【摘要】：1.研究背景與目的潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative coloitis,UC)是一種慢性炎癥性結(jié)腸疾病,特征表現(xiàn)為結(jié)腸黏膜由直腸起始并延續(xù)至結(jié)腸近端的大面積潰瘍,UC的疾病過程包括潛伏期與發(fā)作期,臨床常見癥狀有腹痛、腹瀉、膿血便、黏液排出、發(fā)熱、體重減輕等,病程漫長伴隨間歇性發(fā)作,嚴重影響患者生活質(zhì)量,是誘發(fā)結(jié)腸癌的關(guān)鍵因素之一。臨床常用氨基水楊酸鹽如美沙拉嗪等來緩解癥狀,但因副作用強烈無法長期維持治療,亟求新的治療手段。中醫(yī)理論認為,同一種疾病常因病情發(fā)展階段、個人體質(zhì)或所處環(huán)境不同而呈現(xiàn)出不同的病機與證候,應(yīng)對其外在表現(xiàn)進行辯證論治后,根據(jù)不同的治則治法來對證用藥。潰瘍性結(jié)腸炎屬中醫(yī)診療理論中的“泄瀉”范疇,常在疾病的不同階段表現(xiàn)出不同的證候,如大腸濕熱型、肝郁脾虛型、脾腎陽虛型等,因此多采用不同的方劑進行治療。黃芩湯源于《傷寒論》,用于治療大腸濕熱型泄瀉較為對證;四神丸見于《證治準繩》,用于脾腎陽虛泄瀉尤為適宜;痛瀉要方載于《丹溪心法》,針對肝郁脾虛型泄瀉療效顯著,上述三方均為臨床治療UC的常用名方。本實驗在中醫(yī)理論思想的指導(dǎo)下,通過構(gòu)建UC動物模型,從炎癥反應(yīng)、腦腸軸調(diào)節(jié)、水運平衡及腸道菌群變化等角度綜合對比黃芩湯、四神丸、痛瀉要方用于UC動物模型的治療作用,并探討其相關(guān)作用機制。2.研究方法與結(jié)果2.1三種復(fù)方影響UC模型大鼠炎癥反應(yīng)的對比研究2.1.1大鼠行為學(xué)體征:利用TNBS混合乙醇造模法制備UC大鼠模型,按體重將大鼠隨機分成正常(Normal)組、模型(Model)組、陽性藥柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine,SASP)組、黃傮湯(HQT)組、四神丸(SSW)組、痛瀉要方(TXYF)組。對除正常組外的其他組別大鼠進行造模,造模二天后灌胃給藥,給藥五天期間持續(xù)觀察并記錄各組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)。根據(jù)行為學(xué)表現(xiàn)評價可知制備UC大鼠模型造模成功;HQT、SSW可改善大鼠行為學(xué)體征,具體表現(xiàn)為進食量增加、活動加快、精神狀態(tài)好轉(zhuǎn),以HQT效果最為顯著,TXYF組大鼠便溏現(xiàn)象無明顯改善。與模型組相比,各組大鼠體重變化未見統(tǒng)計學(xué)差異。2.1.2病理組織學(xué)檢測:對UC大鼠連續(xù)給藥治療五天后,解剖取結(jié)腸。顯微鏡下觀察HE染色后的結(jié)腸組織,發(fā)現(xiàn)HQT、SSW給藥后可減輕大鼠結(jié)腸組織病變情況,使結(jié)腸黏膜炎性浸潤減少、腺體潰瘍減少等,以HQT改善程度最為顯著,TXYF組無明顯改善。2.1.3 Elisa法測定UC大鼠血清內(nèi)炎性因子變化:UC大鼠連續(xù)給藥治療五天后,眼眶取血,分離上層血清后,測定大鼠血清中IL-6、IL-8、PGE2、TNF-a水平。結(jié)果顯示,模型組大鼠血清內(nèi)炎性因子IL-6、IL-8、PGE2、TNF-α含量均顯著高于正常組(P0.05)。與模型組相比,陽性藥SASP組的IL-6、PGE2、TNF-α含量均降低(P0.05),IL-8水平降低最為顯著(P0.01);HQT 組 IL-6、IL-8、TNF-a含量均降低(P0.05),PGE2 含量顯著降低(P0.01);SSW組四種炎性因子含量均降低,但無統(tǒng)計學(xué)差異;TXYF組1L-6、TNF-α含量降低,IL-8、PGE2含量顯著降低(P0.05)。