【摘要】：高致病性流感病毒對人類造成了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生威脅。盡管已有可用疫苗,但由于耐藥病毒株的出現(xiàn),仍需要抗病毒藥物來有效地控制疾病進(jìn)展和病毒傳播。在本研究中,莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮是從中藥莪術(shù)分離出來的三種主要活性物質(zhì),發(fā)現(xiàn)其能夠抑制流感病毒復(fù)制,進(jìn)一步探究化合物的結(jié)構(gòu)活性部位和體內(nèi)的相互作用機(jī)制,找到作用的靶點和相關(guān)通路,從而為流感治療提供新的依據(jù)。我們通過體外實驗檢測了藥物對細(xì)胞生長的影響,發(fā)現(xiàn)在一定藥物濃度內(nèi),對細(xì)胞沒有毒性作用。通過瓊脂糖凝膠電泳、半定量PCR、定量PCR、基因報告實驗等檢測藥物抗病毒能力是否具有廣譜性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在5種病毒中,藥物對H1N1病毒作用穩(wěn)定并呈劑量依賴性。通過定量PCR檢測到藥物作用于病毒的侵入和復(fù)制階段。在細(xì)胞免疫和病毒滴度檢測中,發(fā)現(xiàn)藥物處理后能夠抑制病毒NP蛋白表達(dá),病毒粒子減少。通過減少血清、血細(xì)胞中病毒滴度和減輕肺組織病變,發(fā)現(xiàn)藥物對H1N1感染的小鼠具有保護(hù)作用,主要作用在感染的早期階段。三種藥物中,吉馬酮的抗病毒效果最佳。繼而應(yīng)用基因芯片技術(shù)和定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析,尋找吉馬酮可能作用的基因、蛋白及機(jī)制,并通過分子生物學(xué)實驗對有意義的基因、蛋白進(jìn)行驗證。倍半萜類化合物——莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮——具有抗流感病毒的作用,其中吉馬酮的藥效最為顯著。藥物可以影響病毒的侵入和復(fù)制階段,抑制病毒NP蛋白表達(dá)、減少病毒粒子。質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析,吉馬酮能夠下調(diào)病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的TAP1表達(dá)來負(fù)調(diào)控固有免疫應(yīng)答。研究結(jié)果初步揭示了吉馬酮抗H1N1流感病毒的作用機(jī)制,為吉馬酮在抗流感病毒的臨床應(yīng)用開發(fā)方面提供了一定的理論支持。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
【圖文】：

莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮對 MDCK、293T 及 A549 細(xì)胞增殖影響。A 為三種 24h 和 48h 對 MDCK 細(xì)胞增殖的影響；B 為三種化合物分別在 24h 和 48h 對 胞增殖的影響；C 為三種化合物分別在 24h 和 48h 對 A549 細(xì)胞增殖的影響。、三種化合物對 H1N1 的抑制作用術(shù)油藥理活性強(qiáng)、高效、安全，具有抗病毒、抗腫瘤、抗菌、增強(qiáng)19,20]。藥物與病毒共同感染 293T 細(xì)胞 24 h 后，半定量 PCR 檢測結(jié)果夠影響 H1N1 病毒復(fù)制（圖 1.2A）。實驗結(jié)果表明，這三種化合物對

圖 1.2 莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮對 H1N1 流感病毒的抗病毒作用，并呈劑量依賴性。A 和 B分別通過瓊脂糖凝膠電泳和定量 PCR 檢測了化合物對 H1N1 病毒的抑制作用；C、D 和 E 分別檢測了這三種化合物劑量的依賴性，化合物濃度越高抗病毒能力越強(qiáng)。3、藥物抗病毒能力具有選擇性在發(fā)現(xiàn)莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮等藥物對 H1N1 病毒的抑制作用后，我們想進(jìn)一步了解該類藥物對其它病毒是否具有相同的作用。利用研究院已有的另外 4種病毒 CVB3、SeV、DENV E、VSV，分別通過熒光顯示、核酸凝膠電泳及定量PCR 等方法，檢測藥物對這四種病毒的抗病毒作用�？滤_奇病毒是一種腸病毒，單股正鏈小 RNA 病毒，基因長度 7.4kb，是一類常見的經(jīng)呼吸道和消化道感染人體的病毒，感染后人會出現(xiàn)發(fā)熱、打噴嚏、咳嗽等感冒癥狀。圖 1.3 是藥物對 CVB3 病毒在 293T 細(xì)胞中的抗病毒作用。由于病毒攜帶GFP，感染細(xì)胞后可直接在熒光顯微鏡下觀察。圖1.3A為藥物與病毒處理293T細(xì)胞 24 h 后，在倒置熒光顯微鏡下觀察到的結(jié)果。并通過半定量 PCR 方法對結(jié)果

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本文編號：2712622