【摘要】：本論文在文獻(xiàn)研究的基礎(chǔ)上,歸納總結(jié)了我國益母草屬植物資源的分布情況,對(duì)其資源化學(xué)研究和資源利用現(xiàn)狀進(jìn)行了考察�；诖嘶A(chǔ),結(jié)合中藥資源化學(xué)研究思路對(duì)我國益母草藥用資源進(jìn)行了系統(tǒng)研究和分析,提出了益母草資源開發(fā)利用的新策略。本論文共分為四章內(nèi)容。第一章從我國益母草屬植物的本草學(xué)研究、植物資源研究進(jìn)展以及益母草資源化學(xué)研究三個(gè)方面對(duì)益母草進(jìn)行文獻(xiàn)綜述。益母草記載于我國歷代本草中,化學(xué)成分種類繁多,含有豐富的生物堿類、二萜類、黃酮類、酚酸類、苯丙素類、核苷類、氨基酸類和無機(jī)元素成分。其中生物堿類成分是益母草中資源價(jià)值較高的活性成分,是其發(fā)揮藥效的最主要成分,有婦科圣藥之名,同時(shí)具有心血管保護(hù)、抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等藥理作用。益母草資源分布于全國各地,資源利用率不高,資源化學(xué)成分研究仍有大量工作,本章通過文獻(xiàn)查閱,以期為益母草資源化學(xué)的深入研究和資源開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)與科學(xué)依據(jù)。第二章對(duì)不同產(chǎn)地益母草中各類資源性化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究與分析評(píng)價(jià)。采用響應(yīng)曲面法優(yōu)化了益母草的提取工藝,并采用UPLC-TQ/MS2、ICP-MS等技術(shù)分析了不同產(chǎn)地益母草中的生物堿類、黃酮類、酚酸類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜苷類、氨基酸類、核苷類化學(xué)成分以及無機(jī)元素的含量,明確了不同產(chǎn)地益母草之間可利用資源性化學(xué)成分的差異,為益母草資源的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)和新的研究方向。(1)生物堿類、黃酮類、酚酸類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜苷類特征性化學(xué)成分分析結(jié)果:采用UPLC-TQ/MS2技術(shù)建立了同時(shí)測(cè)定益母草中24種化學(xué)成分的方法,應(yīng)用該方法測(cè)定了38批不同產(chǎn)地益母草樣品中3個(gè)生物堿類成分、4個(gè)酚酸類成分、5個(gè)苯丙素類成分、1 1個(gè)黃酮類化學(xué)成分以及1個(gè)環(huán)烯醚萜苷類成分的含量并進(jìn)行聚類分析和主成分分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)益母草中24種化學(xué)成分含量豐富,其中鹽酸水蘇堿的含量最高為20.41～433.41μg·g-1,湖北益母草中總生物堿類成分含量最高為564.89μg·g-1,河南益母草中總酚酸類成分含量最高177.61 μg·g-1,吉林益母草中總苯丙素類成分和總環(huán)烯醚萜苷類成分的含量均為最高,分別為20.91 μg·g-1和2.89 μg·g-1,浙江益母草中總黃酮的含量最高為211.33μg·g-1。結(jié)合聚類分析和主成分分析表明,由于益母草收集自中國的南部、西部、北部和東部等不同產(chǎn)地,而這些產(chǎn)地之間生態(tài)環(huán)境和水土人文的差異可能導(dǎo)致了益母草中特征性資源成分的差異,為益母草資源的針對(duì)性開發(fā)利用提供了研究基礎(chǔ)。(2)核苷類和氨基酸類資源性化學(xué)成分分析結(jié)果:采用UPLC-TQ/MS2技術(shù)建立了同時(shí)測(cè)定益母草中22種核苷類和21種氨基酸類資源性成分的方法。將該方法應(yīng)用于采集自11個(gè)產(chǎn)地38批次益母草中核苷類及氨基酸類成分的含量測(cè)定,同時(shí)進(jìn)行主成分分析。結(jié)果表明益母草中含有豐富的核苷類及氨基酸類成分,不同產(chǎn)地之間核苷類及氨基酸類成分種類幾乎沒有差異,22種核苷類和21種氨基酸類成分幾乎都能檢測(cè)到,而不同產(chǎn)地含量卻存在顯著差異。在22種核苷中,Ura含量最高,平均含量達(dá)到36.96 μg·g-1,Adeo(0.06μg·g-1)和Camp平均含量最低。采集自湖北的益母草中總核苷含量最高,分別為495.33μg·g-1、493.96μg·g-1、483.83 μg·g-1,甘肅的益母草樣品總核苷含量最低,僅有16.98μg·g-1。在21種氨基酸中,Asn含量最高,平均含量達(dá)到95.43 μg·g-1,Hpro(0.93 μg·g-1)平均含量最低;另外,采集自湖北的益母草中總氨基酸含量最高,分別達(dá)到了 3013.22 μg·g-1、2136.42 μg·g-1、2124.07 μg·g-1,安徽的益母草樣品中總氨基酸的含量同樣較高,為1158.12μg·g-1,其余樣品含量均在100～600μg·g-1左右,而甘肅的益母草樣品含量最低,僅有80.86μg·g-1。