結(jié)果證明HQT可顯著降低大鼠體內(nèi)IL-6、IL-8、PGE2、TNF-α含量,TXYF對IL-8、PGE2有抑制作用,SSW抑炎作用不顯著。2.1.4 RT-PCR法檢測UC大鼠結(jié)腸組織內(nèi)Erkl、p38 mRNA表達:對UC大鼠持續(xù)給藥治療五天后,解剖取結(jié)腸,提取RNA進行RT-PCR檢測。實驗結(jié)果顯示,與模型組相比,陽性藥SASP組、HQT組、SSW組、TXYF組大鼠結(jié)腸內(nèi)Erkl、p38mRNA表達都呈現(xiàn)顯著降低趨勢(P0.01),HQT組降低趨勢最為顯著。2.2聯(lián)合運用Elisa法及免疫組化法檢測UC大鼠結(jié)腸組織內(nèi)腦腸肽變化UC大鼠連續(xù)給藥治療五天后,取眼眶血,解剖取結(jié)腸。Elisa法測定大鼠血清內(nèi)5-HT含量。實驗結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組大鼠血清內(nèi)的5-HT含量顯著降低(PO.01)。與模型組相比,陽性藥和TXYF組5-HT含量明顯升高(P0.05),HQT組、SSW組含量升高但無顯著性差異。利用免疫組化法(Immunoh istochemistry,IHC)檢測UC大鼠結(jié)腸內(nèi)VIP、SP含量。關(guān)于VIP的實驗結(jié)果表明,模型組大鼠結(jié)腸組織內(nèi)的VIP含量相較于正常組出現(xiàn)顯著性降低(PO.01)。與模型組相比,陽性藥SASP組、HQT組、TXYF組VIP含量顯著升高(PO.O 5),SSW組VIP含量升高但無統(tǒng)計學(xué)差異。SP結(jié)果顯示與正常組相比,各給藥組SP含量均降低,但未有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組相比,陽性藥SASP組、HQT組、TXYF組SP含量顯著升高(P0.05),SSW組SP含量升高但未見顯著統(tǒng)計學(xué)差異。表明HQT可促進結(jié)腸內(nèi)VIP、SP含量顯著升高,還可促進5-HT含量升高,但無統(tǒng)計學(xué)差異;SSW有促進三種腦腸肽含量升高的作用,但未見統(tǒng)計學(xué)差異;TXYF可顯著促進三種腦腸肽含量升高。2.3 Western-Blot法檢測UC大鼠結(jié)腸組織水通道蛋白變化:UC大鼠連續(xù)給藥治療五天后,處死并解剖取結(jié)腸,提取蛋白后,檢測結(jié)腸內(nèi)AQP3、AQP4含量。所得實驗數(shù)據(jù)表明,與正常組相比,模型組大鼠結(jié)腸內(nèi)AQP3含量顯著升高(P0.01)。與模型組相比,HQT組AQP3含量顯著降低(P0.01);陽性藥 SASP、SSW 組、TXYF 組 AQP3 含量下降(P0.05)。AQP4檢測結(jié)果表明,與正常組對比,模型組中AQP4含量顯著降低(P0.01)。與模型組相比,陽性藥SASP組、HQT組中AQP4含量顯著升高(P0.05);SSW組、TXYF組AQP4含量未見升高且無統(tǒng)計學(xué)意義。證明HQT可促進結(jié)腸組織內(nèi)AQP3含量顯著下降、AQP4含量顯著升高;SSW可降低結(jié)腸組織內(nèi)AQP3含量,對AQP4含量變化無明顯作用;TXYF能降低結(jié)腸內(nèi)AQP3含量,對AQP4未見明顯作用。2.4 High-throughput sequencing 檢測 UC 大鼠腸道菌群變化:UC大鼠連續(xù)給藥五天后,取大鼠新鮮糞便,在16sMiseqPE300V3-4區(qū)段進行測序和分析。