【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,“腸-肝軸”學(xué)說(shuō)近幾年已成為研究肝臟疾病的熱點(diǎn),其中腸黏膜屏障破壞引起了大家的關(guān)注,認(rèn)為菌群失調(diào)、腸黏膜通透性增加、細(xì)菌移位,由此引起腸源性內(nèi)毒素血癥(Intestinal Endotoxemia,IETM)可能在NAFLD的發(fā)病過(guò)程中起重要作用。小檗堿是從中藥黃連中提取的一種異喹啉類生物堿,具有較強(qiáng)的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。研究表明,鹽酸小檗堿能減輕慢性應(yīng)激引起的腸黏膜損傷;能減少嚴(yán)重腹腔感染或膿毒血癥時(shí)炎癥介質(zhì)的表達(dá),從而改善受損的腸黏膜屏障,降低腸壁通透性,我們推測(cè)鹽酸小檗堿可能通過(guò)改善腸黏膜屏障功能對(duì)NAFLD的治療起到一定的效果。目的:建立NAFLD大鼠模型,研究鹽酸小檗堿通過(guò)調(diào)節(jié)腸道免疫屏障對(duì)NAFLD大鼠腸黏膜屏障的作用,為鹽酸小檗堿治療NAFLD提供理論依據(jù)。方法:健康清潔級(jí)雄性SD大鼠33只(200g±10g),隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組(Normal Control Group,N組)、高脂模型組(High Diet Model Group,M組)、鹽酸小檗堿組(Berberine Group,B組)。N組給予普通飼料喂養(yǎng),M組及B組給予高脂飼料喂養(yǎng),12周后,每組處死1只,HE染色觀察肝細(xì)胞脂肪沉積程度確定造模成功。B組給予150mg/(kg.d)鹽酸小檗堿灌胃,N組與M組給予等量生理鹽水,并根據(jù)大鼠體重的變化調(diào)整用藥量,連續(xù)灌胃4周后,麻醉狀態(tài)下腹主動(dòng)脈取血,采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、膽固醇(Total Cholesterol,TC),采用鱟試劑法測(cè)定血清內(nèi)毒素(Endotoxin)水平,留取肝臟組織標(biāo)本,HE染色觀察肝臟病理學(xué)變化;應(yīng)用ELISA法測(cè)定血清白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白細(xì)胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)水平;在距回盲瓣約2 cm處切取小腸數(shù)段,每段2cm留取標(biāo)本。應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白1(Nucleotide-binding Oligomerization Domain1,NOD1)、核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白2(Nucleotide-binding Oligomerization Domain 2,NOD2)、NOD樣受體蛋白3(NOD-like Receptor Protein 3,NLRP3)的表達(dá)水平,應(yīng)用Western-blot檢測(cè)NOD1、NOD2、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、Claudin-4的表達(dá)水平。結(jié)果:1.喂養(yǎng)12周時(shí)M組、B組大鼠體重較N組大鼠體重顯著升高(P0.05);B組和M組大鼠體重?zé)o差異(P0.05)。HE染色結(jié)果顯示M組、B組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)可見脂肪沉積,證明造模成功。2.喂養(yǎng)16周時(shí),即鹽酸小檗堿干預(yù)4周后,M組大鼠的體重較N組大鼠的的體重顯著升高(P0.05);與M組大鼠相比,B組大鼠體重顯著下降(P0.05)。3.喂養(yǎng)16周時(shí),M組大鼠的ALT、AST、TC、TG較N組顯著增高(P0.05);與M組相比,B組大鼠的ALT、AST、TC、TG顯著下降(P0.05)。4.喂養(yǎng)16周時(shí),M組大鼠內(nèi)毒素、IL-1β、IL-18、TNF-α較N組大鼠顯著升高(P0.05);與M組相比,B組內(nèi)毒素、IL-1β、IL-18、TNF-α顯著下降(P0.05)。5.肝臟組織HE染色:N組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞無(wú)脂肪變,與N組大鼠相比,M組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝細(xì)胞腫大,以大泡性脂肪變?yōu)橹?肝細(xì)胞內(nèi)充滿大小不等的脂肪空泡,可見細(xì)胞核被擠向一邊。經(jīng)鹽酸小檗堿治療后B組大鼠肝細(xì)胞腫脹程度減輕,肝細(xì)胞脂肪變減輕,脂肪空泡較少,肝細(xì)胞排列較整齊。6.回腸組織NOD1、NOD2、NLRP3表達(dá)水平:大鼠喂養(yǎng)16周時(shí),RT-PCR及Western Blot結(jié)果顯示M組NOD1、NOD2、NLRP3 mRNA及蛋白表達(dá)較N組均顯著升高(P0.05);B組與M組相比NOD1、NOD2、NLRP3 mRNA及蛋白的表達(dá)均顯著下降(P0.05)。7.Caspase-1蛋白表達(dá):大鼠喂養(yǎng)16周時(shí),Western blot結(jié)果顯示M組Caspase-1蛋白量較N組顯著升高(P0.05);B組與M組相比Caspase-1蛋白量顯著下降(P0.05)。8.Claudin-4蛋白表達(dá):大鼠喂養(yǎng)16周時(shí),Western blot結(jié)果顯示M組Claudin-4蛋白表達(dá)較N組顯著下降(P0.05);B組與M組相比Claudin-4蛋白表達(dá)顯著升高(P0.05)。結(jié)論:1.高脂飲食喂養(yǎng)能成功建立NAFLD大鼠模型,NAFLD大鼠內(nèi)毒素表達(dá)水平增高。2.鹽酸小檗堿可以降低NAFLD大鼠體重,改善肝臟功能,降低血脂,減輕肝臟脂肪變性程度。3.鹽酸小檗堿可以降低NAFLD大鼠內(nèi)毒素水平,降低炎癥因子IL-1β、IL-18、TNF-α水平。4.鹽酸小檗堿抑制腸道黏膜免疫屏障相關(guān)的NOD1、NOD2、NLRP3mRNA及NOD1、NOD2、NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)。5.鹽酸小檗堿提高NAFLD大鼠腸黏膜通透性相關(guān)的Claudin-4蛋白表達(dá)。
【圖文】：

M 組和 B 組肝臟組織 HE 染色（×200）Fig.1 HE staining of liver tissues(×200) in group N, group M and group B

25PCR 分析大鼠喂養(yǎng) 16 周時(shí)各組腸道組織中 N表達(dá)RNA expression of NOD1 using RT-PCR analystissue in different groups fed after 16 weeksNote:*P<0.05 versus N,and #P<0.05 versus
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Kouichi Miura;Hirohide Ohnishi;;Role of gut microbiota and Toll-like receptors in nonalcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年23期

2 Ke-Xin Gan;Chao Wang;Jin-Hu Chen;Chun-Jing Zhu;Guang-Yao Song;;Mitofusin-2 ameliorates high-fat diet-induced insulin resistance in liver of rats[J];World Journal of Gastroenterology;2013年10期

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1 齊雙翡;鹽酸小檗堿對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠腸道菌群影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

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本文編號(hào)：2706173