結(jié)合主成分分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),湖北、河南和安徽的益母草含量高于其他產(chǎn)地,且有一定的相似性。因此,各樣品中的氨基酸和核苷類成分含量差異可能受地域影響較大,而湖北、安徽和河南則可能是因?yàn)槠湟呀?jīng)逐漸成為中國益母草的最大產(chǎn)區(qū),其生態(tài)環(huán)境和水土氣候更適合益母草的生長(zhǎng)和核苷類成分的積累。本節(jié)提供了益母草資源利用的新道路,為益母草的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。(3)無機(jī)元素分析結(jié)果:采用ICP-MS建立了同時(shí)測(cè)定益母草中27種無機(jī)元素的方法。應(yīng)用該方法,以Ge、In、Bi為內(nèi)標(biāo),測(cè)定38批不同產(chǎn)地益母草中27種無機(jī)元素的含量。建立無機(jī)元素指紋譜,并進(jìn)行聚類分析、主成分分析和元素相關(guān)性分析。結(jié)果表明益母草中無機(jī)元素含量豐富,但不同產(chǎn)地?zé)o機(jī)元素間含量差異較大。其中,K元素含量最高,平均含量達(dá)68682.57 μg·g-1,其次偏高的元素有Mg(5291.45 μg·g-1)、P(5281.62 μg·g-1)、Al(1249.85 μg·g-1)、Fe(1198.43μg·g-1)、Na(229.57 μg·g-1)、Ba(115.74 μg·g-1)、Mn(97.34 μg·g-1);其他無機(jī)元素的含量均低于80.00 μg·g-1,Be元素(0.11 μg·g-1)最低。K、P、Mg元素在每個(gè)產(chǎn)地益母草中都有很高的含量,而廣西樣品中的Mn元素含量偏高,甘肅樣品中的Na、Al、和Ti元素含量偏高,吉林樣品中的Pb、Zn、Sr元素則偏高。重金屬及有害元素中,所有產(chǎn)地Hg含量均超標(biāo);除Hg外,只有廣西、甘肅和吉林三地的重金屬全部超標(biāo),其余產(chǎn)地均符合要求。142對(duì)元素呈顯著正相關(guān),表明它們?cè)谖辗e累過程中具有相互協(xié)同、促進(jìn)吸收的作用。結(jié)合主成分分析和聚類分析結(jié)果,不同產(chǎn)地益母草中的無機(jī)元素含量差異可能是和產(chǎn)地的生態(tài)環(huán)境(氣候、溫度、降水等)相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)了益母草中各類無機(jī)元素包括重金屬及有害元素,既為藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了新的評(píng)價(jià)指標(biāo),也為益母草的藥材流通、質(zhì)量控制、品質(zhì)保證和臨床安全用藥提供了理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。(4)益母草提取工藝優(yōu)化結(jié)果:采用響應(yīng)曲面法結(jié)合超聲輔助提取的方法,對(duì)5種影響因素(超聲時(shí)間、超聲溫度、乙醇濃度、料液比和超聲功率)進(jìn)行考察,以益母草提取率、抗凝血活性、抗氧化活性為指標(biāo),優(yōu)化益母草提取工藝。結(jié)果顯示,益母草最佳提取工藝為:超聲時(shí)間為38.2 min,超聲溫度為30℃,乙醇濃度為48.9%,料液比為30 mL·g-1,超聲功率為500 W。表明響應(yīng)曲面法結(jié)合超聲輔助提取是一種有效可行的從益母草中提取抗凝血和抗氧化成分的方法,同時(shí)也為益母草資源的針對(duì)性開發(fā)提供了研究基礎(chǔ),為益母草的臨床用藥提供了新的思路和方向。第三章建立了益母草藥材的指紋圖譜和益母草優(yōu)質(zhì)藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并對(duì)益母草的適宜采收期及干燥加工方法進(jìn)行了優(yōu)選。(1)益母草指紋圖譜的建立:益母草HPLC指紋圖譜方法的色譜條件為:采用Waters SymmetryShieldTM C18(4.6×250mm,5 μm)色譜柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫:(0-10%A,0-10 min;10-10%A,10-13 min;10-14%A,13-30 min;14-21%A,30-50 min;21-95%A,50-75 min;95-5%A,75～80 min)。流速:1.0 mL·min-1,柱溫30℃,進(jìn)樣體積10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm。結(jié)果確定了 12個(gè)共有特征峰,并鑒定出其中3個(gè)峰,分別為紅景天苷、鹽酸益母草堿和丁香酸。同時(shí)規(guī)定優(yōu)質(zhì)益母草中以鹽酸益母草堿為對(duì)照,鹽酸益母草堿與紅景天苷的比值不得小于1.02且不得大于1.40。本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC方法可對(duì)不同產(chǎn)地益母草進(jìn)行整體性的評(píng)價(jià),簡(jiǎn)便快速、穩(wěn)定可靠,可用于益母草資源質(zhì)量控制,促進(jìn)益母草資源的開發(fā)利用,并為其他中藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究提供參考。