結(jié)果顯示,此次測序微生物信息數(shù)據(jù)量與測序深度足夠充分、樣品物種分布較為均勻,絕大多數(shù)微生物信息能夠被樣本反映;3組復(fù)方中共有OTU數(shù)目為524個,其中共有OTU數(shù)目為207個;與模型組相比,SSW組菌群群落種類與模型組之間相似度較高,HQT、TXYF組菌群落群種類與模型組具有顯著性差異;SSW組菌群群落物種豐富度最高,其次為HQT組,TXYF組菌群物種豐富度與模型組無顯著差異;TXYF組組內(nèi)樣品間相似度最高,其次為SSW組,HQT組組內(nèi)樣品間差異較大;HQT組有益菌含量高于SSW組高于TXYF組;乳桿菌科(f-Lactobacillales)和鏈球菌科(f-peptostreptocaccaceae)為 SSW組顯著差異菌群;普雷沃氏菌科(f-Prevotellaceae)、理研菌科(f-Rikenellaceae)、梭菌屬(g-closlridium-inrtocuum-group)為TXYF組顯著差異菌群;HQT組具有顯著性差異的菌群為毛螺菌科(f-Lachnospiraceae)、瘤胃菌科(f-Ruminococcaceae)、大腸桿菌科(f-Gammaproteobacteria)、大腸桿菌科志賀菌屬(g-Escherichia-Shigella)和紫單胞菌科(f-Porphyromonadaceae)。3.結(jié)論UC的病因至今尚未完全闡明,發(fā)病機制可能涉及炎癥反應(yīng)、腦腸軸互作、水運失調(diào)、腸道菌群紊亂等方面。三種名方在臨床被廣泛用于治療UC,但每種方劑所針對的治療機制及產(chǎn)生的治療作用存在差異。黃芩湯適用于大腸濕熱型泄瀉,即在針對炎癥、水運失調(diào)等方面療效突出;四神丸對應(yīng)于脾腎陽虛型泄瀉,治療作用側(cè)重于調(diào)節(jié)菌群平衡、恢復(fù)腸道功能;痛瀉要方對應(yīng)肝郁脾虛所致泄瀉,即通過調(diào)節(jié)情志、恢復(fù)腦腸軸平衡來達到診療目的。在世界范圍內(nèi)UC的發(fā)病率及患病率隨著時間的延續(xù)而增加的當(dāng)下,本文采用大腸濕熱型泄瀉模型,即現(xiàn)代臨床對應(yīng)的UC模型,通過測定炎性因子及相關(guān)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的通路、腦腸肽、水通道蛋白、腸道菌群等多個指標變量來對比三種復(fù)方在同一模型下的作用,以期更好的闡釋UC發(fā)病機制,指導(dǎo)臨床治療用藥。
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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4 北京中醫(yī)醫(yī)院消化中心 張聲生 趙魯卿;潰瘍性結(jié)腸炎 哪些藥哪些方管用[N];健康報;2016年

5 本報記者 慕欣　王雪敏 魏平;潰瘍性結(jié)腸炎：要診斷 先排查[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

6 袁虎;患潰瘍性結(jié)腸炎要重調(diào)養(yǎng)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2009年

7 伏新順　青海省中醫(yī)院;潰瘍性結(jié)腸炎辨治六型[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

8 張超群 黃智斌;山西研制出治潰瘍性結(jié)腸炎新藥[N];中國醫(yī)藥報;2002年

9 萬同己;潰瘍性結(jié)腸炎與血小板功能狀態(tài)[N];中國醫(yī)藥報;2003年

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