【摘要】：中醫(yī)理論認為臨床常用中藥黃芪蜜炙可增強其補中益氣、升陽固表等作用,從而廣泛用于脾肺氣虛、中氣下陷之證。課題組前期的蜜炙黃芪干預脾氣虛證大鼠藥效學實驗表明蜜炙品較生品能更好的改善模型組大鼠的氣虛體征和生理生化指標。并通過黃芪蜜炙前后的化學成分研究發(fā)現(xiàn)毛蕊異黃酮苷、黃芪甲苷和黃芪皂苷I的含量均有所增加,因此將這三種成分確定為蜜炙黃芪炮制特征成分。本研究應用代謝組學技術進行上述炮制特征成分的藥效學研究,并結合網(wǎng)絡藥理學探討其作用機制。方法:通過勞倦傷脾加限制飲食的造模方法建立脾氣虛證大鼠模型�？疾禳S芪甲苷,黃芪皂苷I和毛蕊異黃酮苷對脾氣虛證大鼠體征,白細胞數(shù)、淋巴細胞數(shù)和細胞因子等生理生化指標的影響;應用基于UPLC-Q-TOF/MS和~1H-NMR的血清和尿液代謝組學篩選藥效相關的標記物和代謝通路,并評估蜜炙黃芪炮制特征成分的藥效;采用網(wǎng)絡藥理學的方法篩選蜜炙黃芪炮制特征成分的潛在作用靶點。結果:(1)淋巴細胞數(shù)、白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、血清D-木糖吸收值及體征得分在脾氣虛證大鼠中顯著的降低(P0.05)說明脾氣虛證模型構建成功。(2)黃芪甲苷,黃芪皂苷I和毛蕊異黃酮苷干預脾氣虛證大鼠可顯著改善其氣虛體征得分、D-木糖吸收值、脾指數(shù)和胸腺指數(shù),提高脾氣虛證大鼠的淋巴細胞數(shù)、白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量。同時使脾氣虛證大鼠細胞因子IL-6和TNF-α的表達降低而IFN-γ表達升高。經(jīng)毛蕊異黃酮苷和黃芪甲苷干預后的大鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和血常規(guī)相關指標的恢復程度優(yōu)于皂苷I;黃芪甲苷抑制TNF-α和IL-6的表達,促進IFN-γ的表達作用優(yōu)于其它特征成分。(3)血清代謝組學分析篩選出18個藥效相關的潛在標記物,主要為磷脂類和膽堿類物質(zhì),如溶血磷脂酰膽堿和磷脂酰膽堿等;尿液代謝組學分析篩選出23個藥效相關的潛在標記物,主要為氨基酸類物質(zhì),如絲氨酸、肌酸酐、馬尿酸、犬尿酸等。血清和尿液中共同篩選的標記物為左旋肉堿。標記物主要涉及的代謝通路是色氨酸代謝通路,三羧酸循環(huán),苯丙氨酸代謝,花生四烯酸代謝,甘油磷脂代謝,氨基酸代謝等。蜜炙黃芪及炮制特征成分均能恢復上述標記物的含量且接近正常組水平,其中蜜炙黃芪組毛蕊異黃酮苷組黃芪甲苷組黃芪皂苷I組。(4)網(wǎng)絡藥理學研究共篩選了29個炮制特征成分的潛在作用靶點,其中黃芪甲苷有7個,黃芪皂苷I有12個,毛蕊異黃酮苷有10個。這些靶點分別為MIF、ALDH2、AMH、DNMT1、MAPK14等。經(jīng)靶標代謝分析發(fā)現(xiàn)其與蛋白合成,能量代謝,色氨酸代謝,炎癥反應和脂質(zhì)代謝有關。結論:蜜炙黃芪炮制特征成分具有改善脾氣虛證的作用且能通過調(diào)節(jié)細胞因子的免疫應答來提高脾氣虛證大鼠的免疫功能。其作用機制與調(diào)控花生四烯酸代謝和甘油磷脂代謝提高機體的免疫功能,調(diào)控色氨酸代謝、三羧酸循環(huán)和氨基酸代謝促進機體能量供應和蛋白合成有關。毛蕊異黃酮苷調(diào)控的靶點主要參與蛋白合成,能量代謝和嘌呤代謝途徑;黃芪甲苷和皂苷I調(diào)控的靶點主要參與炎癥反應與氨基酸代謝。基于UPLC-Q-TOF/MS和~1H-NMR的代謝組學結合網(wǎng)絡藥理學和相關生物信息學分析方法為蜜炙黃芪及其特征成分的藥效研究提供了新的思路。
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

論文總體研究思路和內(nèi)容框架示意圖

圖 2-1 生理指標的熱圖分析2.4.2 蜜炙黃芪炮制特征成分的藥效學評價模型構建成功，對模型組大鼠隨機分組，分別為黃芪生品組、炙品組、毛蕊異黃酮苷組、黃芪甲苷組、皂苷 I 組和模型對照組。正常組和模型組蒸餾水給藥給藥組分別藥液干預兩周。給藥期間按表 2-1 統(tǒng)計癥狀得分。并記錄大鼠體重，臟器指數(shù)，血常規(guī)檢查結果，細胞因子(IL-6，TNF-α，IFN-γ)在各組間的變化。2.4.2.1 體重變化，癥狀得分和臟器指數(shù)藥物干預后的體重變化、癥狀得分及臟器指數(shù)的變化見表 2-3。由表可知，蜜炙黃芪、黃芪生品、黃芪甲苷、皂苷 I 和毛蕊異黃酮苷干預脾氣虛證大鼠后體重顯著增加且與模型組相比具有顯著性的差異（P<0.01）；模型組癥狀得分與正常組具有顯著性差異（P<0.05），而藥物干預后，癥狀得分接近正常組水平，以

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本文編號：2713265