【摘要】：目的:本課題構(gòu)建慢性應(yīng)激型卵巢早衰大鼠模型并用藥物木尼孜其進(jìn)行治療,對前期工作中基于iTRAQ結(jié)合LC/MS/MS技術(shù)篩查出來的慢性應(yīng)激型卵巢早衰大鼠的部分差異性蛋白質(zhì)在卵巢組織中的表達(dá)水平進(jìn)行驗證,為探討慢性應(yīng)激型卵巢早衰大鼠的發(fā)病機(jī)制提供有意義的實(shí)驗數(shù)據(jù)。方法:隨機(jī)選取90只有正常性周期的SD大鼠并從中隨機(jī)選取10只設(shè)為正常組(N組),剩下的80只大鼠設(shè)為慢性應(yīng)激型造模組(CS組),在濕寒且晝夜顛倒的環(huán)境下飼養(yǎng),定期觀察各組大鼠的一般情況(毛發(fā)順滑度度、運(yùn)動、敏捷、體重量、飲水量、食物攝入量等)以及每只大鼠發(fā)情周期的變化,通過觀察一般情況、大鼠發(fā)情周期及定性指標(biāo)(激素FSH、E2、LH水平)來確認(rèn)慢性應(yīng)激模型成立,確認(rèn)后從慢性應(yīng)激型造模組中篩選出成為卵巢早衰的大鼠,分為卵巢早衰組(POF組)、卵巢早衰藥物治療低劑量組(PDL組)、卵巢早衰藥物治療中劑量組(PDM組)、卵巢早衰藥物治療高劑量組(PDH組)(1)采用ELISA法檢測外周血清中β-EP、FSH、E2、LH的含量;(2)卵巢組織形態(tài)學(xué)變化:觀察卵巢組織中卵泡的病理學(xué)改變;(3)采用ELISA法檢測所篩選出來的的差異表達(dá)的蛋白PFN1和CFL1在各組大鼠血清中的含量;用免疫組織化學(xué)方法檢測所篩選的差異表達(dá)蛋白PFN1和CFL1在卵巢中的表達(dá);用RT-PCR法檢測PFN1和CFL1的mRNA在卵巢的表達(dá)量。結(jié)果(1)一般情況觀測:造模期間,慢性應(yīng)激組的大鼠皮毛變的粗糙、失去光澤、活動量明顯減少、反應(yīng)不迅速,并且觀察到疲倦。大鼠的體重及飲水量增加量明顯低于正常組大鼠;食物攝入量的增加量明顯高于正常組大鼠(P0.05);在藥物治療期間大鼠的一般情況及動情周期紊亂的情況得到有效改善。(2)卵巢早衰組(POF組)大鼠的外周血清中E2含量相比于正常組明顯下降(P0.05),FSH和LH含量相比于正常組明顯上升(P0.05),隨著藥物劑量的升高對各組大鼠血清中激素的含量調(diào)節(jié)作用也隨之增強(qiáng)。卵巢早衰組的大鼠血清中β-EP含量相比于正常組的大鼠明顯下降(P0.05),且卵巢早衰藥物治療高劑量組能夠明顯升高血清中β-EP的含量(P0.05)。(3)卵巢組織形態(tài)學(xué)變化:卵巢早衰組(POF組)大鼠未見明顯有腔卵泡、空泡樣變化多及水腫嚴(yán)重,隨著藥物劑量的增加,改善情況也隨之上升,其中高劑量藥物治療組的改善效果最佳。(4)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示差異性PFN1蛋白在卵巢細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)量較在卵巢細(xì)胞核中表達(dá)增多,而在間質(zhì)以及在黃體中低表達(dá)或低表達(dá),PFN1蛋白在卵巢早衰組(POF組)大鼠表達(dá)量較正常對照組(N組)表達(dá)顯著上升(P0.05),各藥物治療組能夠降低其表達(dá);CFL1蛋白在大鼠卵巢細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)量較在卵巢細(xì)胞核中表達(dá)增多,間質(zhì)以及在黃體中不表達(dá)或低表達(dá),CFL1蛋白在卵巢早衰組(POF組)大鼠表達(dá)量較N組表達(dá)顯著上升(P0.05),各藥物治療組能夠降低其表達(dá)。(5)實(shí)時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示:卵巢早衰組(POF組)與正常對照組(N組)比較發(fā)現(xiàn),PFN1和CFL1的mRNA的表達(dá)水平均上升(P0.05),其中各藥物治療組中高劑量藥物治療組能顯著下調(diào)PFN1和CFL1的mRNA表達(dá)水平(P0.05)。結(jié)論:慢性應(yīng)激能夠?qū)е侣殉苍缢サ陌l(fā)生;卵巢的組織病理學(xué)改變以及出現(xiàn)的激素紊亂(E2、FSH、LH)可能是其發(fā)病的重要機(jī)制之一;木尼孜其能夠改善卵巢早衰病變,其藥理作用機(jī)制可能與調(diào)整紊亂的激素水平(E2、FSH、LH)及下調(diào)相關(guān)蛋白PFN1、CFL1的表達(dá)作用有關(guān)。
【圖文】：

注：a：發(fā)情前期；b：發(fā)情期；c：發(fā)情后期；d：發(fā)情間期圖 1 大鼠發(fā)情周期的變化（ 100）Figure 1 Changes of estrus cycle of rats （ 100）2 慢性應(yīng)激型 POF 大鼠模型的復(fù)制2.1 造模期間 般情況的變化

注：正常組（N 組）; 卵巢早衰組（POF 組）;高劑量藥物治療組（PDH 組）;中劑量藥物治療組（PDM 組）;低劑量藥物治療組（PDL 組）圖 12 CFL1 在各組大鼠卵巢組織中的表達(dá)（×200）Figure 12 Expression of CFL1 in ovarian tissue of rats in each group（×200）
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2710701