0.01),提示射干生品及射干炮制品均有體內(nèi)抗炎作用;但其炮制品與生品無(wú)顯著差異(P0.05),表明炮制后射干沒有增加抗炎活性。4.血清中ALT和AST實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:空白組ALT與AST含量分別為24.34±10.0U·L-1、26.41±7.10U·L-1;生品中ALT和AST含量分別為37.96±17.2U·L-1、42.91±18.4U·L-1;炮制品中ALT和AST含量分別為23.11±13.2U·L-1、27.74±13.8U·L-1。射干組大鼠血清中AST、ALT含量顯著高于空白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明射干生品有升高AST、ALT的作用;炮制品組AST和ALT含量均接近空白組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),射干炮制品組與射干生品組比較,AST和ALT含量顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明射干炮制品有減少AST、ALT的作用。5.藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用LC-MS建立炮制品射干中射干苷和鳶尾黃素分析方法,使2種成分分離良好,檢測(cè)范圍分別為0.0977~31.25ng·m L-1、0.1114~35.63ng·m L-1,低、中、高三個(gè)濃度批內(nèi)及批間精密度、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)均符合要求。血清中2種成分的藥代動(dòng)力學(xué)最佳模型為二房室模型,射干炮制品的主要藥動(dòng)參數(shù)為:射干苷的Tmax(h)為1.5±0.62,Cmax(ng·m L-1)為5.678±3.723,炮制品中鳶尾黃素Tmax(h)為3.25±1.38,Cmax(ng·m L-1)為16.83±2.78,與前期課題組灌胃給予比格犬射干生品射干苷與鳶尾黃素結(jié)果比較,炮制品組射干苷和鳶尾黃素的Tmax(h)與生品組比較均無(wú)顯著性差異(P0.05),炮制品組射干苷和鳶尾黃素的Cmax與生品組比較均有顯著性差異(P0.05),其中炮制品組射干苷的Cmax顯著低于射干生品組,炮制品組鳶尾黃素的Cmax略低于生品組。結(jié)論:通過(guò)對(duì)堇竹葉炮制前后射干的化學(xué)成分含量、體內(nèi)抗炎活性及血液生化指標(biāo)ALT、AST的檢測(cè)結(jié)果分析射干炮制后無(wú)明顯增效作用,但能減少大鼠對(duì)肝脾的損傷,因此推測(cè)射干與堇竹葉炮制是一種以減毒作用為主的炮制方法。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R283
【圖文】：

遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 2017 屆碩士學(xué)位論文置 5mL 量瓶中，用 70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別作為炮制前后射干藥材的供試品溶液。2.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇[6]取射干苷對(duì)照品及供試品溶液適量，置 1cm 吸收池中，以 70%乙醇為隨行空白溶劑，分別于紫外分光光度計(jì) 200～400nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果表明，供試品溶液及射干苷對(duì)照品溶液均在 265nm 附近處有最大吸收，因此選擇在 265nm 波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，見圖 1-1-1。

圖 1-1-2 射干苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線度試驗(yàn)取射干炮制品 0.25g，制備供試品溶液，分別精密吸取 6 份，于 265n度。結(jié)果 RSD=2.90%（n=6）。結(jié)果表明，本方法的精密度良好。結(jié)表 1-1-3 精密度試驗(yàn)結(jié)果數(shù) 1 2 3 4 5 6度 0.443 0.428 0.450 0.424 0.442 0.41% 2.90性試驗(yàn)供試品溶液，于室溫下，分別放置 0、2、4、6、8、10h 測(cè)定吸光度溶液在 10h 內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD=1.95%（n=6）。結(jié)果見表 1-1-4。表 1-1-4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2713224