(2)益母草優(yōu)質(zhì)藥材標(biāo)準(zhǔn)建立:對(duì)益母草進(jìn)行水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查,進(jìn)行薄層鑒別以及對(duì)其中4種化學(xué)成分定量分析來對(duì)益母草進(jìn)行優(yōu)質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。結(jié)果顯示各檢查項(xiàng)中基地益母草均優(yōu)于市售益母草;薄層色譜鑒別中基地與市售益母草均斑點(diǎn)清晰、分離度良好,區(qū)別在于基地益母草斑點(diǎn)更多,與對(duì)照藥材相似度更高,而市售益母草斑點(diǎn)參差不齊;HPLC色譜中鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿、紅景天苷和丁香酸4種成分分離良好,在線性范圍呈良好的線性關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)所建立的益母草藥材優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)在藥典標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了提升,增加了部分指標(biāo),能夠快速且準(zhǔn)確地反映益母草的整體品質(zhì),為益母草藥材的質(zhì)量控制、市場(chǎng)流通及資源循環(huán)利用提供了理論基礎(chǔ)及科學(xué)依據(jù)。(3)益母草適宜采收期的確定:本實(shí)驗(yàn)中比較了7月初至9月底共13個(gè)采收時(shí)間下益母草中4種化學(xué)成分含量的高低。以鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿、丁香酸和紅景天苷的含量為指標(biāo)來確定益母草的最佳采收期。結(jié)果顯示,8月初為益母草藥材的最佳采收時(shí)間。(4)益母草適宜干燥加工方法的優(yōu)選:本實(shí)驗(yàn)中比較了益母草現(xiàn)代干燥加工方法(熱風(fēng)干燥、紅外干燥、微波干燥)與傳統(tǒng)干燥加工方法(曬干、陰干)對(duì)益母草品質(zhì)的影響。以24種資源性化學(xué)成分(3個(gè)生物堿類成分、4個(gè)酚酸類成分、5個(gè)苯丙素類成分、11個(gè)黃酮類化學(xué)成分以及1個(gè)環(huán)烯醚萜苷類成分)的含量為指標(biāo)來確定益母草最優(yōu)加工方法。結(jié)合主成分分析和樣品逼近理想值排序法分析顯示,熱風(fēng)70℃干燥為益母草最佳干燥加工方法。
【圖文】：

圖２－１－２混合對(duì)照品（Ａ）和樣品（Ｂ）的總離子流圖及２４個(gè)化學(xué)成分的提取離子色譜（Ｃ）逡逑圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１－２邋ＴＩＣ邋ｏｆ邋ｍｉｘｅｄ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ邋（Ａ），邋ｓａｍｐｌｅｓ邋（Ｂ）邋ａｎｄ邋ｅｘｔｒａｃｔｅｄ邋ｉｏｎ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ逡逑ｏｆ邋ｍｉｘｅｄ邋ｓｔａｎｄａｒｄｓ邋ｏｆ邋２４邋ｃｈｅｍｉｃａｌ邋ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ邋（Ｃ）邋ｏｆ邋Ｌｅｏｎｕｒｕｓ邋ｊａｐｏｎｉｃｕｓ邋Ｈｏｕｔｔ．逡逑１．葫蘆巴堿；２．鹽酸水蘇堿；３．益母草苷；４．紅景天苷；５．綠原酸；６．對(duì)羥基苯甲酸；７．咖啡酸；８．香草酸；逡逑９．邋丁香酸；１０．蘆丁；邋１１．異槲皮苷；１２．金絲桃苷；１３．毛蕊花糖苷；１４．山奈酚－３－０－蕓香糖苷；１５．阿魏酸；逡逑１６．苯甲酸；１７．芫花素；１８．芹菜素；１９．山奈酚；２０．異鼠李素；２１．橙皮素；２２．漢黃芩素；２３．鹽酸益母草逡逑堿；２４．槲皮素逡逑２．５方法學(xué)考察逡逑２．５．１線性關(guān)系、檢測(cè)限（Ｌ０Ｄ）和定量限（ＬＯＱ）逡逑取“２．１”項(xiàng)下不同濃度混合對(duì)照品溶液，按照“２．３”、“２．４”項(xiàng)下條件測(cè)定。以系列對(duì)照品逡逑濃為坐Ｘ，，應(yīng)縱坐Ｙ，化成分出回

圖２－１－３邋３８批益母草聚類樹狀圖逡逑１－３邋Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋３８邋ｂａｔｃｈｅｓ邋ｏｆ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｏｆ邋Ｌｅｏｍｖ／ｓｙ．ａｐｏｗ．ｃ＜ＣＡ逡逑⑩ｓ助邐０＠邐，邋？八邐？0滴邋Ｙ．涵界邐？ＣＷ邐。（云由ｔ八’、：．ａ逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1

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本文編號(hào)：2711334