【摘要】：高速逆流色譜(High-speed counter-current chromatography,HSCCC)起源于上個(gè)世紀(jì)80年代,已經(jīng)被廣泛用于天然產(chǎn)物、生物醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)食品及化工材料等領(lǐng)域的分離純化研究中,逐漸發(fā)展成為一種高效而又成熟的分離純化技術(shù),具有制備量大、回收率高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。油橄欖葉(Olea europaea L.)為木犀科木犀欖屬常綠喬木植物油橄欖的干燥葉,其主要活性成分為其中所含的多酚類化合物。目前,對油橄欖葉在藥用、食用及日用等方面的研究正處于發(fā)展階段,本論文主要采用離線二維高速逆流色譜技術(shù)對油橄欖葉中具有多種生理活性的多酚類化合物進(jìn)行了分離制備并開展了相關(guān)研究,其主要研究內(nèi)容如下:1.本章節(jié)建立應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)從油橄欖葉中快速分離制備橄欖苦苷的方法。以從甘肅省隴南地區(qū)采集的油橄欖葉為研究對象,系統(tǒng)考察了溶劑系統(tǒng)、流速、進(jìn)樣濃度等分離參數(shù)對高速逆流色譜分離效果的影響。結(jié)果表明,以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-氯仿(1:19:1:19:0.4,v/v)作為兩相溶劑系統(tǒng),上相作為固定相,下相作為流動(dòng)相;在轉(zhuǎn)速900 rpm,流動(dòng)相流速1.5 mL·min~(-1),進(jìn)樣濃度20 mg·mL~(-1)條件下從油橄欖葉中成功分離得到橄欖苦苷,純度可達(dá)到90%以上。該方法簡便、快速、回收率高,為高效分離制備油橄欖葉中的橄欖苦苷提供了技術(shù)支持。2.本章節(jié)以油橄欖葉中的2種主要有效成分-橄欖苦苷和木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷為目標(biāo)化合物,系統(tǒng)考察HEMW(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水系統(tǒng))溶劑系統(tǒng)在體積比為1:19:1:19、1:9:1:9、1:9:2:8、1:9:3:7、1:6:1:6、1:5:1:5等不同比例時(shí)組成的9種不同極性的兩相溶劑系統(tǒng)對目標(biāo)化合物分離的影響,探討目標(biāo)化合物極性和溶劑系統(tǒng)極性對HSCCC分離油橄欖葉中多酚類化合物分離效果的影響。結(jié)果表明,油橄欖葉中的多酚類化合物橄欖苦苷、木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷隨著溶劑系統(tǒng)的極性的減小,其分離效果呈現(xiàn)先增強(qiáng)后減弱的趨勢,在最佳的分離條件下,分離制備所得橄欖苦苷、木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷的純度按照HPLC歸一化法檢測,分別為90.8%和92.5%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為HSCCC溶劑系統(tǒng)快速篩選及提高HSCCC在復(fù)雜體系中分離制備目標(biāo)化合物的效率提供了技術(shù)支持。3.本章節(jié)主要采用由HEMW(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水)系統(tǒng)組成新型的基于9×9表溶劑系統(tǒng)篩選的方法應(yīng)用于HSCCC分離油橄欖葉中多酚類化合物橄欖苦苷、木犀草素-4-O-β-D-葡糖糖苷及羥基酪醇。在HEMW系統(tǒng)按照不同比例組成的9×9表中隨機(jī)地選擇4種溶劑系統(tǒng),測定3種目標(biāo)物在4種溶劑體系中的K值并在LogK值和溶劑系統(tǒng)數(shù)之間構(gòu)建相關(guān)的線性關(guān)系,通過線性關(guān)系篩選出最佳溶劑系統(tǒng)HEMW(1.5:8.5:1.8:8.2,v/v)進(jìn)行HSCCC分離油橄欖葉并優(yōu)化了流速、轉(zhuǎn)速及進(jìn)樣量等分離條件。結(jié)果表明,以HEMW(1.5:8.5:1.8:8.2,v/v)為溶劑系統(tǒng),流速為1.5 mL·min~(-1)、轉(zhuǎn)速為950rmp、進(jìn)樣量為20 mg·m L~(-1)從500 mg油橄欖葉提取物中分離得到45.8 mg橄欖苦苷、17.7mg木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷及6.8 mg羥基酪醇且三種化合物純度都大于90%。本研究體現(xiàn)了9×9表溶劑系統(tǒng)篩選在HSCCC分離中的高效性和可行性,極大地提高了HSCCC分離時(shí)溶劑篩選的效率。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284
【圖文】：

高速逆流色譜分離油橄欖葉中的多酚類化合物研究保留時(shí)間約為 235 min 到 300 min，而當(dāng)流速為 2.0 mL·min-1時(shí)，橄欖苦苷的保留時(shí)為 175 min 到 225 min。表明隨著流速增加，橄欖苦苷的保留時(shí)間減少，且峰形變將收集得到的含有橄欖苦苷的餾分用 HPLC 檢測。結(jié)果顯示，當(dāng)流動(dòng)相流速為mL·min-1時(shí)，分離得到的橄欖苦苷純度達(dá)到 93.8%，而在流動(dòng)相流速為 2.0 mL·min得到的橄欖苦苷純度為 88.1%，表明隨著流速增加，分離得到的化合物純度降低，文獻(xiàn)報(bào)道的降低流速可以提高目標(biāo)化合物分離度是一致的[21]。經(jīng)過綜合考慮分離時(shí)樣品純度，選擇分離時(shí)流動(dòng)相流速為 1.5 mL·min-1，此時(shí)，HSCCC 固定相保留率為

圖 1-2 不同進(jìn)樣量橄欖苦苷 HSCCC 色譜圖（A：進(jìn)樣量為 5 mg·mL-1；B：進(jìn)樣量為 10 mg·mL進(jìn)樣量為 20 mg·mL-1；D：進(jìn)樣量為 40 mg·mL-1）Fig.1-2 HPLC chromatogram of different sample size (A: 5 mg·mL-1;B:10 mg·mL-1;C: 20 mg·mL-1;mg·mL-1)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2712901