【摘要】：目的:建立基于植物代謝組學(xué)的液質(zhì)聯(lián)用法對金錢草和廣金錢草中黃酮類化合物進行定性分析比較和差異標(biāo)志物篩選,并對金錢草干預(yù)大鼠腎草酸鈣結(jié)石形成的作用機制進行初步探討。方法:金錢草和廣金錢草藥材各12批,超聲提取,離心取上清液,采用Agilent SB-C_(18)(100 mm×2.1 mm,2.7μm)色譜柱,以0.1%乙酸-乙腈為流動相,梯度洗脫;電噴霧離子源,負離子模式下檢測。所得數(shù)據(jù)經(jīng)Peakview與28種對照品及自建庫二級碎片進行比對,并基于各類型黃酮類化合物裂解規(guī)律進行成分定性分析;經(jīng)MarkerView對原始數(shù)據(jù)進行峰保留時間校正,峰歸一化和剔除同位素峰預(yù)處理后,導(dǎo)入SIMCA-P中進行多元統(tǒng)計分析,篩選VIP值大于5的成分作為兩種藥材的差異標(biāo)志物。采用1%乙二醇和2%氯化銨誘導(dǎo)大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型,隨機分為4組(n=8):空白組、成石組、金錢草小劑量組和金錢草大劑量組,飼養(yǎng)28天后,收集各組大鼠尿液、血清和腎組織,測定24 h尿草酸和檸檬酸含量,ICP-MS法測定尿液和血清中多種化學(xué)元素并對結(jié)果進行PCA分析,觀察各組分布趨勢,顯微鏡下觀察尿液涂片和腎組織切片中草酸鈣結(jié)晶及腎小管擴張情況。結(jié)果:在金錢草和廣金錢草中共鑒定出113種黃酮類化合物(金錢草80種,廣金錢草中61)。此外從對原始數(shù)據(jù)進行VIP值篩選獲得的21種潛在標(biāo)記化合物中鑒定出15種類黃酮化合物(金錢草中6個,廣金錢草中9個)作為各自的差異標(biāo)志物,且發(fā)現(xiàn)篩選出的9種的黃酮-C-苷均存在于廣金錢草中,金錢草中的6種標(biāo)志物均為黃酮醇類及其O-苷。金錢草干預(yù)大鼠腎草酸鈣結(jié)石結(jié)果發(fā)現(xiàn),與成石組相比,金錢草大劑量給藥組大鼠24 h尿量、尿檸檬酸濃度顯著升高,尿草酸濃度顯著降低。與空白組相比(P0.05),成石組大鼠尿液中Ca、Ni、As、Se、Pb、Hg顯著升高,血清中Mg、Cr、Fe、As、Cd顯著降低;而與成石組相比(P0.05),大劑量給藥組尿液中Al、Mn、Fe、Ni、Se、Mo、Pb、Hg顯著降低,血清中Fe、Cu、As顯著升高。顯微觀察結(jié)果表明,金錢草能減少腎結(jié)石大鼠尿液及腎組織中草酸鈣結(jié)晶,緩解腎小管擴張。結(jié)論:本研究首次采用基于植物代謝組學(xué)的UHPLC-Q-TOF-MS/MS法對金錢草和廣金錢草中黃酮類化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定和比較,為兩藥材的質(zhì)量評價和藥理作用機制差異提供化學(xué)基礎(chǔ)。金錢草對腎草酸鈣結(jié)石形成有明顯的抑制作用,其可能的機制是通過排石利尿,補充檸檬酸途徑降低尿液草酸鈣飽和度,且其豐富的多酚化合物可減少氧化應(yīng)激、保護腎上皮細胞以及通過影響體內(nèi)鈣、鎂、釩等多種元素穩(wěn)態(tài),使其趨于正常組水平,干預(yù)腎草酸鈣結(jié)石的形成。
【圖文】：

負離子模式下黃酮-O-苷（a）和黃-C-苷（b）類化合物裂解位置及特征碎片離子的命名Fig.1Nomenclatureadoptedforvarioussaccharidepartsofflavonoid

芹菜素的二級質(zhì)譜圖及其裂解途徑Fig.2TheMS/MSspectrumandfragmentationpathwayofapigenin
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2705897